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枯草芽孢杆菌K-268的分离鉴定及对水稻稻瘟病的防病效果

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生物技术通报 2022年第6期38卷 136-146页

作者：祖雪周瑚朱华珺任佐华刘二明湖南农业大学植物保护学院长沙410128 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 南方粮油作物协同创新中心长沙410128

生防细菌是绿色防控稻瘟病的有效措施。为了发掘高效拮抗稻瘟病菌的生防细菌,本研究采用平板对峙法从感病品种K020268的健康稻株叶片中筛选获得1株对稻瘟病菌抑制效果较好的拮抗细菌K-268,同时测定该菌的抑菌谱。通过形态学观察、生理... 详细信息

生防细菌是绿色防控稻瘟病的有效措施。为了发掘高效拮抗稻瘟病菌的生防细菌,本研究采用平板对峙法从感病品种K020268的健康稻株叶片中筛选获得1株对稻瘟病菌抑制效果较好的拮抗细菌K-268,同时测定该菌的抑菌谱。通过形态学观察、生理生化鉴定16S rRNA和gyrA序列分析对其进行菌种鉴定,并初步研究了该菌株的生物学特性和对稻叶瘟的防治效果。结果表明,菌株K-268对稻瘟病菌菌丝生长抑制率为86.30%±0.70%,同时对水稻纹枯病菌、玉米大斑病菌及柑橘沙皮病菌等供试的14株植物病原菌均有抑制作用;经鉴定菌株K-268为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌株对数生长期为14-32 h,生长最适温度为30℃,生长最适pH值为6.0-7.0,并且其具有良好的耐盐性。离体接种实验结果表明,稀释10倍即菌液浓度6×10^(8)CFU/mL时,预防组和治疗组的叶瘟发病率分别为14.81%和23.46%,效果与稀释750倍的75%三环唑稀释液(WP)效果相当。活体喷雾接种结果表明,在接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液(1×10^(6)个/mL)前24 h喷施稀释10倍(6×10^(8)CFU/mL)的发酵液和接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液后24 h喷施稀释10倍的发酵液对稻叶瘟的防效分别为59.00%和60.23%,效果接近500稀释液的40%稻瘟灵(EC)。因此K-268在水稻稻瘟病生物防治中具有一定的开发和应用价值。

关键词：稻瘟病枯草芽孢杆菌分离鉴定生物防治

茶炭疽病拮抗链霉菌的筛选鉴定与拮抗能力测定

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中国生物防治学报 2023年第3期39卷 646-656页

作者：张玉丹谭琳任佐华杨艺帅杨学宇胡秋龙湖南农业大学茶学教育部重点实验室长沙410128 湖南农业大学园艺学院长沙410128 湖南农业大学植物保护学院长沙410128

茶炭疽病是茶树的一种重要叶部病害,发生时严重影响茶叶产量和品质,给茶叶生产带来经济损失。为获得对茶炭疽病菌刺盘孢菌Colletotrichum camelliae具有良好拮抗效果的链霉菌,采用稀释涂布平板法从茶园根际土壤中分离放线菌菌株,利用平... 详细信息

