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中国红豆杉叶浸膏中紫杉烷的分离纯化及成分鉴定

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林产化学与工业 2002年第3期22卷 45-48页

作者：余龙江兰文智华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

以中国红豆杉 [Taxuschinensis(Pilger)Rehd .]叶为原料 ,利用甲醇或乙醇为溶剂制备浸膏。甲醇浸膏中的浆果赤霉素Ⅲ和紫杉醇的含量高于乙醇浸膏。采用萃取和层析方法相结合的分离纯化工艺 ,从甲醇浸膏中获得 10个化合物纯品。利用NMR ,... 详细信息

以中国红豆杉 [Taxuschinensis(Pilger)Rehd .]叶为原料 ,利用甲醇或乙醇为溶剂制备浸膏。甲醇浸膏中的浆果赤霉素Ⅲ和紫杉醇的含量高于乙醇浸膏。采用萃取和层析方法相结合的分离纯化工艺 ,从甲醇浸膏中获得 10个化合物纯品。利用NMR ,IR ,MS和HPLC等方法对其成分进行结构鉴定 ,确定 5个化合物分别为紫杉醇、1 乙酰基 5,7,10 去乙酰基浆果赤霉素I、浆果赤霉素Ⅲ、浆果赤霉素VI和 7,9,10 ,13 去乙酰基浆果赤霉素VI ,HPLC检测它们的纯度相应为 98.4 % ,98.7% ,99.1% ,99.6 5%和 92 .94 %。分离的紫杉醇和浆果赤霉素Ⅲ得率分别为 6 2 .6 %和 57.6 %。这些结果表明所建立的制备及分离纯化的工艺可用于红豆杉叶生产紫杉醇及其前体物。

关键词：成分鉴定红豆杉叶浸膏紫杉烷分离纯化紫杉醇抗癌药物提取

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连续灌注培养红豆杉细胞生产紫杉醇的研究

华中科技大学学报（自然科学版） 2002年第5期30卷 91-93页

作者：兰文智余龙江吴元喜华中科技大学生命科学与技术学院

利用由一圆形柱和三角瓶组成的生物反应器对红豆杉细胞进行连续灌注培养 .结果显示 ,培养基的 pH值 ,糖和磷的变化幅度较平缓 ,细胞的生长期长 ,说明该反应器适于细胞生长 .根据该反应器具有培养液提取简便的特点 ,首次提出诱导子可按... 详细信息

利用由一圆形柱和三角瓶组成的生物反应器对红豆杉细胞进行连续灌注培养 .结果显示 ,培养基的 pH值 ,糖和磷的变化幅度较平缓 ,细胞的生长期长 ,说明该反应器适于细胞生长 .根据该反应器具有培养液提取简便的特点 ,首次提出诱导子可按照培养基中残糖和残磷的体积质量加入 ,而且发现高含量紫杉醇仅发生在特定的残糖和残磷体积质量下 .结果还显示该反应器用于诱导和萃取结合处理细胞 ,与搅拌式和气升式反应器相比 ,能得到较高的生物量和紫杉醇产量 .这些结果表明该反应器可用于连续灌注培养红豆杉细胞生产紫杉醇 .

关键词：红豆杉细胞生物反应器紫杉醇连续灌注培养

黑曲霉及其多糖组分诱导红豆杉叶子产生抗病反应之比较

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植物研究 2003年第1期23卷 72-76页

作者：李默怡余龙江陈超兰文智华中科技大学生命科学技术学院武汉430074

用一种从中国红豆杉树皮内分离得到的黑曲霉及其酸解物多糖组分处理离体红豆杉叶子 ,发现经过两种不同处理的叶子干重和叶绿素含量均比对照下降 ,而丙二醛含量上升 ,但黑曲霉处理的呈现更为明显的趋势。说明多糖和黑曲霉孢子对叶片均有... 详细信息

用一种从中国红豆杉树皮内分离得到的黑曲霉及其酸解物多糖组分处理离体红豆杉叶子 ,发现经过两种不同处理的叶子干重和叶绿素含量均比对照下降 ,而丙二醛含量上升 ,但黑曲霉处理的呈现更为明显的趋势。说明多糖和黑曲霉孢子对叶片均有损伤 ,但多糖造成的损伤较小。多糖组分处理提高酚类物质和可溶性蛋白的含量并激活过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的活性 ,而黑曲霉却导致了相反的现象 ,因此认为多糖组分具有诱导红豆杉叶子产生抗病反应的能力 ,而黑曲霉却具有致病性。

