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中国比较医学杂志 2008年第5期18卷 28-31,36,I0005页

作者：高宁全雄志陈炜李万波刘鹏冯娟张连峰秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心遗传中心北京100021

目的建立人α-Synuclein野生型及两个突变型A53T和A30P基因的转基因动物模型,研究α-Synuclein在帕金森病发病过程中的作用。方法构建人α-Synuclein表达载体,利用显微注射法制备人α-Synuclein基因的转基因小鼠。通过PCR方法鉴定转基... 详细信息

目的建立人α-Synuclein野生型及两个突变型A53T和A30P基因的转基因动物模型,研究α-Synuclein在帕金森病发病过程中的作用。方法构建人α-Synuclein表达载体,利用显微注射法制备人α-Synuclein基因的转基因小鼠。通过PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。通过RT-PCR和Western blotting方法鉴定转基因小鼠脑组织中人α-Synuclein mRNA和蛋白表达情况。采用免疫组化鉴定人α-Synuclein在小鼠脑组织中的表达情况。通过Rotatingrod实验评价转基因小鼠的行为改变情况。结果得到表达水平不同的野生型人α-Synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A53T突变型α-Synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A30P突变型α-Synuclein转基因小鼠3个品系。免疫组化显示,转基因小鼠大脑海马、新皮层、纹状体区出现人α-Synuclein阳性标记的细胞。Rotating rod实验结果显示转基因小鼠表现出明显的进行性运动能力障碍。结论建立了转人α-Synuclein基因的帕金森病小鼠模型。

关键词：转基因模型 α-Synuclein 帕金森病突变

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貉血清IgG纯化及抗血清的制备

中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 662-665页

作者：刘先菊杨帆林树柱全雄志刘牧秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗... 详细信息

目的制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。

关键词：亲和层析沉淀貉 IgG

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Cramp转基因小鼠的构建及鉴定

中国比较医学杂志 2010年第9期20卷 12-15页

作者：石桂英全雄志陈显达陈陟阳董伟张连峰鞠振宇中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所北京100021

目的建立系统性表达Cramp转基因模型小鼠,为研究Cramp在衰老中的作用提供模型动物。方法把Cramp cDNA插入系统性表达CMV启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立Cramp转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,用RT-PCR和Western bl... 详细信息

目的建立系统性表达Cramp转基因模型小鼠,为研究Cramp在衰老中的作用提供模型动物。方法把Cramp cDNA插入系统性表达CMV启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立Cramp转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,用RT-PCR和Western blotting方法筛选高表达品系。结果成功构建Cramp cDNA转基因载体,建立了Cramp转基因小鼠,通过RT-PCR和Western blotting方法筛选出3个高表达品系。结论建立了系统表达Cramp转基因小鼠,转入的Cramp基因在骨髓、脾脏、肝脏等组织高表达,为研究Cramp基因在衰老中的作用及机制提供了动物模型。

关键词： Cramp 转基因小鼠衰老

人载脂蛋白C3基因转基因小鼠的建立及血脂变化分析

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中国比较医学杂志 2012年第10期22卷 1-5页

作者：全雄志高翔张旭葛文萍关菲菲董伟张连峰卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院实验动物研究所和北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的制备系统性表达人载脂蛋白C3(APOC3)基因的转基因小鼠,建立高血脂小鼠模型。方法将人APOC3基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOC3转基因C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的... 详细信息

目的制备系统性表达人载脂蛋白C3(APOC3)基因的转基因小鼠,建立高血脂小鼠模型。方法将人APOC3基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOC3转基因C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,血生化分析检测不同月龄转基因小鼠与同龄野生型小鼠的血脂指标,脂肪染色观察肝脏脂肪水平。结果建立了高表达人APOC3基因的转基因小鼠品系;转入的人APOC3基因在血液、肝脏、小肠、肌肉、心脏、肾脏、脾脏中均有明显表达;不同月龄转基因小鼠的血浆甘油三酯水平明显高于同龄野生型小鼠;转基因小鼠的肝脏脂肪含量高于野生型小鼠。结论系统性表达人APOC3基因的转基因小鼠表现高脂血症表型,可以作为高血脂以及高血脂相关的心血管病的工具动物。

关键词：载脂蛋白C3 转基因小鼠甘油三酯高脂血症人APOC3基因

cTnT^(R92Q)转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

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中国比较医学杂志 2008年第5期18卷 5-8,I0002页

