检索结果-南通市图书馆

效应分子Map、EspF在致病性大肠杆菌致细胞线粒体功能障碍中的作用

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生物技术通报 2009年第10期25卷 169-172,177页

作者：杨健朱红任碧轩川北医学院免疫学与分子生物学研究室南充637007

用自杀质粒、基因等位交换方法构建致病性大肠杆菌(EPEC)效应分子Map或EspF缺失删除株Δmap、ΔespF和ΔmapespF,并用PCR和蛋白印迹技术(Western blot)对删除株进行鉴定;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测删除株感染HeLa细胞后细... 详细信息

用自杀质粒、基因等位交换方法构建致病性大肠杆菌(EPEC)效应分子Map或EspF缺失删除株Δmap、ΔespF和ΔmapespF,并用PCR和蛋白印迹技术(Western blot)对删除株进行鉴定;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测删除株感染HeLa细胞后细胞MMP改变。试验结果表明,Δmap、ΔespF和ΔmapespF等删除株成功构建,效应分子Map和EspF可以单独或协同引起细胞线粒体功能障碍。

关键词：等位交换删除株线粒体膜电位线粒体功能障碍

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RNA干扰体外抑制HBeAg的表达

细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 670-671,673页

作者：杨健胡为民任碧轩唐恩洁川北医学院免疫学与分子生物学研究所四川南充637007

目的:构建乙型肝炎病毒前C/C基因小发夹RNA(shRNA)表达载体,探索shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制作用。方法:用基因重组技术构建shRNA表达载体,经酶切、测序鉴定后,与HBeAg表达载体pcDNA3.1preC/C按7∶1的比例,共转染HeLa细胞,采用半定... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒前C/C基因小发夹RNA(shRNA)表达载体,探索shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制作用。方法:用基因重组技术构建shRNA表达载体,经酶切、测序鉴定后,与HBeAg表达载体pcDNA3.1preC/C按7∶1的比例,共转染HeLa细胞,采用半定量PCR和微粒子酶免疫试验(MEIA)分析shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制情况。结果:经限制性内切酶、测序证实成功构建shRNA表达载体;筛选到psiHBV2载体对HBeAg表达有一定抑制作用,对mRNA的抑制率为75%,对蛋白质的抑制率为53%,其余两序列无明显抑制作用。结论:RNAi技术可以有效抑制载体pcDNA3.1preC/C表达HBeAg。

关键词：乙型肝炎乙型肝炎病毒e抗原小发夹RNA RNA干扰

SLE患者淋巴细胞Fas、Bcl-2、p53与Cmyc基因表达

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免疫学杂志 2009年第1期25卷 115-116页

作者：杨宗琪杨继文任碧轩唐恩洁川北医学院免疫学与分子生物学研究所

@@ 凋亡基因Fas、抗癌基因p53与癌基因Bcl-2、Cmyc等与细胞凋亡密切相关,与疾病的发生、发展有一定的关系,系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,为了探讨SLE与凋亡基因、癌基因的关系,我们采用简易原位杂交法对正常人与患者淋巴细... 详细信息

@@ 凋亡基因Fas、抗癌基因p53与癌基因Bcl-2、Cmyc等与细胞凋亡密切相关,与疾病的发生、发展有一定的关系,系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,为了探讨SLE与凋亡基因、癌基因的关系,我们采用简易原位杂交法对正常人与患者淋巴细胞的4种基因成批同时进行检测,并分别设探针对照,dig-AP对照,报道如下.