关键词：黑曲霉多糖组分诱导红豆杉叶子叶片抗病反应比较

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红豆杉细胞培养生产紫杉醇产量稳定性的探讨

广西植物 2002年第1期22卷 85-88页

作者：余龙江蔡永君兰文智华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋... 详细信息

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋水仙碱同步处理处于中期的细胞紫杉醇产量高于非同步化细胞 ,而磷酸盐双饥饿同步处理处于间期的细胞紫杉醇产量则相反。这表明紫杉醇产量与培养物的均一性有关 ,且与细胞同步的周期时相有关 ,采用同步化方法来选择合适的细胞周期时相有利于紫杉醇产量的稳定 ,通过比较不同同步化方法处理对细胞生物量和

关键词：红豆杉细胞细胞培养紫杉醇产量稳定性同步化处理诱导子

磷酸戊糖途径的调节对红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响

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植物研究 2002年第2期22卷 201-204页

作者：兰文智余龙江吴元喜华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

在正常的红豆杉细胞悬浮培养过程 ,葡萄糖 - 6-磷酸脱氢酶 (G6PDH)活性的变化趋势与生物量的基本相似。而在chitosan处理的细胞中G6PDH活性升高而生物量下降。 1 0 0mg .L- 1 chitosan和 5 0 0mg .L- 1 chitosan均对细胞G6PDH具有诱导作... 详细信息

在正常的红豆杉细胞悬浮培养过程 ,葡萄糖 - 6-磷酸脱氢酶 (G6PDH)活性的变化趋势与生物量的基本相似。而在chitosan处理的细胞中G6PDH活性升高而生物量下降。 1 0 0mg .L- 1 chitosan和 5 0 0mg .L- 1 chitosan均对细胞G6PDH具有诱导作用 ,且后者的诱导强度较前者的高。乙二醇双 2 氨基乙基醚四乙酸 (EGTA)的加入降低chitosan对细胞G6PDH的诱导程度 ,显示chitosan对G6PDH的诱导需要Ca2 +的参与。谷胱甘肽 (GHS)的处理可反馈抑制chitosan对细胞G6PDH的诱导。通过分析调节后G6PDH的各种活性与细胞中紫杉醇产量的关系 ,认为采用合适的处理方法调节磷酸戊糖途径。

关键词：调节合成红豆杉细胞磷酸戊糖途径细胞生长紫杉醇葡萄糖-6-磷酸脱氢酶

水杨酸对真菌诱导子诱导红豆杉悬浮细胞膜脂过氧化和紫杉醇生物合成的影响

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西北植物学报 2002年第1期22卷 78-83页

作者：兰文智余龙江吴元喜华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

研究了 5 0 mg· L- 1真菌诱导子 (F5) ,5 0 mg· L- 1水杨酸 (SA) ,5 0 mg· L- 1F5+5 0 mg· L- 1SA3种处理 ,对红豆杉悬浮细胞膜脂过氧化和紫杉醇合成的影响。结果表明 :F5和 SA单独处理红豆杉细胞均引起细胞膜脂过氧化。SA+F5联合... 详细信息

研究了 5 0 mg· L- 1真菌诱导子 (F5) ,5 0 mg· L- 1水杨酸 (SA) ,5 0 mg· L- 1F5+5 0 mg· L- 1SA3种处理 ,对红豆杉悬浮细胞膜脂过氧化和紫杉醇合成的影响。结果表明 :F5和 SA单独处理红豆杉细胞均引起细胞膜脂过氧化。SA+F5联合处理可以减轻 F5单独处理细胞所引起的膜脂过氧化程度 ,SA+F5联合处理与真菌诱导子处理相比 ,较大地提高了过氧化物酶的活性 ,得到较多的生物量。3种处理方法均可提高红豆杉细胞紫杉醇产量 ,特别以 F5+SA处理得到产量最高 ,达到 1 1 .5 mg· L- 1,分别为 F5,SA和对照组的 1 .5倍、2 .0倍和7.5倍。结果显示 :在真菌诱导子诱导与水杨酸的联合作用下提高紫杉醇产量。