作者：董伟冯娟全雄志陈炜祝梅香刘亚莉张连峰中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的建立cTnTR92Q肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR92Q基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR92Q转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR92Q转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜... 详细信息

目的建立cTnTR92Q肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR92Q基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR92Q转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR92Q转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR92Q转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个不同表达水平的cTnTR92Q转基因小鼠品系。转入的cTnTR92Q基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。组织学分析显示cTnTR92Q转基因小鼠心脏变大,心室壁肥厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室壁变厚,收缩期容积和舒张期容积显著缩小,射血分数、短轴缩短率明显增加。结论cTnTR92Q转基因小鼠心脏变大,室壁变厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化以及心肌舒张功能失调,说明成功建立了cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型,为研究肥厚型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 肥厚型心肌病转基因模型基因突变

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长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 641-643,665页

作者：刘先菊杨帆林树柱全雄志张成林秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021 北京市动物园兽医院北京100044

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长... 详细信息

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。

关键词：亲和层析长爪沙鼠 IgG 二级抗体

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两种果子狸血清IgG纯化方法的比较

中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 681-682,I0003,I0004页

作者：刘先菊林树柱杨帆全雄志张成林秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021 北京市动物园兽医院北京100044

目的探讨一种具有简便快捷、高纯度、活性好的果子狸血清IgG纯化方法。方法比较Hitrap Protein A亲和层析和PAGE电泳两种纯化法对果子狸血清IgG的纯化,用PAGE还原电泳和Western-Blot法对IgG作纯度鉴定。结果对Hitrap Protein A纯化的果... 详细信息

目的探讨一种具有简便快捷、高纯度、活性好的果子狸血清IgG纯化方法。方法比较Hitrap Protein A亲和层析和PAGE电泳两种纯化法对果子狸血清IgG的纯化,用PAGE还原电泳和Western-Blot法对IgG作纯度鉴定。结果对Hitrap Protein A纯化的果子狸血清IgG,其活性虽好,但纯度不高;而非还原PAGE电泳所纯化的果子狸血清IgG不但纯度高(>95%)、并具有较强的免疫活性。结论非还原PAGE电泳法纯化果子狸血清IgG,是一种具有高纯度、免疫活性强的纯化方法。

关键词：亲和层析果子狸 IgG SDS-PAGE

London/Swedish双突变APP转基因小鼠的鉴定

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中国比较医学杂志 2008年第5期18卷 24-27,36,I0004页

作者：方瑾马春梅黄澜刘亚莉宗圆媛全雄志李万波秦川中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

鉴定及评价APP双突变阿尔茨海默病的转基因小鼠模型。方法将London/Swedish双突变APP基因插入到PDGF启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695V652I/K596N/M597L双突变转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定APP695双突变转基因小... 详细信息

鉴定及评价APP双突变阿尔茨海默病的转基因小鼠模型。方法将London/Swedish双突变APP基因插入到PDGF启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695V652I/K596N/M597L双突变转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定APP695双突变转基因小鼠的基因表型,RT-PCR和Western blotting检测APP突变基因表达,免疫组化检测APP695双突变转基因小鼠大脑病理改变。水迷宫检测APP695V652I/K596N/M597L转基因小鼠的行为学改变。结果建立了2个品系的人APP695V652I/K596N/M597L转基因小鼠。抗Aβ1-17免疫组织化学显示APP695双突变转基因小鼠海马区阳性细胞数较APP695V652I单突变转基因小鼠,及野生小鼠阳性细胞数明显增多,胞膜着色明显加深。双突变转基因小鼠在5月龄时可检测到老年斑。行为学检测显示APP695V652I/K596N/M597L双突变转基因小鼠学习记忆能力比APP695V652I单突变转基因小鼠有明显下降。结论APP695V652I/K596N/M597L转基因小鼠较APP695V652I转基因小鼠更早出现老年斑及学习认知能力障碍。成功建立了人APP695V652I/K596N/M597L转基因小鼠阿尔茨海默病模型,为研究阿尔茨海默病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词： APP 阿尔茨海默病转基因小鼠水迷宫

虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 637-640页

作者：刘先菊杨帆林树柱全雄志夏咸柱张成林秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021 北京市动物园兽医院北京100044

目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。... 详细信息

目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。

关键词：亲和层析阴离子交换层析老虎 IgG