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P-选择素凝集素-EGF功能域的克隆、表达及其单克隆抗体制备

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第2期35卷 172-176页

作者：周同宋巍王锋倪培华陈楠张冬青余奇文上海市免疫研究所上海200025 上海第二医科大学瑞金医院肾脏内科上海市免疫研究所

制备特异性抗人P 选择素的凝集素表皮生长因子 (L EGF)功能域的单克隆抗体。利用特异引物 ,通过RT PCR从外周血血小板中扩增出人P 选择素的L EGF功能域基因 ,将其克隆至pET42b(+)载体中 ,测序验证后转染大肠杆菌BL2 1,经诱导表达了C端... 详细信息

制备特异性抗人P 选择素的凝集素表皮生长因子 (L EGF)功能域的单克隆抗体。利用特异引物 ,通过RT PCR从外周血血小板中扩增出人P 选择素的L EGF功能域基因 ,将其克隆至pET42b(+)载体中 ,测序验证后转染大肠杆菌BL2 1,经诱导表达了C端融合 6×His的蛋白质。融合蛋白质经分离纯化后 ,免疫Balb/c小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,通过间接ELISA筛选阳性克隆。获得 3株可稳定分泌抗L EGF功能域单抗的杂交瘤细胞株 (B10、F3和H5 )。其亚型分别为IgG2 、IgG1和IgG3;轻链均为κ型。所获的单抗对LPS刺激活化的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合反应 ,并可在体外阻断经凝血酶激活的血小板与中性粒细胞间的粘附。表明所获的单抗可特异性识别结合天然P 选择素 ,具有体外抗活化血小板与中性粒细胞粘附的功能 ,为进一步应用此单抗进行P 选择素结构和功能及抗粘附治疗研究提供了实验基础。

关键词： P-选择素功能域原核表达单克隆抗体功能

RA患者滑膜液及血清中IFN-γ、IL-10、IL-12与TRAIL的病理学意义

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第6期23卷 536-537,540页

作者：谢有娣金蕾余奇文上海交通大学医学院科技中心实验室上海200025 上海交通大学医学院免疫学教研室上海200025

目的:研究IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL在类风湿关节炎(RA)病理过程中的作用。方法:采用夹心ELISA法检测46名RA患者关节滑膜液和血清中IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL的浓度。结果:RA患者关节滑膜液中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别... 详细信息

目的:研究IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL在类风湿关节炎(RA)病理过程中的作用。方法:采用夹心ELISA法检测46名RA患者关节滑膜液和血清中IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL的浓度。结果:RA患者关节滑膜液中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(106.2±7.8)、(57.7±3.5)和(166.5±12.3);RA患者血清中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(56.3±7.4)、(35.1±12.7)和(69.5±8.3);正常对照血清中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(31.1±4.4)、(25.2±2.6)和(41.2±4.8);RA患者关节滑膜液IFN-γ高于其血清含量(P<0.05)及正常对照组(P<0.01);RA患者关节滑膜液和血清中IL-10浓度和正常对照差异无统计学意义。结论:在RA疾病中IFN-γ和IL-12浓度明高于正常人,表明RA发病过程中细胞因子分泌格局以Th1型为主,并且滑膜液比外周血更为典型。RA患者关节滑膜液和血清中TRAIL浓度增高,说明RA疾病过程中伴随有凋亡分子的参与。

关键词：类风湿关节炎滑膜液细胞因子 TNF相关凋亡分子

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重组人β-干扰素的表达、纯化与鉴定

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第11期35卷 1035-1039页

作者：余奇文李宁丽聂红马安伦席波龚毅张冬青大连金威基因技术有限公司上海第二医科大学上海市免疫学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025 大连116001 上海200233

经 1 5L发酵罐制备重组人β 干扰素 (recombinanthumanIFN β,rhIFN β)。以免疫亲和层析方法纯化发酵液中rhIFN β并与蓝谱亲和层析纯化法比较 ,探索快速高效纯化rhIFN β的方法。以ELISA测定rhIFN β含量及经免疫亲和层析纯化的rhIFN... 详细信息

经 1 5L发酵罐制备重组人β 干扰素 (recombinanthumanIFN β,rhIFN β)。以免疫亲和层析方法纯化发酵液中rhIFN β并与蓝谱亲和层析纯化法比较 ,探索快速高效纯化rhIFN β的方法。以ELISA测定rhIFN β含量及经免疫亲和层析纯化的rhIFN β中鼠IgG残留量 ;以PAGE法鉴定rhIFN β的分子量 ;以CPEI法测定rhIFN β的生物活性。取 2L发酵液经免疫亲和层析纯化后 ,得到 3.0 3mgrhIFN β ;经蓝谱亲和层析纯化后 ,得到2 .6 5mg ;分子量为 2 2kD ;沉淀带灰度值分别为 96 .2 %和 95 .1 % ;CPEI比活性分别为 1 .4 3× 1 0 7IU/mg和 1 .6 3× 1 0 7IU/mg ;经免疫亲和层析后纯化物中鼠IgG残留量小于 5 0 μg/L。实验结果表明 ,所采用的免疫亲和层析和蓝谱亲和层析均可快速高效地从酵母菌发酵上清液中分离纯化rhIFN β基因产物

