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不同时期外源6-BA处理对甘草有效成分的影响研究

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中药材 2016年第5期39卷 956-961页

作者：乔晶任广喜李妍芃张权齐梦蝶刘勇刘春生北京中医药大学中药学院北京100102

目的:研究外源细胞分裂素6-苄氨基嘌呤(6-BA)处理对甘草中主要药用成分的影响,探究甘草中各化学成分之间的调控网络。方法:以两年生甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.植株为试验材料,分别于甘草生长期的两个不同阶段6月、7月喷施4种不... 详细信息

目的:研究外源细胞分裂素6-苄氨基嘌呤(6-BA)处理对甘草中主要药用成分的影响,探究甘草中各化学成分之间的调控网络。方法:以两年生甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.植株为试验材料,分别于甘草生长期的两个不同阶段6月、7月喷施4种不同浓度(15、25、50、100 mg/L)的6-BA,利用HPLC检测7种化学成分(甘草酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷和芹糖基异甘草苷)的含量,分析外源刺激后甘草中7种成分含量的动态变化。结果:(1)6月份6-BA处理各组,7种成分含量的提高幅度最大值均远大于7月份处理组,其中,6月份100 mg/L的6-BA处理3个月后,其7种成分提高幅度分别比对照高出59.34%、71.14%、57.31%、16.36%、30.17%、80.26%、91.90%;(2)不同浓度处理组影响最大的成分为甘草酸;(3)6-BA处理有抵御自然生长条件下甘草中黄酮类含量降低的作用;(4)6-BA处理虽然对甘草中的化学成分含量有一定影响,但并不改变其化学成分间组成变化。结论:外源6-BA处理可以同时提高甘草中甘草酸含量以及黄酮类物质的积累。

关键词： 6-苄氨基嘌呤甘草酸药用成分动态变化

油菜素内酯对甘草性状及7种化学成分含量的影响

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中国中药杂志 2016年第2期41卷 197-204页

作者：乔晶胡峻李妍芃任广喜项妤臧艺玫刘勇刘春生北京中医药大学中药学院北京100102

该文以两年生乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis植株为试验材料,于甘草生长旺盛的7月喷施4种不同质量浓度(0.1,0.4,0.7,1.0 mg·L-1)的油菜素内酯,分别于8,9,10月取样测量其性状(株高、地茎、节数、节间高度、根长、根粗、根鲜重、根干... 详细信息

该文以两年生乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis植株为试验材料,于甘草生长旺盛的7月喷施4种不同质量浓度(0.1,0.4,0.7,1.0 mg·L-1)的油菜素内酯,分别于8,9,10月取样测量其性状(株高、地茎、节数、节间高度、根长、根粗、根鲜重、根干重),利用HPLC检测7种化学成分(甘草酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷和芹糖基异甘草苷)的含量,分析外源油菜素内酯处理后栽培甘草的性状及7种成分含量的动态变化,为提高栽培甘草的产量和质量提供参考依据。结果表明,0.7 mg·L-1的油菜素内酯处理2个月后,其株高、地茎、根长、根粗、根鲜重、根干重均比对照提高,其提高幅度为15.09%,6.15%,16.52%,8.46%,21.90%,29.41%;其化学成分除异甘草素外,甘草酸,甘草苷,异甘草苷,甘草素,芹糖基甘草苷,芹糖基异甘草苷分别比对照提高20.16%,45.31%,53.56%,27.66%,23.54%,8.46%。并且BR对栽培甘草的作用在处理完2个月后达到最佳值。说明外源喷施BR可以同时提高栽培甘草的产量和质量。

关键词：栽培甘草油菜素内酯甘草酸性状药材质量

粉红粘帚菌的ATMT体系构建及定殖甘草条件优化

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中国实验方剂学杂志 2023年第4期29卷 126-133页

作者：史启今王潇晗任广喜姜丹刘春生北京中医药大学中药学院北京102488

目的:建立并优化根癌农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系,优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件,为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础。方法:分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面对根癌农杆... 详细信息

