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流体剪切力介导Piezo1机械敏感性离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

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流体剪切力介导Piezo1机械敏感性离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖...

作者：何良志兰州大学

学位级别：硕士

目的:伴随人口老龄化加剧,骨质疏松症逐渐成为社会的重大负担,已演变为严重的公共卫生事件。然而,骨质疏松症的发生、发展机制目前仍不明确,流体力学在骨质疏松症的研究中起着重要作用,不容忽视。最近研究发现的Piezo1机械敏感性离子通... 详细信息

目的:伴随人口老龄化加剧,骨质疏松症逐渐成为社会的重大负担,已演变为严重的公共卫生事件。然而,骨质疏松症的发生、发展机制目前仍不明确,流体力学在骨质疏松症的研究中起着重要作用,不容忽视。最近研究发现的Piezo1机械敏感性离子通道或许在骨质疏松症的发生、发展过程中起相关作用,仍未可知。课题组前期研究发现敲除成骨细胞内Piezo1可以抑制MC3T3-E1成骨细胞的迁移,本研究探索流体剪切力是否通过Piezo1离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖产生作用,以及ERK5、ERK1/2通路、细胞骨架在其中发挥的作用。方法:使用本课题组自行研究设计的流体剪切力加载装置,对MC3T3-E1成骨细胞加载不同模式(循环模式和间停模式)及强度(3、6、9、12、15、18dyne/cm)的流体剪切力,使用免疫荧光染色及Western Blot方法观察促进Piezo1蛋白表达最佳流体剪切力条件。过表达(Yoda1)和抑制(Gs MTx4)成骨细胞内Piezo1蛋白表达,使用Western Blot方法及Ed U染色观察成骨细胞增殖及ERK5、ERK1/2通路磷酸化变化,加载流体剪切力并过表达和抑制Piezo1蛋白,使用Western Blot及Ed U染色观察成骨细胞增殖及ERK5、ERK1/2通路变化。鬼笔环肽染色和免疫荧光染色观察成骨细胞加载流体剪切力及抑制Piezo1表达(Gs MTx4)后细胞骨架和细胞骨架蛋白变化,进一步使用Ed U染色观察加载流体剪切力及抑制骨架蛋白(Cyto D)后对成骨细胞增殖的变化。结果:对成骨细胞加载45min循环模式及间停模式流体剪切力,发现与空白组相比,循环模式各组成骨细胞内Piezo1蛋白表达更高,在不同强度循环流体剪切力下,6dyne/cm时成骨细胞内Piezo1蛋白表达量最高(p<0.001)。过表达Piezo1促进成骨细胞内增殖相关蛋白PCNA(p<0.01)、MCM2(p<0.01)、Cyclin D1(p<0.001)表达,成骨细胞增殖率亦明显增加(p<0.001),同时促进ERK5(p<0.01)、ERK1/2(p<0.001)磷酸化,抑制Piezo1表达则抑制成骨细胞内PCNA(p<0.01)、MCM2(p<0.05)、Cyclin D1(p<0.001)表达,细胞增殖率明显降低(p<0.05),ERK5(p<0.05)、ERK1/2(p<0.05)磷酸化也明显降低。流体剪切力(6dyne/cm、循环模式45min)则促进成骨细胞内PCNA(p<0.05)、MCM2(p<0.001)、Cyclin D1(p<0.001)表达,细胞内ERK5(p<0.001)、ERK1/2(p<0.001)磷酸化也明显上调。与单纯FSS相比,FSS+Yoda1进一步促进成骨细胞内Piezo1蛋白表达(p<0.05),PCNA(p<0.05)、Cyclin D1(p<0.001)表达明显上调,而MCM2表达无明显增加,Ed U染色进一步证明FSS+Yoda1组较FSS组细胞增殖率更高,ERK5(p<0.001)、ERK1/2(p<0.05)磷酸化作用增强。FSS+Gs MTx4组较单纯FSS组相比,下调了Piezo1表达(p<0.001),明显降低了PCNA(p<0.01)、Cyclin D1(p<0.001)表达,减弱了ERK5(p<0.01)、ERK1/2(p<0.001)的磷酸化作用。流体剪切力促进成骨细胞细胞骨架重排(p<0.001)并促进骨架蛋白β-Tubulin、Vimentin高表达,而抑制Piezo1则抑制细胞骨架重排(p<0.001)和骨架蛋白β-Tubulin、Vimentin表达。阻断细胞骨架重排后,成骨细胞增殖率明显降低(p<0.001)。结论:(1)对成骨细胞加载6dyne/cm循环流体剪切力45min后,细胞内Piezo1蛋白表达最高;(2)流体剪切力介导Piezo1通过ERK5、ERK1/2通路影响成骨细胞增殖;(3)流体剪切力通过细胞骨架影响成骨细胞增殖。