关键词：原位杂交 Fas Bcl-2 p53 Cmyc SLE 细胞凋亡

外源性P_(53)基因转染的人肝癌细胞化疗药物敏感性的研究

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免疫学杂志 2005年第2期21卷 148-149页

作者：杨晓红唐恩洁任碧轩川北医学院免疫学与分子生物学研究室四川南充637007

目的　探讨外源性P53基因转染对人肝癌细胞系HepG 2化疗敏感性的影响。方法　将人野生型P53基因表达载体导入HepG 2细胞中,经筛选和鉴定后,采用MTT法观察其对甲氨蝶呤(MTX)和足叶乙甙(VP16 )作用后的HepG 2细胞生长抑制及凋亡的影响。... 详细信息

目的　探讨外源性P53基因转染对人肝癌细胞系HepG 2化疗敏感性的影响。方法　将人野生型P53基因表达载体导入HepG 2细胞中,经筛选和鉴定后,采用MTT法观察其对甲氨蝶呤(MTX)和足叶乙甙(VP16 )作用后的HepG 2细胞生长抑制及凋亡的影响。结果　外源性P53基因在转染细胞中有效表达。增强了MTX和VP16对HepG 2细胞生长抑制并促进了药物诱导的细胞凋亡。结论　外源性P53基因能增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。

关键词：野生型P53基因人肝癌细胞系化疗敏感性

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耐多药结核杆菌与药物敏感菌株蛋白质比较

中国公共卫生 2009年第5期25卷 515-516页

作者：谢勇恩任碧轩胡为民唐恩洁敬保迁川北医学院免疫与分子生物学研究所四川南充637007

目的比较结核分支杆菌耐多药菌株与药物敏感菌株在蛋白表达水平的差异,为进一步研究结核杆菌耐药的分子调控机制提供依据。方法利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离耐多药结核分支杆菌和结核分支杆菌药物敏感菌株总蛋白质,通过计算机... 详细信息

目的比较结核分支杆菌耐多药菌株与药物敏感菌株在蛋白表达水平的差异,为进一步研究结核杆菌耐药的分子调控机制提供依据。方法利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离耐多药结核分支杆菌和结核分支杆菌药物敏感菌株总蛋白质,通过计算机图像分析软件比较分析电泳图谱,切取部分差异蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析。结果发现27个蛋白质点具有明显差异,其中耐多药结核分支杆菌有6个蛋白质点明显表达上调。质谱分析发现,6个蛋白质点分别代表的蛋白质为无机焦磷酸酶、多肽脯氨酰基顺反同分异构酶A、延伸因子Tu、420个氨基酸的未知功能蛋白质、双加氧酶和转录调节蛋白(MoxR)。结论耐多药结核杆菌与药物敏感菌株在蛋白表达水平存在明显差异。

关键词：耐多药结核杆菌蛋白质组学双向电泳质谱分析

FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体内化与其保守基序的关系研究

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中国免疫学杂志 2009年第7期25卷 613-616页

作者：胡为民唐恩洁敬保迁任碧轩川北医学院微生物学与免疫学教研室南充637007 川北医学院免疫学与分子生物学研究所南充637007

目的:研究FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)内化与后者保守基序之间的关系。方法:以HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1融合表达载体为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1保守基序ERY突变为ENY,构建HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1融合表达载体。测序... 详细信息

目的:研究FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)内化与后者保守基序之间的关系。方法:以HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1融合表达载体为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1保守基序ERY突变为ENY,构建HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1融合表达载体。测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞。G418筛选出稳定细胞株。100 nmol/LFTY720处理3、6、12小时后,荧光显微镜下观察S1P1在HEK293细胞上的表达情况。结果:HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1载体被成功构建,S1P1(WT)和S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面,FTY720能诱导S1P1(WT)内化,但不能诱导S1P1(R142N)内化。结论:FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关。

关键词： FTY720 1型1-磷酸鞘氨醇受体内化荧光显微镜

干扰素及Fas抗体对肝癌细胞的细胞毒性研究

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中国实验临床免疫学杂志 1999年第3期11卷 34-35页

作者：杨晓红任碧轩川北医学院分子生物学研究室

应用基因重组人干扰素γ和抗Ｆａｓ抗体体外处理人肝癌细胞系ＨｅＰＧ－２，采用ＭＴＴ法检测各处理组和对照组细胞的凋亡。结果表明：ＩＦＮ－γ诱导ＨｅＰＧ－２２４ｈ后，再加入Ｆａｓ抗体，发现对ＨｅＰＧ－２细胞的细胞毒作用显著... 详细信息