茶炭疽病是茶树的一种重要叶部病害,发生时严重影响茶叶产量和品质,给茶叶生产带来经济损失。为获得对茶炭疽病菌刺盘孢菌Colletotrichum camelliae具有良好拮抗效果的链霉菌,采用稀释涂布平板法从茶园根际土壤中分离放线菌菌株,利用平板对峙法筛选具有较高拮抗活性的菌株;结合其形态特征、培养特征、生理生化特性和分子生物学对其进行种属鉴定;采用扫描电镜观察菌株JS4-F对茶炭疽病菌的生长抑制作用,离体叶片法和盆栽防效测定其发酵液对茶炭疽病的室内防治效果,平板对峙法测定其抗菌谱。结果表明,分离筛选获得一株对茶炭疽病菌具有较好拮抗作用的菌株JS4-F,根据该菌的形态特征、生理生化特性初步将其鉴定为链霉菌属,通过联合16S rRNA、gyrB、ropB、recA、trpB基因测序结果构建系统发育树,JS4-F菌株被鉴定为藤黄生孢链霉菌Streptomyces luteosporeus。菌株JS4-F对茶炭疽病菌的拮抗效果达75.59%,扫描电镜表明其能使茶炭疽菌菌丝畸形、皱褶、菌丝之间相互缠绕;氮源利用试验表明,菌株JS4-F能利用L-精氨酸、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-色氨酸,能在6%NaCl浓度下生长,pH的耐受范围为5~12。菌株JS4-F发酵液原液室内离体叶片防治效果达52.54%,稀释10倍后防治效果为39.94%,稀释100倍后防治效果为30.56%;盆栽防效试验表明,菌株JS4-F发酵液原液对茶炭疽病的防治效果达44.59%;拮抗菌株JS4-F对其它8种植物病原菌均具有较好的拮抗作用,抑制效果均大于60%。综上,菌株JS4-F对茶炭疽病有较好的防治潜力,能给茶炭疽病的生物防治提供参考资源和技术依据。

关键词：茶炭疽病链霉菌拮抗作用生物防治

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多菌种混合发酵水稻秸秆的研究

多菌种混合发酵水稻秸秆的研究

作者：任佐华湖南农业大学

学位级别：硕士

水稻秸秆资源丰富，但由于利用不当，造成大量浪费，引起环境污染，为了解决水稻秸秆作为饲料的营养限制因素，通过现代生物技术，采用黑曲霉(Aspergillus niger)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产朊假丝酵母(Candida utilis)对水... 详细信息

水稻秸秆资源丰富，但由于利用不当，造成大量浪费，引起环境污染，为了解决水稻秸秆作为饲料的营养限制因素，通过现代生物技术，采用黑曲霉(Aspergillus niger)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产朊假丝酵母(Candida utilis)对水稻秸秆进行共菌发酵研究，达到了赋予发酵水稻秸秆纤维素酶、淀粉酶、多种活菌，并改变了秸秆的结构，提高发酵料的蛋白质、氨基酸的含量的目的。主要试验结果如下： 1．发酵培养料组分初步确定，在稻秸秆粉中分别加入占干重30％的麦麸、2％膨润土和1％尿素，以及将发酵料含水量调至70％时，发酵产物中活菌数、纤维素酶和淀粉酶都较高，同时提高了发酵料的氨基酸含量。 2．发酵处理方法以发酵培养料在121℃蒸煮60min冷却后再依次接菌，置于32℃恒温条件下培养。这样有利于菌的生长、酶活力增强，发酵产物的氨基酸含量相应提高，发酵产物在40℃下低温烘干对产物中的活菌数影响较小。 3．发酵工艺采用先接种10％(以干基料重量计，下同)的枯草芽孢杆菌培养液，在32℃恒温条件下培养24h，再接1％黑曲霉培养物培养48h，最后接入30％酵母菌培养液培养48h，终止培养于40℃进行烘干;最终产物粗蛋白含量和总活菌数优于其它试验处理。 4．水稻秸秆多菌接种混合发酵后粗蛋白含量和活菌数的分析表明，发酵终产物测定粗蛋白含量为15.22％，超过了麦麸的粗蛋白含量，基本达到产蛋鸡鸡饲料的粗蛋白含量要求(16-14％)。发酵终产物中总活菌数达到1.18×10cfu／g，也高于相关报道的发酵活菌数水平(1.92×10cfu／g)。通过试验，研制了一种以水稻秸秆为主要原料的功能齐全且适口性好的稻秸秆饲料。

关键词：黑曲霉枯草芽孢杆菌产假朊丝酵母水稻秸秆资源共发酵

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湖南油菜根肿病菌遗传多样性分析

分子植物育种 2022年

作者：赵辉林宇丰钟杰朱宏建张龙杰谢绍兴王维杰周倩任佐华刘二明湖南农业大学植物保护学院植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室湖南省植保植检站怀化市植保植检站沅陵县农业局

油菜(Brassica napus)根肿病已成为湖南油菜上的重要病害。为了解湖南油菜根肿病菌群体的遗传多样性，以期为油菜抗病品种的合理利用提供指导，本研究以8个县市32个主栽油菜品种上分离的100株根肿菌作为研究对象，利用共显性简单重复序...