目的:建立并优化根癌农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系,优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件,为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础。方法:分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面对根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)条件进行优化并优选转化子。采用正交试验,以共培养温度、共培养时间和孢子浓度为考察因素,定殖率为指标,优化粉红粘帚菌定殖甘草的条件。结果:粉红粘帚菌最适转化条件为共培养时间60 h、孢子浓度1×10^(7) cfu·mL^(-1)、乙酰丁香酮浓度150μmol·L^(-1),此条件下的转化效率为每1×10^(7)个受体真菌孢子可获得135个转化子。通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色结果检测转化的准确性与稳定性。粉红粘帚菌通过浸种法定殖甘草的最佳条件为共培养温度25℃、共培养时间36 h、孢子浓度1×10^(6) cfu·mL^(-1),此条件下定殖率71.11%。结论:本研究成功建立了稳定高效的粉红粘帚菌ATMT体系及其定殖甘草的技术体系,可为甘草生物菌肥的开发奠定基础。

关键词：粉红粘帚菌根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT) 绿色荧光蛋白 β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色甘草转化子正交试验

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甘草UGDH1基因的克隆、生物信息学及表达分析

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中国实验方剂学杂志 2021年第12期27卷 133-140页

作者：孙一帆任广喜李平姜丹刘春生北京中医药大学中药学院北京102488

目的:对甘草尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UGDH)基因进行克隆、生物信息学及表达分析。方法:提取6周龄乌拉尔甘草幼苗根、茎、叶的总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆GuUGDH1基因(Gu表示甘草)互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列,测序并进... 详细信息

目的:对甘草尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UGDH)基因进行克隆、生物信息学及表达分析。方法:提取6周龄乌拉尔甘草幼苗根、茎、叶的总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆GuUGDH1基因(Gu表示甘草)互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列,测序并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术进行组织特异性分析。结果:克隆所得GuUGDH1基因的开放阅读框(ORF)全长1 443 bp,编码480个氨基酸残基(GenBank登录号MT968993);生物信息学分析显示,GuUGDH1属于稳定的酸性亲水蛋白,相对分子质量53.056 kDa,等电点5.89,不含信号肽,不含跨膜螺旋且都在膜外;含有3个典型的保守结构域,属于尿苷二磷酸(UDP)-葡萄糖/鸟苷二磷酸(GDP)-甘露糖脱氢酶家族;系统进化分析表明,GuUGDH1基因与豆科植物大豆Glycine max,密花豆Spatholobus suberectus的亲缘关系较近;Real-time PCR检测结果表明,在6周龄甘草幼苗的根、茎、叶中都能检测到GuUGDH1基因的表达,根的表达量显著高于茎和叶。结论:本研究克隆得到了甘草UGDH1基因并对其蛋白序列特征进行了系统分析,可为进一步研究UGDH1蛋白的催化功能提供理论依据。

关键词：甘草 UGDH1基因克隆生物信息学聚合酶链式反应(PCR)

基于天竺黄中15种蛋白质氨基酸含量分析的营养价值评价

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1809-1817页

作者：孔祥河任广喜徐裕彬姜丹刘春生北京中医药大学北京102488 河北橘井药业有限公司河北安国071200

通过PITC柱前衍生化-HPLC测定天竺黄中15种蛋白质氨基酸的含量,结果发现15种总蛋白质氨基酸(TAA)质量分数为0.61~12.25 mg·g^(-1),此15种蛋白质氨基酸中平均含量排名前五的是天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)和... 详细信息