关键词：流体剪切力 Piezo1 成骨细胞细胞增殖细胞骨架 ERK5 ERK1/2

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清胃止痛微丸治疗胃溃疡的临床研究

中国中西医结合杂志 2001年第6期21卷 422-423页

作者：何良志张琼王书臣中国中医研究院西苑医院!北京100091

目的 :观察清胃止痛微丸对胃溃疡 (PU)的溃疡愈合及清除幽门螺旋杆菌 (HP)的作用。方法 :随机分为治疗组 (6 0例 )和对照组 (6 0例 ) ,分别用清胃止痛微丸、四方胃片治疗。观察治疗前后溃疡愈合、中医证候和HP清除情况。结果 :胃镜疗效 ... 详细信息

目的 :观察清胃止痛微丸对胃溃疡 (PU)的溃疡愈合及清除幽门螺旋杆菌 (HP)的作用。方法 :随机分为治疗组 (6 0例 )和对照组 (6 0例 ) ,分别用清胃止痛微丸、四方胃片治疗。观察治疗前后溃疡愈合、中医证候和HP清除情况。结果 :胃镜疗效 :治疗组有效率为 86 6 7% ;对照组有效率为 71 6 7% ,组间比较 ,差异有显著性 (P 0 0 5)。治疗组有较好的抑制HP的作用 ,治疗前后比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,HP清除率为4 7%。结论 :清胃止痛微丸有较好的治疗胃溃疡和清除HP作用。

关键词：胃溃疡幽门螺旋杆菌清胃止痛微丸

Piezo1离子通道介导的流体剪切应力抑制MLO-Y4骨细胞凋亡

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中国医学物理学杂志 2022年第10期39卷 1287-1292页

作者：刘众成何良志移穷刘雪宁张坤王力夫耿彬夏亚一姜金兰州大学第二医院骨科/甘肃省骨与关节疾病重点实验室甘肃兰州730000

目的:研究Piezo1机械敏感性离子通道对骨细胞的调控作用。方法:应用课题组研发的流体剪切力(FSS)加载装置,使用免疫荧光探究FSS对Piezo1通道在MLO-Y4中影响的最佳强度;对Piezo1使用FSS、激动剂Yoda1或阻滞剂GsMTx4进行干预。使用Western... 详细信息

目的:研究Piezo1机械敏感性离子通道对骨细胞的调控作用。方法:应用课题组研发的流体剪切力(FSS)加载装置,使用免疫荧光探究FSS对Piezo1通道在MLO-Y4中影响的最佳强度;对Piezo1使用FSS、激动剂Yoda1或阻滞剂GsMTx4进行干预。使用Western Blot探究Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白的表达量;使用Hoechst-33258以及流式细胞凋亡检测MLO-Y4骨细胞的凋亡比例。结果:免疫荧光染色结果表明FSS对MLO-Y4骨细胞中Piezo1的表达呈现先增加后降低的单峰趋势,其中以9 dyne/cm2加载30 min为最佳刺激条件。使用Yoda1抑制MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05),使用GsMTx4促进MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05)。Piezo1介导的FSS抑制MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05)。结论:Piezo1机械敏感性离子通道介导的FSS在9 dyne/cm2条件下抑制MLO-Y4骨细胞凋亡,且FSS在该条件下可以有效逆转Piezo1阻滞剂GsMTx4在4μmol/L作用0.5 h下促进MLO-Y4细胞凋亡作用。

关键词：流体剪切力 Piezo1 骨细胞凋亡

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便秘防治200问

Piezo1介导的流体剪切应力通过增强细胞骨架重组上调成骨细胞增殖

1996年

作者：谢雁鸣张蓉何良志

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甘肃医药 2022年第8期41卷 673-677,704页

作者：杜文佳何良志刘众成詹红伟姜金兰州大学第二医院(甘肃省骨科临床医学研究中心) 甘肃兰州730030

目的:最近研究发现的Piezo1机械敏感性离子通道或许在骨质疏松的发生、发展过程中起相关作用。本研究探索流体剪切力(FSS)是否通过Piezo1离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖产生作用。方法:使用本课题组自行研究设计的FSS加载装置,对MC3T3... 详细信息

目的:最近研究发现的Piezo1机械敏感性离子通道或许在骨质疏松的发生、发展过程中起相关作用。本研究探索流体剪切力(FSS)是否通过Piezo1离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖产生作用。方法:使用本课题组自行研究设计的FSS加载装置,对MC3T3-E1成骨细胞加载不同强度(3、6、9、12、15、18dyne/cm2)流体剪切力,使用Western Blot方法观察促进Piezo1蛋白表达的最佳FSS条件,探究激活剂(Yoda1)和抑制剂(GsMTx4)对Piezo1表达的影响。使用Western Blot及EdU染色观察成骨细胞增殖变化。通过鬼笔环肽染色、免疫荧光以及EdU染色探究细胞骨架对成骨细胞增殖的影响。结果:在不同强度循环流体剪切力下,6dyne/cm2时成骨细胞内Piezo1蛋白表达量最高。激活剂Yoda1浓度在20μM作用3h上调细胞内增殖相关蛋白PCNA、MCM2、Cyclin D1表达,细胞增殖率明显增加;抑制剂GsMTx4浓度在0.5μM作用2h下调细胞内增殖相关蛋白PCNA、MCM2、Cyclin D1表达,细胞增殖率明显下降。而使用胞松驰素D(Cyto D)抑制细胞骨架蛋白后会进一步抑制成骨细胞的增殖。结论:(1)对成骨细胞加载6dyne/cm^(2)循环FSS45min后,细胞内Piezo1蛋白表达最高;(2)Piezo1介导的FSS通过上调细胞骨架重组促进MC3T3-E1成骨细胞增殖。