油菜(Brassica napus)根肿病已成为湖南油菜上的重要病害。为了解湖南油菜根肿病菌群体的遗传多样性，以期为油菜抗病品种的合理利用提供指导，本研究以8个县市32个主栽油菜品种上分离的100株根肿菌作为研究对象，利用共显性简单重复序列(simple sequence repeat， SSR)标记技术对油菜根肿病菌的遗传分化进行研究。研究结果表明，10对SSR引物对100株供试菌株共扩增出了67条带，其中，多态性条带60条，多态性带百分率89.55％，平均引物多态信息含量(polymorphism information content， PIC)值为0.758 3，说明这些多态性标记可以用于根肿菌的遗传多样性分析。聚类分析显示，全部菌株被划分为7个遗传宗谱，大部分根肿菌都按照其地理来源进行聚类。8个地区根肿菌群体的遗传距离在0.045 8～0.491 1之间，其遗传距离和地理距离的Mantel test结果(P=0.027 4<0.05)表明两者显著相关。同时，根据菌株的寄主品种分组分析表明，油菜根肿病菌的遗传变异也来自其品种之间的差异。说明油菜根肿病菌的遗传分化与地理来源和寄主品种都有着一定相关性，但主要依赖地理来源间的差异，相近地理距离的根肿菌有着更近的亲缘关系。

关键词：

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茶轮斑病病原菌的分离鉴定及其拮抗菌筛选

湖南农业大学学报（自然科学版） 2023年第2期49卷 195-200页

作者：杨学宇谭琳张玉丹杨艺帅邓玉莲任佐华胡秋龙茶学教育部重点实验室湖南长沙410128 湖南农业大学园艺学院湖南长沙410128 湖南农业大学植物保护学院湖南长沙410128

从湖南省武陵山区4个茶叶种植基地采集茶轮斑病病叶,采用组织分离法对病原菌进行分离,通过致病性、形态学、分子生物学鉴定,确定病原菌为茶拟盘多毛孢(Pseudopestalotiopsis theae)。以病原菌为指示菌,采用平板对峙法从病叶中筛选得到... 详细信息

从湖南省武陵山区4个茶叶种植基地采集茶轮斑病病叶,采用组织分离法对病原菌进行分离,通过致病性、形态学、分子生物学鉴定,确定病原菌为茶拟盘多毛孢(Pseudopestalotiopsis theae)。以病原菌为指示菌,采用平板对峙法从病叶中筛选得到效果最佳的拮抗菌kc-6,抑菌率为79.86%,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。分析拮抗菌对病原菌菌丝生长的抑制效果,对茶树离体叶片的防效、继代培养稳定性以及对10种作物病原菌的拮抗效果进行评价。结果表明:拮抗菌kc-6可使茶轮斑病病原菌菌丝萎缩变细,部分膨大;其发酵液原液、稀释10倍液和100倍液对茶树离体叶片的防效分别为72.73%、52.55%、3.03%;连续转接培养25次后的抑菌率仍保持70.33%;kc-6菌株对10种作物病原真菌均有抑制效果,其中对茄子褐纹病菌(Phomopsis vexans)、黄瓜枯萎病菌(Phytophthora melonis)、茭白镰刀菌(Fusarium graminearum)的抑制效果较好,抑制率分别为83.00%、80.00%、76.00%。