关键词：重组人β-干扰素亲和层析酵母菌酶联免疫吸附试验细胞病变抑制

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完全与不完全睡眠剥夺对小鼠免疫功能的影响

细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 115-117页

作者：杨天阳黄燕华蔡昊旻余奇文上海交通大学基础医学院上海市免疫学研究所上海200025

目的:研究经完全与不完全睡眠剥夺以后小鼠免疫功能的变化。方法:通过光照模拟全白天生活、黑箱模拟全黑夜生活,连续2周干扰小鼠睡眠;通过转轮24 h和72 h短期全剥夺小鼠睡眠;实验小鼠实施睡眠干扰前以BSA免疫一次。采用称重脾脏;流式细... 详细信息

目的:研究经完全与不完全睡眠剥夺以后小鼠免疫功能的变化。方法:通过光照模拟全白天生活、黑箱模拟全黑夜生活,连续2周干扰小鼠睡眠;通过转轮24 h和72 h短期全剥夺小鼠睡眠;实验小鼠实施睡眠干扰前以BSA免疫一次。采用称重脾脏;流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量及其比例;以ELISA方法检测血清中IL-2、IL-10以及抗BSA特异性抗体含量。结果:与正常睡眠小鼠相比:全日组脾重没有显著变化,其余各组脾重明显减轻(P0.05);所有实验组CD8+T细胞数均明显降低,CD4/CD8比例显著增大(P0.05),其他实验组IL-10含量均呈下降趋势(P<0.05);转轮组小鼠抗BSA抗体效价含量显著降低(P<0.01),全日光组与全夜组无统计学意义。结论:完全与不完全睡眠剥夺可不同程度地引起实验小鼠CD8+T细胞数减少、脾重减轻、特异性抗体分泌减少以及细胞因子分泌格局的变化,进而影响机体免疫功能。

关键词：睡眠剥夺 T淋巴细胞亚群特异性抗体细胞因子IL-2与IL-10

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肿瘤过继性细胞免疫治疗

现代免疫学 2012年第5期32卷 430-433页

作者：王晓珺综述余奇文审阅上海交通大学医学院、上海市免疫学研究所上海200025

肿瘤过继性细胞免疫治疗是近年来不断发展的一种新的肿瘤治疗法。秉承继往IL-2活化杀伤性淋巴细胞(LAK)方法、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)方法,现今在明晰了细胞因子作用机制以后又创建了树突细胞共培养细胞因子诱导杀伤细胞(dendritic cell ... 详细信息

肿瘤过继性细胞免疫治疗是近年来不断发展的一种新的肿瘤治疗法。秉承继往IL-2活化杀伤性淋巴细胞(LAK)方法、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)方法,现今在明晰了细胞因子作用机制以后又创建了树突细胞共培养细胞因子诱导杀伤细胞(dendritic cell and cytokine induced killer,DC-CIK)治疗肿瘤的方法。其方法主要为取淋巴细胞同IL-4、GM-CSF、抗CD3抗体、IL-2、IL-1、IFN-γ、TNF-α等细胞因子共培养,通过刺激免疫效应细胞有效增殖以后分次回输给患者,达到增强免疫力、增强杀伤肿瘤细胞的效果。本文主要从LAK、TIL和DC-CIK三种方法的发展、效应淋巴细胞的作用、诱导和回输途径以及治疗效果的评价等方面进行综述。

关键词：肿瘤免疫治疗 LAK TIL DC-CIK

紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷对免疫效应细胞增殖格局的调节作用

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中国免疫学杂志 2012年第6期28卷 522-524,529页

作者：余晓曦孟凌华余奇文上海交通大学医学院药学系上海200025 上海市免疫学研究所上海200025

目的:研究紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷对免疫效应细胞增殖格局的调节作用。方法:采用有机溶剂抽提、Amberlite XAD-7型大孔吸附树脂过柱和HPLC从紫苏中提取紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷;以紫苏宁、矢车菊素3,5-二葡糖苷以及PHA、人... 详细信息

目的:研究紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷对免疫效应细胞增殖格局的调节作用。方法:采用有机溶剂抽提、Amberlite XAD-7型大孔吸附树脂过柱和HPLC从紫苏中提取紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷;以紫苏宁、矢车菊素3,5-二葡糖苷以及PHA、人参皂苷Rh2等分别刺激人外周单个核细胞;以抗淋巴细胞表型荧光抗体染色,FACS检测细胞增殖格局。结果:从82.30 g紫苏叶中提取得到0.33 g紫苏宁和0.35 g矢车菊素3,5-二葡糖苷。矢车菊素3,5-二葡糖苷(100μg/ml)刺激淋巴细胞(4天)后CD8+T和NK细胞增殖百分率为38.51±2.34(%)和8.24±0.51(%),显著高于对照组(P<0.05);紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷同时刺激后,CD8+T增殖百分率为33.33±2.57(%),显著高于对照组(P<0.05);长期(7天)低剂量(1.0μg/ml)对CD4+T和CD8+T细胞的刺激效果优于短期(4天)刺激。PHA刺激诱导后CD8+T、NK和NKT细胞百分率分别为38.99±1.95(%),15.86±1.17(%)和4.12±0.21(%),显著高于对照组(P<0.01～0.05);人参皂苷Rh2刺激诱导后NKT细胞的百分率为6.79±0.33(%),显著高于对照组(P<0.01)。结论:紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷具有诱导CD4+T、CD8+T和NK细胞增殖的作用,其作用呈现时间与剂量依赖关系。