关键词：流体剪切力 Piezo1 成骨细胞细胞增殖细胞骨架

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五味解毒颗粒剂对呼吸道感染作用的实验研究

中医杂志 2001年第11期42卷 689-691页

作者：何良志张秋红王书臣闫孝诚中国中医研究院西苑医院北京西苑操场1号100091 北京胸科医院

为了探讨五味解毒颗粒剂对呼吸道病毒的作用及镇咳、祛痰、平喘作用,选择常见与呼吸道感染有关的病毒进行体内外实验研究。选用小白鼠氨水引咳法、毛细管法、药物气雾引喘法分别对五味解毒颗粒剂的镇咳、祛痰、平喘作用的有效性进行评... 详细信息

为了探讨五味解毒颗粒剂对呼吸道病毒的作用及镇咳、祛痰、平喘作用,选择常见与呼吸道感染有关的病毒进行体内外实验研究。选用小白鼠氨水引咳法、毛细管法、药物气雾引喘法分别对五味解毒颗粒剂的镇咳、祛痰、平喘作用的有效性进行评价。体外实验结果,五味解毒颗粒剂对流感病毒甲_3型(A_3)和乙型(B)、科萨奇B_5型和B_6型肠道病毒(Coxsackie B_5、B_6简称COXB_5、B_6)、呼吸道合胞病毒(RS)等有一定的抑制作用。其50％有效浓度依次为0.200,0.336,0.400,0.564,0.400mg生药/ml,治疗指数依次为32、19、16、11、16,而用作阳性对照的感冒清热颗粒(简称感冒颗粒)作用强度低于五味解毒颗粒剂(治疗指数为2.4～16)。对副流感病毒(HVJ)、疱疹病毒(HSV—1,HSV—2)、腺病毒(ADA_3、ADA_2)均未能显示出抑制活性。体内实验结果,五味解毒颗粒剂显示出对小鼠流感病毒性肺炎有较明显的抑制作用,与病毒对照组比较,五味解毒颗粒剂小剂量组(P0.05)。小白鼠氨水引咳法、毛细管法、药物气雾引喘法实验证明五味解毒颗粒剂具有镇咳、祛痰和平喘作用。表明五味解毒颗粒剂比感冒清热颗粒抗病毒作用更强并具有镇咳、祛痰和平喘作用。

关键词：呼吸道感染中医药治疗五味解毒颗粒剂实验研究

产后身疼(产后风湿)用员利针合并中药的治疗经验介绍

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产后身疼(产后风湿)用员利针合并中药的治疗经验介绍

中华中医药学会第五次中医防治疼痛学术年会

作者：何良志中国中医科学院西苑医院康复理疗科

＜正＞～～

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口臭:难言之隐如何解决

家庭医学(下半月) 2009年第11期 54-54页

作者：何良志北京西苑医院康复科

口臭也称口气,是人口中散发出来的令别人厌烦、使自己尴尬的难闻的气味,多为臭味。别小看口臭这小小的毛病,它会使人不敢与人近距离交往,从而产生自卑心理,影响正常的人际、情感交流,令人十分苦恼。一般正常健康的人口中是没有气味的或... 详细信息

口臭也称口气,是人口中散发出来的令别人厌烦、使自己尴尬的难闻的气味,多为臭味。别小看口臭这小小的毛病,它会使人不敢与人近距离交往,从而产生自卑心理,影响正常的人际、情感交流,令人十分苦恼。一般正常健康的人口中是没有气味的或是有很轻的非臭的、与进食有关的气味。有些口臭较重的人,自己就可以闻到自己的口气;而有些人,通过他人的反应,才知道自己口臭。口臭是由多种原因引起的,当人体在劳累、紧张、人体免疫功能降低时最为明显,最主要是与体内细菌有关。

关键词：人体免疫

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对消防工程施工管理的论述

大科技 2013年第4期 305-306页

作者：何良志广东建安消防机电工程有限公司

消防工程施工管理与其它工程不一样的环节是要向消防部门报建验收，而且每个消防系统都有详细的消防规范要求。

关键词：施工准备预埋质量安全成本管理验收结算