应用基因重组人干扰素γ和抗Ｆａｓ抗体体外处理人肝癌细胞系ＨｅＰＧ－２，采用ＭＴＴ法检测各处理组和对照组细胞的凋亡。结果表明：ＩＦＮ－γ诱导ＨｅＰＧ－２２４ｈ后，再加入Ｆａｓ抗体，发现对ＨｅＰＧ－２细胞的细胞毒作用显著高于ＩＦＮ－γ和Ｆａｓ抗体单独作用，提示ＩＦＮ－γ能促进抗Ｆａｓ抗体对肝癌细胞的细胞毒性，为ＩＦＮ－γ协同Ｆａｓ抗体治疗肿瘤提供了一定的实验依据。

关键词： IFN-γ 抗Fas抗体 HePG-2 MTT法肝癌

维普期刊数据库评论

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南充地区不同叶型半夏的指纹图谱分析

中药材 2007年第11期30卷 1365-1367页

作者：任碧轩白权王朝莉陈果李丽敬保迁张大容冯莉唐恩洁川北医学院免疫与分子生物学研究所川北医学院附属医院药剂科四川南充637000

目的:比较南充地区野生芍药叶型和竹叶型半夏的指纹图谱并鉴定差异分子。方法:采用RAPD扩增、分析不同叶型半夏指纹图谱,并对典型特异扩增条带进行克隆和测序分析。结果:36条随机引物中有22条扩增出清晰条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增... 详细信息

目的:比较南充地区野生芍药叶型和竹叶型半夏的指纹图谱并鉴定差异分子。方法:采用RAPD扩增、分析不同叶型半夏指纹图谱,并对典型特异扩增条带进行克隆和测序分析。结果:36条随机引物中有22条扩增出清晰条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增出157条带,竹叶型半夏基因组DNA扩增出161条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增的差异带3条,竹叶型半夏基因组DNA扩增的差异带7条。差异条带AOPN-14300经克隆测序证实为非编码区序列,Genbank登记号为EF417577。结论:南充野生不同叶型半夏基因组存在差异,已将部分典型差异基因组DNA片段进行克隆,为从分子水平鉴别本地区半夏奠定基础。

关键词：半夏基因组DNA RAPD 指纹图谱克隆

S1P1受体ERY保守基序突变对FTY720诱导其内化的影响

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现代免疫学 2008年第3期28卷 214-218页

作者：胡为民杨健唐恩洁敬保迁任碧轩川北医学院微生物学与免疫学教研室南充637007 川北医学院免疫学与分子生物学研究所南充637007

1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)是淋巴细胞表面的重要受体。为研究S1P1中ERY保守基序与FTY720诱导其内化的关系,以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1第142位的Arg(R)突变为Asn(N),连同N端HA标签一起,克隆入pcDNA3.1(+)真... 详细信息

1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)是淋巴细胞表面的重要受体。为研究S1P1中ERY保守基序与FTY720诱导其内化的关系,以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1第142位的Arg(R)突变为Asn(N),连同N端HA标签一起,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体。同时PCR扩增野生型S1P1,克隆入pcDNA3.1(+)中。限制性酶切消化、PCR和测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞。G418筛选出稳定细胞株。100 nmol/L FTY720处理12 h后,抗HA-PE抗体染色,用流式细胞仪检测S1P1在HEK293细胞上的表达情况。结果显示HA-S1P1(WT)-pcDNA3.1(+)和HA-S1P1(R142N)-pcDNA3.1(+)载体被成功构建,HA-S1P1(WT)和HA-S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面。FTY720能诱导HA-S1P1(WT)内化,但不能诱导HA-S1P1(R142N)内化。提示FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关。

关键词： 1型1-磷酸鞘氨醇受体 FTY720 流式细胞术内化 HEK293细胞