关键词：茶轮斑病茶拟盘多毛孢解淀粉芽孢杆菌生物防治

枯草芽孢杆菌JN005胞外抗菌物质及对水稻叶瘟防治效果

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中国水稻科学 2020年第5期34卷 470-478页

作者：朱华珺周瑚任佐华刘二明湖南农业大学植物保护学院长沙410128 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 南方粮油作物协同创新中心长沙410128

【目的】检测枯草芽孢杆菌JN005产生的胞外抗菌物质的稳定性和对稻瘟病菌的生物活性,及其对水稻叶瘟的防治效果。【方法】通过不同培养基检测枯草芽孢杆菌JN005产生的抑菌物质,结合平板对峙法、光学显微镜观察、室内离体和活体接种来检... 详细信息

【目的】检测枯草芽孢杆菌JN005产生的胞外抗菌物质的稳定性和对稻瘟病菌的生物活性,及其对水稻叶瘟的防治效果。【方法】通过不同培养基检测枯草芽孢杆菌JN005产生的抑菌物质,结合平板对峙法、光学显微镜观察、室内离体和活体接种来检测JN005菌株胞外抗菌物质对稻瘟病菌拮抗活性和对水稻叶瘟防治效果。【结果】枯草芽孢杆菌JN005能分泌蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶和β-1,3-葡聚糖酶,其胞外抗菌物质对稻瘟病菌生长具有抑制作用。胞外抗稻瘟病菌物质在0℃~100℃和pH 2~12范围内活性较为稳定,且经蛋白酶K处理后不影响其活性,紫外照射12 h以及4℃保存3个月仍有活性。胞外抗菌物质能引起稻瘟病菌菌丝形态畸变,并抑制分生孢子的萌发。室内湘晚籼12号稻瘟病离体叶片接种表明,先用100倍胞外抗菌物质稀释液处理水稻叶片,24 h后接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液(1×105个/mL),其叶瘟发病率为34.07%,效果接近稀释500倍的40%稻瘟灵EC;而先接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液,24 h后用100倍胞外抗菌物质稀释液处理,其发病率为38.52%,与稀释1500倍的75%三环唑(WP)和稀释500倍的40%稻瘟灵(EC)有显著性差异。活体喷雾接种试验表明,于湘晚籼12号秧苗长至3叶1心时,接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液前24 h喷施稀释100倍的胞外抗菌物质稀释液,其叶瘟防效为75.32%;接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液后24 h喷施稀释100倍的胞外抗菌物质稀释液,其防效为71.49%。【结论】JN005菌株胞外抗菌物质对稻瘟病菌的菌丝生长和孢子萌发有直接抑制作用,且对环境稳定性较好,对稻瘟病有较好的预防和治疗作用,有进一步的开发潜力。

关键词：枯草芽孢杆菌胞外抗菌物质稻瘟病防治效果

蜡样芽孢杆菌YN917对水稻稻瘟病菌的拮抗机理及应用

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农药 2023年第3期62卷 213-216页

作者：周瑚刘剑波谭陈勇郑昕威郑晶晶刘二明任佐华湖南农业大学植物保护学院长沙410128 岳阳市检验检测中心湖南岳阳414000

[目的]旨在揭示蜡样芽孢杆菌菌株YN917防治水稻稻瘟病的生防机制。[方法]通过孢子萌发试验、光学显微镜观察、碱性磷酸酶活性分析,研究菌株YN917对稻瘟病菌的拮抗机制。[结果]显微镜观察显示:菌株YN917对水稻稻瘟病菌孢子的萌发及菌丝... 详细信息