通过PITC柱前衍生化-HPLC测定天竺黄中15种蛋白质氨基酸的含量,结果发现15种总蛋白质氨基酸(TAA)质量分数为0.61~12.25 mg·g^(-1),此15种蛋白质氨基酸中平均含量排名前五的是天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)和缬氨酸(Val)。必需蛋白质氨基酸(EAA)质量分数为0.24~4.75 mg·g^(-1),儿童必需蛋白质氨基酸(CEAA)质量分数为0.30~4.73 mg·g^(-1),非必需蛋白质氨基酸(NEAA)质量分数为0.40~7.50 mg·g^(-1),药用蛋白质氨基酸(MAA)质量分数为0.36~6.51 mg·g^(-1),呈味蛋白质氨基酸中甜味(SAA)、苦味(BAA)、鲜味(FAA)和无味(OAA)蛋白质氨基酸质量分数分别为0.22~4.70、0.19~4.03、0.13~2.26、0.06~1.26 mg·g^(-1),甜味蛋白质氨基酸含量最高,苦味蛋白质氨基酸次之。21批天竺黄中蛋白质氨基酸成分组成一致,但其含量却存在显著差异。在3个产地中,广东产地的总蛋白质氨基酸(TAA)含量、必需蛋白质氨基酸(EAA)含量、儿童必需蛋白质氨基酸(CEAA)含量、非必需蛋白质氨基酸(NEAA)含量、药用蛋白质氨基酸(MAA)含量、呈味蛋白质氨基酸含量均是最高。运用氨基酸比值(RAA)、氨基酸比值系数(RCAA)、氨基酸比值系数分(SRCAA)进行天竺黄中蛋白质氨基酸的营养价值评价,结果表明,广东产地的天竺黄营养价值更优。基于天竺黄中15种蛋白质氨基酸含量分析的营养价值评价,以期为天竺黄的质量等级评价提供数据支撑,也为其资源的开发利用奠定基础。

关键词：天竺黄异硫氰酸苯酯(PITC) 柱前衍生化蛋白质氨基酸含量营养价值评价

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欧李种子质量检验规程及分级标准研究

中国中药杂志 2014年第21期39卷 4191-4196页

作者：文浩任广喜高雅罗隽刘春生李卫东北京中医药大学中药学院北京100102

欧李作为郁李仁的重要基原之一,到目前为止,其种子质量检验规程和分级标准仍未建立。该研究通过对欧李种子进行扦样、净度、千粒重、含水量、生活力和发芽率等指标测定条件的研究,建立了适合欧李种子自身特点的检验规程。用建立的检验... 详细信息

欧李作为郁李仁的重要基原之一,到目前为止,其种子质量检验规程和分级标准仍未建立。该研究通过对欧李种子进行扦样、净度、千粒重、含水量、生活力和发芽率等指标测定条件的研究,建立了适合欧李种子自身特点的检验规程。用建立的检验规程对50份取自不同欧李主产区的欧李种子进行检验,通过聚类分析制定了欧李种子的质量分级标准。最终将欧李种子分成3个等级:1级种子的发芽率≥68%,千粒重≥383 g,净度≥94%,含水量≤5%;2级种子发芽率≥26%,千粒重≥266 g,净度≥73%,含水量≤9%;3级种子发芽率≥10%,千粒重≥208 g,净度≥50%,含水量≤13%。

关键词：欧李种子检验规程分级标准

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天竺黄本草考证

中国中药杂志 2023年第24期48卷 6812-6816页

作者：孔祥河任广喜徐裕彬姜丹刘春生北京中医药大学北京102488 河北橘井药业有限公司河北安国071200

通过研读历代本草、医典古籍等资料,发现关于天竺黄的记载存在差异,为正本清源,该研究以本草古籍为基础,结合植物形态和调查研究,对其始载古籍、品名、功效主治和质量评价标准进行考证。在早期记载中,天竺黄还有多个不同名称,例如竹黄... 详细信息

