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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备

中国药理学通报 2004年第12期20卷 1426-1429页

作者：王桂平余清声覃媛黄劭广州医学院广州蛇毒研究所广东广州510182

目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼... 详细信息

目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用福林酚法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度 ;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证。结果　母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0天后抗体效价超过 10 5;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97 5mg ;所获取的抗体具有高度特异性 ,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应 ,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应 (蛇毒浓度大于5 0 0 μg·L-1时明显 )。结论　本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,开拓了我国蛇伤治疗的新领域 ,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制。

关键词：眼镜王蛇毒卵黄抗体(IgY) 鸡

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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的研制及初步应用

中华微生物学和免疫学杂志 2004年第9期24卷 695-698页

作者：余清声王桂平王薇覃媛黄劭广州医学院广州蛇毒研究所 510182

目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫扩散测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用Lowry氏法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定相对分子质量 (Mr)及鉴定抗体纯度。结果　母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0d后抗体效价超过 1∶10 0 0 0 0 ,卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97.5mg。动物体外中和试验表明 ,特异性IgY能有效中和眼镜王蛇毒 ,阻止眼镜王蛇毒对小白鼠的攻击。结论　研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础。

关键词：眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体免疫表达特异性体外中和试验抗体产生纯化动物体电泳

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奥卡西平的药代动力学及其立体选择性

中国临床药理学杂志 2003年第2期19卷 134-138页

作者：陆志城余清声广州医学院附二院药剂科广东广州510260 广州医学院蛇毒研究所广东广州510182

奥卡西平是一种治疗癫痫部分发作和全身强直阵挛性癫痫发作的新药。与传统抗癫痫药物相比,奥卡西平有不良反应少、自身诱导及对肝药酶的诱导作用小等优点。本文系统地介绍了奥卡西平在人体内吸收、分布、代谢和排泄的药代动力学特征,对... 详细信息

奥卡西平是一种治疗癫痫部分发作和全身强直阵挛性癫痫发作的新药。与传统抗癫痫药物相比,奥卡西平有不良反应少、自身诱导及对肝药酶的诱导作用小等优点。本文系统地介绍了奥卡西平在人体内吸收、分布、代谢和排泄的药代动力学特征,对年龄、性别、肝肾功能损伤等影响因素进行了描述,同时综述了奥卡西平及其活性代谢产物10-羟基卡马西平在动物及人体内药代动力学的立体选择性。

关键词：奥卡西平药代动力学立体选择性癫痫抗癫痫药

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眼镜蛇毒M组分对白血病细胞株的毒性作用

中华血液学杂志 1999年第11期20卷 598-599页

作者：谭获余清声应红光齐静广州医学院第二附属医院 510260 广州医学院蛇毒研究所中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所

眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株H_(7402)产生NO和LPO的影响

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中国病理生理杂志 1998年第1期14卷 18-21页

作者：龚海云余清声管锦霞黄劭广州医学院广州蛇毒研究所

目的：研究眼镜蛇毒直接溶解因子（ＤＬＦ）对人肝癌细胞株Ｈ７４０２产生一氧化氮（ＮＯ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的影响。结果：ＤＬＦ对体外培养的Ｈ７４０２细胞有杀伤作用，ＩＣ５０为２４７ｍｇ·Ｌ－１，ＤＬＦ与Ｈ７４０２... 详细信息

目的：研究眼镜蛇毒直接溶解因子（ＤＬＦ）对人肝癌细胞株Ｈ７４０２产生一氧化氮（ＮＯ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的影响。结果：ＤＬＦ对体外培养的Ｈ７４０２细胞有杀伤作用，ＩＣ５０为２４７ｍｇ·Ｌ－１，ＤＬＦ与Ｈ７４０２细胞的生长抑制率呈量效关系。ＤＬＦ可介导Ｈ７４０２细胞产生大量ＮＯ２，ＮＯ２量与ＤＬＦ的剂量呈量效关系。在一定剂量范围内ＮＯ２量与Ｈ７４０２的生长抑制率呈显著正相关。用５７０型粘附式细胞仪测定单个细胞内ＬＰＯ，发现ＤＬＦ可使Ｈ７４０２细胞内ＬＰＯ产生增加。结论：ＤＬＦ可杀伤Ｈ７４０２细胞，其部分机制可能是通过诱导肿瘤细胞产生ＮＯ和ＬＰＯ。

关键词：肝肿瘤一氧经氮脂质过氧化蛇毒 DLF

中华眼镜蛇毒对荷人鼻咽癌裸鼠血浆MDA和SOD的影响

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癌症 1998年第4期17卷 249-250,253页

作者：杨惠玲马志楷余清声郑芹中山医科大学病理生理学教研室广州医学院蛇毒研究所

目的：为了探讨中华眼镜蛇毒（ＮＮＡＶ）对荷人鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠血浆丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响。方法：采用比色法检测经腹腔注射低、中或高浓度ＮＮＡＶ（１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍ... 详细信息