[目的]旨在揭示蜡样芽孢杆菌菌株YN917防治水稻稻瘟病的生防机制。[方法]通过孢子萌发试验、光学显微镜观察、碱性磷酸酶活性分析,研究菌株YN917对稻瘟病菌的拮抗机制。[结果]显微镜观察显示:菌株YN917对水稻稻瘟病菌孢子的萌发及菌丝生长具有显著的抑制作用,经处理12 h稻瘟病菌孢子萌发率下降66.0%;盆栽试验结果表明:菌株YN917发酵液处理组的水稻稻瘟病发病症状明显减轻,病情指数平均下降39.68,防治效果达65.61%~68.51%。[结论]蜡样芽孢杆菌菌株YN917对水稻稻瘟病具有较好的抑制作用且生防潜力较大。

关键词：稻瘟病菌蜡样芽孢杆菌菌株 YN917 生物防治

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湖南白菜和红菜薹根肿病菌生理小种鉴定

植物保护 2015年第3期41卷 143-148页

作者：杨华任佐华宋琼黄露刘二明湖南农业大学植物保护学院植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128

为了弄清湖南省白菜和红菜薹根肿病菌生理小种组成和分布,2013年采集长沙、湘潭、益阳、怀化4个地区的十字花科作物白菜、红菜薹根肿病株27个,用Williams根肿病鉴别品种对其进行生理小种鉴定。初步鉴定出5个生理小种,即1号、5号、8号、... 详细信息

为了弄清湖南省白菜和红菜薹根肿病菌生理小种组成和分布,2013年采集长沙、湘潭、益阳、怀化4个地区的十字花科作物白菜、红菜薹根肿病株27个,用Williams根肿病鉴别品种对其进行生理小种鉴定。初步鉴定出5个生理小种,即1号、5号、8号、9号和11号,它们在湖南病区中出现的频率分别为22.3%、18.5%、14.8%、33.3%和11.1%。按寄主生理小种组成,湖南白菜根肿病菌生理小种有1号、5号、9号、11号,红菜薹根肿病菌为8号、9号和11号;按地区生理小种分布,长沙白菜根肿病菌生理小种为5号和9号,湘潭白菜和红菜薹根肿病菌生理小种分别1号、8号和11号,怀化白菜根肿病菌为生理小种9号;益阳白菜和红菜薹根肿病菌分别为生理小种1号、11号、8号和9号。目前,在湖南4个市白菜和红菜薹根肿病菌生理小种是9号。

关键词：十字花科根肿病生理小种鉴定

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枯草芽胞杆菌YN145分离鉴定及抑菌活性

中国生物防治学报 2017年第3期33卷 421-426页

作者：邹秋霞任佐华高诗涵周瑚赵建辉刘二明湖南农业大学植物保护学院长沙410128 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 南方粮油作物协同创新中心长沙410128

为挖掘用于稻瘟病防治的微生物资源,从感病水稻品种湘早籼24号的健康植株茎叶中用稀释分离法获得527个菌株。采用平板对峙法筛选出对稻瘟病菌具有拮抗作用的菌株60个,其中菌株YN145对稻瘟病菌菌丝生长抑制率达84.31%。经形态学和生理生... 详细信息

为挖掘用于稻瘟病防治的微生物资源,从感病水稻品种湘早籼24号的健康植株茎叶中用稀释分离法获得527个菌株。采用平板对峙法筛选出对稻瘟病菌具有拮抗作用的菌株60个,其中菌株YN145对稻瘟病菌菌丝生长抑制率达84.31%。经形态学和生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,将菌株YN145鉴定为枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis。生物活性测定表明,该菌株继代培养25代后,对稻瘟病菌菌丝抑菌效果仍在80%以上。菌株YN145发酵离心上清液经40、60、80、100和120℃处理30 min后,对稻瘟病菌的抑制率分别为91.50%、92.35%、91.78%、90.93%和86.97%;同样发酵上清滤液分别在pH 3、5、7、9和11处理30 min后,对稻瘟病菌的抑制率分别为91.50%、92.92%、92.92%、92.35%和92.63%。表明抗菌物质能耐高温、耐酸碱,菌株YN145作为稻瘟病生防制剂研发具有一定的价值。

关键词：稻瘟病菌枯草芽胞杆菌抑菌活性