通过研读历代本草、医典古籍等资料,发现关于天竺黄的记载存在差异,为正本清源,该研究以本草古籍为基础,结合植物形态和调查研究,对其始载古籍、品名、功效主治和质量评价标准进行考证。在早期记载中,天竺黄还有多个不同名称,例如竹黄、天竹黄、竹膏、竹糖、竺黄等,且目前所知最早使用天竺黄为正名的是《日华子本草》;在历代古籍中,有关天竺黄的记载最早也是出现于《日华子本草》,而非《蜀本草》或其他古籍。《日华子本草》对其产地、功效主治也进行了相关描述,虽因其认知有限,存在错误,但为今后研究天竺黄提供思路,对以后形成成熟的体系具有开创性意义。随着研究深入,天竺黄的功效主治从《日华子本草》开始也是一脉相承,古今变化不大且经历多年临床佐证,逐步完善;在考证过程中,笔者发现,古籍中关于天竺黄质量评价的记载不多,但也为今后天竺黄的质量等级标准的制定奠定相应的基础。

关键词：天竺黄始载古籍品名功效主治质量等级评价

基于高通量测序技术的濒危植物黄瑞香Daphne giraldii Nitsche根部内生真菌多样性研究

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药学学报 2021年第3期56卷 872-878页

作者：贺元慕祺瑞白贞芳姜丹任广喜刘春生北京中医药大学中药学院北京102488

通过研究濒危植物黄瑞香根部真菌种类的多样性,为濒危植物黄瑞香真菌库的建立及筛选促进黄瑞香生长和提高其活性成分祖师麻甲素含量的内生真菌提供科学依据。以甘肃、山西两省的9份野生黄瑞香植株为研究对象,利用Illumina高通量测序技... 详细信息

通过研究濒危植物黄瑞香根部真菌种类的多样性,为濒危植物黄瑞香真菌库的建立及筛选促进黄瑞香生长和提高其活性成分祖师麻甲素含量的内生真菌提供科学依据。以甘肃、山西两省的9份野生黄瑞香植株为研究对象,利用Illumina高通量测序技术对其测序并进行生物信息学分析,共获得632766条有效序列,包括348个OTU,4门,20纲,48目,108科,154属,208种,丰度占比前3的真菌属之和能够占到总丰度的65%以上,最高可以达到98.4%,链格孢属(Altemaria)、茎点霉属(Phoma)为黄瑞香的核心菌属,链格孢属为优势属;黄瑞香根部内生真菌多样性丰富,不同产区内生真菌多样性依次为:甘谷县>五台县>宕昌县。

关键词：高通量测序黄瑞香内生真菌多样性濒危植物

尖孢镰刀菌ATMT体系的构建及其对甘草的促生效果评价

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中国中药杂志 2024年第11期49卷 2882-2888页

作者：陈嘉欣朱泓宇任广喜左鑫姜丹刘春生北京中医药大学中药学院北京102488

该研究旨在通过耐盐能力、产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷能力、产铁载体能力等指标评价一株甘草内生尖孢镰刀菌的体内功能,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术建立该菌的稳定遗传转化体系,并通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄... 详细信息

该研究旨在通过耐盐能力、产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷能力、产铁载体能力等指标评价一株甘草内生尖孢镰刀菌的体内功能,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术建立该菌的稳定遗传转化体系,并通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色的效率检测转化子的稳定性与染色高效性,筛选出高效稳定的转化子用于回染甘草,评价其对甘草幼苗生长的影响。研究结果表明该菌耐盐性较好,在含7%氯化钠的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上仍能生长,但生长速度随着PDA培养基中氯化钠含量的增高而减缓;该菌具有产吲哚乙酸的功能,其发酵液中IAA的质量浓度约为3.32mg·m L^(-1)。该研究成功构建了该菌的遗传转化体系,且其根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)体系高效而稳定。筛选获得1株兼具染色高效性和遗传稳定性的转化子,该转化子在甘草植株中的回染率为76.92%,能够显著提高一月龄甘草幼苗的主根长,促进甘草幼苗根部的生长发育。该研究结果可以为生物菌肥的开发及优质甘草的生长调控奠定基础。

关键词：尖孢镰刀菌根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT) 体内功能转化子甘草促生