目的：为了探讨中华眼镜蛇毒（ＮＮＡＶ）对荷人鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠血浆丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响。方法：采用比色法检测经腹腔注射低、中或高浓度ＮＮＡＶ（１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ）的荷人ＮＰＣ裸鼠血浆ＭＤＡ和ＳＯＤ活性。结果：荷瘤鼠血浆ＭＤＡ（８４２ｎｍｏｌ／ｍｌ）比正常裸鼠（３９２ｎｍｏｌ／ｍｌ）明显升高，而荷瘤鼠血浆总ＳＯＤ（Ｔ－ＳＯＤ）、锰ＳＯＤ（Ｍｎ－ＳＯＤ）和铜锌ＳＯＤ（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）活性（５２１９Ｎｕ／ｍｌ，２０３１Ｎｕ／ｍｌ，３１８８Ｎｕ／ｍｌ）比正常裸鼠（１２５６４Ｎｕ／ｍｌ，７５．１１Ｎｕ／ｍｌ，５０．５３Ｎｕ／ｍｌ）低；低、中和高浓度ＮＮＡＶ均可使荷瘤鼠血浆ＭＤＡ降低或至正常范围（５６２ｎｍｏｌ／ｍｌ，５．１７ｎｍｏｌ／ｍｌ，４．５８ｎｍｏｌ／ｍｌ），并可使荷瘤鼠Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ和ＣｕＺｎ－ＳＯＤ有不同程度的升高，其中以高浓度组为佳（１０８８８Ｎｕ／ｍｌ，７２２７Ｎｕ／ｍｌ，３６６１Ｎｕ／ｍｌ，）。结论：结果提示ＮＮＡＶ的抑瘤作用可能与其降低荷瘤鼠自由基水平和提高ＳＯＤ活性有关。

关键词：中华眼镜蛇毒鼻咽癌丙二醛超氧化物歧化酶

高密度脂蛋白促进内皮衍生的一氧化氮抑制血小板聚集的作用(英文)

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生理学报 2000年第1期52卷 81-84页

作者：陈华余清声郭兆贵湖南医科大学分子药理研究室长沙410078

用培养的小牛主动脉内皮细胞与兔水洗血小板直接相互作用的模型 ,探讨高密度脂蛋白对内皮衍生的一氧化氮抗血小板聚集作用的影响。培养的小牛主动脉内皮细胞预先用 10 0 μmol/L阿斯匹林处理 ,抑制细胞内的环氧化物酶活性。凝血酶 ( 0 ... 详细信息

用培养的小牛主动脉内皮细胞与兔水洗血小板直接相互作用的模型 ,探讨高密度脂蛋白对内皮衍生的一氧化氮抗血小板聚集作用的影响。培养的小牛主动脉内皮细胞预先用 10 0 μmol/L阿斯匹林处理 ,抑制细胞内的环氧化物酶活性。凝血酶 ( 0 1U/ml)可诱导兔血小板 ( 2× 10 8/ml) 67 3 3± 7 5 2 %的聚集反应。内皮细胞 ( 1× 10 5～ 1× 10 6 /ml)能抑制凝血酶诱导的血小板聚集 ,抑制强度与内皮细胞的数目正相关。且此作用可被 1mmol/L硝基精氨酸完全取消。表明内皮细胞对凝血酶诱导血小板聚集的抑制作用都是由内皮衍生的一氧化氮所致。在加凝血酶之前加入高密度脂蛋白 ( 1mg/ml)可增强内皮细胞 ( 1× 10 5/ml)的这种作用。高密度脂蛋白 ( 1mg/ml)与内皮细胞共同孵育 1h后 ,将高密度脂蛋白离心弃去 ,内皮细胞对凝血酶诱导血小板聚集的抑制作用不受影响。高密度脂蛋白及内皮细胞对静息血小板均无直接作用。结果表明。

关键词：血小板聚集高密度脂蛋白内皮细胞一氧化氮

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

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中国临床药理学与治疗学 2004年第6期9卷 683-686页

作者：余清声张梅覃媛黄劭广州医学院广州蛇毒研究所

目的 :研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :用体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸 (H3 TdR)掺入的影响 ,用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定F组分对 2 ... 详细信息

目的 :研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :用体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸 (H3 TdR)掺入的影响 ,用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原 (Pro liferationcellnuclearantigen ,PCNA)表达的影响。结果 :F组分呈浓度依赖性抑制 2 0 %小牛血清引起的细胞对H3 TdR掺入率和细胞内C myc、PCNA的表达 ,其中 30、10 0mg·L-1给药组与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :中华眼镜蛇毒F组分通过影响细胞内原癌基因C myc、PCNA的表达。

关键词：中华眼镜蛇毒F组分血管平滑肌细胞增殖 H3.TdR C-myc PCNA 蛋白质免疫印迹法

青蒿琥酯对成纤维细胞和内皮细胞的选择性研究

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中国临床药理学与治疗学 2005年第6期10卷 687-690页

作者：孔恒余清声广州医学院药物研究中心

目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用。方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响... 详细信息

目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用。方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响;光镜观察青蒿琥酯作用下细胞形态学的改变;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化。结果:青蒿琥酯在30～240mg·L-1浓度范围内作用细胞24h对两种来源的成纤维细胞的增殖都具有明显的抑制作用(P0.05)。药物作用24h后,HLF、HSF、HUVEC细胞的IC50分别为:64、60、600mg·L-1。光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆,突起变短变少,胞浆颗粒增多;而内皮细胞在形态上无明显的变化。琼脂糖凝胶电泳结果显示在240mg·L-1浓度作用24h,两种成纤维细胞的DNA出现梯带状的电泳图谱,而内皮细胞的DNA无梯状条带。结论:青蒿琥酯对来源于肺和皮肤的成纤维细胞的增殖具有抑制作用,而对血管内皮细胞生长增殖无明显的影响。该药还能诱导两种成纤维细胞凋亡,而对脐静脉内皮细胞无明显诱导凋亡的作用。

关键词：青蒿琥酯成纤维细胞血管内皮细胞 MTT选择作用