关键词：红豆杉细胞膜脂过氧化真菌诱导子水杨酸紫杉醇过氧化物酶生物合成悬浮培养

磷脂酶A_2在诱导红豆杉细胞产生活性氧中的作用

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西北植物学报 2004年第7期24卷 1286-1291页

作者：兰文智陈超黄雅芬余龙江华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

对磷脂酶A2(PLA2)在真菌诱导中国红豆杉细胞产生活性氧中的作用进行研究,结果表明:PLA2非特异抑制剂可降低真菌诱导子诱导产生的H2O2。通过钙离子螯合和PLA2特异抑制剂实验,表明参与H2O2产生的PLA2为胞质Ca2+依赖型。对PLA2诱导H2O2产... 详细信息

对磷脂酶A2(PLA2)在真菌诱导中国红豆杉细胞产生活性氧中的作用进行研究,结果表明:PLA2非特异抑制剂可降低真菌诱导子诱导产生的H2O2。通过钙离子螯合和PLA2特异抑制剂实验,表明参与H2O2产生的PLA2为胞质Ca2+依赖型。对PLA2诱导H2O2产生的机理进行分析,发现亚油酸可缓解PLA2抑制剂对诱导的活性氧的抑制作用,而且亚油酸单独处理可导致H2O2的发生,其它的脂肪酸也具有类似诱导H2O2发生的作用。不同离子型的脂肪酸对H2O2产生的影响不同,阴离子型脂肪酸较非离子型脂肪酸更能促进活性氧的发生。这些结果表明,PLA2可能通过产生脂肪酸或其衍生物激活H2O2的产生酶系。

关键词：真菌诱导子脂肪酸磷脂酶A2 活性氧红豆杉细胞

促进紫杉醇合成真菌诱导物制备方法的选择及组分的分离

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武汉植物学研究 2002年第1期20卷 66-70页

作者：兰文智余龙江李为蔡洪喜华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

Four methods were used to prepare four crude elicitors containing different ingredients from mycelia of fungus F 5: (a) Polysaccharides A containing lipids and proteins; (b) Micromolecular polysaccharides B without lipids and proteins; (c) Macromolecular polysaccharides F without lipids and proteins; (d) Polysaccharides H containing proteins but no lipids. The crude preparation B had the highest ability to induce taxol biosynthesis among other preparations did. The crude preparation B was through Sephadex G15 column to separate two compositions: BⅠ whose molecular weight was over 1500 D and BⅡ whose molecular weight between 700～ 1500 D. The BⅡ activity to induce taxol biosynthesis was 2.3 times higher than that of the crude preparation B, while BⅠ hadn’t the activity to induce taxol biosynthesis. By analysis of PAL activity induced by elicitors, we conclude that the changes of PAL activity could be regarded as a useful physiological indicator to select the effective elicitor.

关键词：红豆杉细胞真菌诱导子诱导子制备紫杉醇苯丙氨酸解氨酶合成分离

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脂氧合酶在诱导红豆杉细胞产紫杉醇中的作用

西北植物学报 2004年第10期24卷 1917-1921页

作者：黄雅芬余龙江兰文智杨希华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

对红豆杉悬浮培养细胞中脂氧合酶(LOX)在诱导子诱导紫杉醇合成中的作用进行了探讨。结果表明真菌诱导子处理可提高细胞内LOX的活性和紫杉醇的产量,而诱导前用LOX抑制剂菲尼酮处理,可完全抑制诱导子对LOX活性和紫杉醇合成的诱导作用,说明... 详细信息

对红豆杉悬浮培养细胞中脂氧合酶(LOX)在诱导子诱导紫杉醇合成中的作用进行了探讨。结果表明真菌诱导子处理可提高细胞内LOX的活性和紫杉醇的产量,而诱导前用LOX抑制剂菲尼酮处理,可完全抑制诱导子对LOX活性和紫杉醇合成的诱导作用,说明LOX途径可能参与了紫杉醇的合成过程。外加茉莉酸甲酯也可激活LOX活性和紫杉醇合成,诱导前用菲尼酮处理可抑制诱导子诱导的LOX活性和紫杉醇合成,说明外源茉莉酸甲酯可能是通过激活细胞内LOX途径而启动下游紫杉醇的合成。为了进一步研究脂氧合酶在紫杉醇合成中的作用,我们还对红豆杉细胞脂氧合酶的分布和分子量等性质进行了研究。

关键词：脂氧合酶真菌诱导子紫杉醇