关键词：花青素紫苏宁和矢车菊素3,5-二葡糖苷 CTL、NK与NKT细胞免疫治疗

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复发性口腔溃疡与T细胞免疫研究进展

现代免疫学 2016年第1期36卷 72-75页

作者：刘好好许子悦谢春雨余奇文上海交通大学基础医学院免疫与微生物学系上海200025

复发性口腔溃疡是以周期性反复发作为特点的口腔黏膜灼痛性溃疡,发病原因至今不详。免疫功能异常被认为是疾病发生与复发的重要因素之一。在复方性口腔溃疡发病时T细胞免疫起到了一定作用。CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg细胞、Th17细胞以... 详细信息

复发性口腔溃疡是以周期性反复发作为特点的口腔黏膜灼痛性溃疡,发病原因至今不详。免疫功能异常被认为是疾病发生与复发的重要因素之一。在复方性口腔溃疡发病时T细胞免疫起到了一定作用。CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg细胞、Th17细胞以及IL-3、IL-12、IL-17等白细胞介素与复发性口腔溃疡的关联性,食物变态反应、细菌感染所致黏膜自身抗体产生与复发性口腔溃疡的反复发作为当前研究热点。用免疫干预治疗等手段,可使异常的免疫功能恢复正常,从而达到治愈目的。

关键词：复发性口腔溃疡 T细胞 IL-17 免疫治疗

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中性粒细胞在牙周炎疾病中作用的研究进展

现代免疫学 2017年第2期37卷 157-160页

作者：谢春雨许子悦刘好好余奇文上海交通大学基础医学院上海市免疫学研究所上海200025 上海交通大学医学院附属第九人民医院上海200023

牙周炎是最常见的口腔疾病之一,是由细菌引发的慢性非特异性炎症。在牙周炎的发生与机体对牙周炎的防御过程中,中性粒细胞起到了双重作用。中性粒细胞处于稳态时,通过趋化吞噬致病菌与释放抗菌物质发挥维护牙周组织健康的作用。中性粒... 详细信息

牙周炎是最常见的口腔疾病之一,是由细菌引发的慢性非特异性炎症。在牙周炎的发生与机体对牙周炎的防御过程中,中性粒细胞起到了双重作用。中性粒细胞处于稳态时,通过趋化吞噬致病菌与释放抗菌物质发挥维护牙周组织健康的作用。中性粒细胞稳态失衡时,其免疫损伤与监控丧失将破坏牙周组织,引起牙周炎的发生与发展。近年来,中性粒细胞胞外诱捕网被认为与牙周炎的发生发展有密切关系。本文综述中性粒细胞与牙周炎的相关性研究近况。

关键词：牙周炎中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网

可溶性Fas,可溶性Fas配体与细胞因子在1型糖尿病发病中的意义

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中华内分泌代谢杂志 2001年第1期17卷 31-33页

作者：余奇文李宁丽张冬青聂红周光炎上海第二医科大学上海市免疫学研究所200025

目的　研究可溶性Fas(sFas)和可溶性Fas配体 (sFasL)与细胞因子在 1型糖尿病发病中的作用。方法　 32名 1型糖尿病患者和 2 0名正常人的血清 ,采用夹心BAS ELISA法分别检测sFas,sFasL ,γ干扰素 (IFN γ)及白细胞介素 1(IL 1)含量。结... 详细信息

目的　研究可溶性Fas(sFas)和可溶性Fas配体 (sFasL)与细胞因子在 1型糖尿病发病中的作用。方法　 32名 1型糖尿病患者和 2 0名正常人的血清 ,采用夹心BAS ELISA法分别检测sFas,sFasL ,γ干扰素 (IFN γ)及白细胞介素 1(IL 1)含量。结果　 1型糖尿病血清中sFas,IFN γ及IL 1含量分别为 (15 46± 6 85 ,10 74± 45 1与 140 6± 72 1)ng/L ,显著高于正常组 ;sFasL为 (2 11± 73)mg/L ,低于正常组但差异无显著性。在 1型糖尿病患者中高浓度sFas伴高IFN γ者共 12例 ,低浓度sFas伴低IFN γ者共 9例。结论　 1型糖尿病患者血清中的sFas ,IFN γ及IL 1高于正常人 ,sFas与IFN γ浓度呈正相关 (r =0 .79,P <0 .0 5 )。对 1型糖尿病患者血清进行sFas ,IFN γ及IL 1等检测可作为反映胰岛细胞病变的辅助指标 ,有助于对疾病的诊断与治疗。

关键词：细胞凋亡 Ⅰ型糖尿病可溶性FAs 可溶性FAs配体细胞因子