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胃肠微环境下吻合钉仿生表面对细菌黏附的微流场仿真

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医用生物力学 2024年第2期39卷 339-345页

作者：冯荣川胡亚辉马言张春秋刘淑红刘帮付蔚华天津理工大学天津市先进机电系统设计与智能控制重点实验室天津300384 机电工程国家级实验教学示范中心(天津理工大学) 天津300384 天津市骨植入物界面功能化与个性化研究企业重点验室天津300190 天津医科大学总医院胃肠肛肠外科天津300052

目的模拟在吻合钉植入人体以后,吻合钉表面与肠壁组织之间的微流场环境,研究其仿生疏水化表面对细胞外液流速和壁面处流体剪切力的影响,进而通过流场的变化调控细菌的黏附。方法观察鲨鱼皮肤微结构,建立细菌在微流场环境中的简化二维运... 详细信息

目的模拟在吻合钉植入人体以后,吻合钉表面与肠壁组织之间的微流场环境,研究其仿生疏水化表面对细胞外液流速和壁面处流体剪切力的影响,进而通过流场的变化调控细菌的黏附。方法观察鲨鱼皮肤微结构,建立细菌在微流场环境中的简化二维运动模型。通过计算流体动力学数值仿真,模拟静态流场和动态流场中,细菌分别在光滑表面和微织构表面的运动,比较两种表面环境下细菌周围的流场特征和流体剪切力,分析流体剪切力影响细菌黏附的内在机制。结果仿生微织构的加入增强了微流场内细胞外液的流速,在静态流场中流体对细菌的黏滞作用较小;动态流场中流体对细菌的推动作用更强;一定范围内的微坑宽度使微织构壁面所受流体剪切力更大。结论吻合钉的仿生微织构表面,加快了细胞外液的流速,提高了微织构壁面和细菌所受流体剪切力,对细菌的附着有一定影响。研究结果为吻合钉抑菌表面的研究提供了理论依据。

关键词：仿生鲨鱼皮肤结构吻合钉抑菌性细胞外液流速壁面剪切力

CD40RNA干扰小鼠树突状细胞抑制异系T淋巴细胞增殖的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第3期30卷 234-238页

作者：付蔚华朱杰昌朱理玮天津医科大学总医院普通外科 300052

目的构建针对小鼠CIM0基因的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）慢病毒载体，制备低表达CD40的树突状细胞（dendriticcells，DC），探讨其阻断CIM0／CIMOL共刺激通路诱导异系T淋巴细胞无反应的作用机制。方法采用培养基选择法体外培养小... 详细信息

目的构建针对小鼠CIM0基因的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）慢病毒载体，制备低表达CD40的树突状细胞（dendriticcells，DC），探讨其阻断CIM0／CIMOL共刺激通路诱导异系T淋巴细胞无反应的作用机制。方法采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC，构建针对小鼠CIM0RNAi慢病毒载体，体外感染小鼠骨髓源DC。荧光实时定量PCR及流式细胞术检测感染前后CD40mRNA及DC表面抗原CD40表达。混合淋巴细胞培养观察CD40RNAi慢病毒感染DC对异系T淋巴细胞增殖能力的影响。结果体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC。成功构建小鼠CD40RNAi慢病毒载体，检测滴度为8×10^9TU／ml。慢病毒感染DC后与感染前相比，明显抑制CD40mRNA的表达（P〈0．05），CIM0蛋白表达也明显减少（P〈0．05）。混合淋巴细胞培养结果显示，CD40RNAi慢病毒感染DC组（1．381±0．442）与未感染组（2．444±0．485）及空慢病毒感染DC组（2．294±0．367）相比，淋巴细胞刺激指数（sI）明显下降（P〈0．01）。结论培养基选择法可收获大量骨髓源DC，所获骨髓源DC能激活初始型T细胞免疫应答。CD40RNAi慢病毒感染小鼠骨髓源DC，可以使DC低表达CD40蛋白。CD40RNAi慢病毒感染的DC体外刺激异系T淋巴细胞增殖的能力下降。为研究CIM0RNAi在同种器官移植诱导免疫耐受奠定基础。

关键词：树突状细胞 T淋巴细胞 C1MO RNAi 慢病毒载体

转染FasL基因树突状细胞诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 97-101页

作者：付蔚华赵娜邱宇杰朱理玮天津医科大学总医院普通外科 300052

目的制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞（dendritic cell，DC）并探讨其诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的机理。方法采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC，脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC，实时定量PCR检测转染前后FasL m... 详细信息

目的制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞（dendritic cell，DC）并探讨其诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的机理。方法采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC，脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC，实时定量PCR检测转染前后FasL mRNA的表达，流式细胞仪和免疫蛋白印迹检测转染前后FasL蛋白的表达。异系小鼠静脉分别输注未转染DC、转染空质粒DC和转染FasL的DC，7d后TdT介导的原位末端标记法（TUNEL）和流式细胞仪检测脾脏中T淋巴细胞凋亡。结果体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC，转染FasL基因的DC较未转染DC FasL mRNA和FasL蛋白表达明显升高。对脾脏中T淋巴细胞凋亡的检测发现，转染FasL的DC组凋亡指数（11．67±1．53）明显高于未转染DC组（2．67±0．58）和转染空质粒组（3．33±0．58），P〈0．01。结论培养基选择法可收获大量骨髓源DC，脂质体转染FasL基因至小鼠骨髓源DC，可以使DC高表达FasL蛋白。转染FasL的DC输注能明显诱导异系小鼠脾脏T淋巴细胞凋亡。

关键词：树突状细胞 T淋巴细胞细胞凋亡

激动型CD40单链抗体增强小鼠NK细胞抗肿瘤作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第4期38卷 260-267页

作者：王曦张骜陈一川陆礼付蔚华天津医科大学总医院普通外科 300052

目的获得高纯度的激动型抗小鼠CD40单链抗体（scFv），并体内外验证激动型抗小鼠CD40 scFv增强自然杀伤细胞（NK）杀伤肿瘤的作用。方法亲和层析技术获得高纯度的激动型抗小鼠CD40 scFv蛋白。激动型抗小鼠CD40 scFv体外激活DC细胞，ELIS... 详细信息

目的获得高纯度的激动型抗小鼠CD40单链抗体（scFv），并体内外验证激动型抗小鼠CD40 scFv增强自然杀伤细胞（NK）杀伤肿瘤的作用。方法亲和层析技术获得高纯度的激动型抗小鼠CD40 scFv蛋白。激动型抗小鼠CD40 scFv体外激活DC细胞，ELISA法检测培养上清中IL-12表达水平，反应CD40 scFv对DC的激活能力。将激活的DC细胞与小鼠NK细胞共培养后，将NK细胞与小鼠成纤维瘤T6-17细胞共培养，用WST-8法检测激活后NK细胞对T6-17的杀伤作用。进一步构建BALB/c裸鼠的T6-17肿瘤模型，给予CD40 scFv瘤体注射，观察对肿瘤生长抑制作用。种瘤后第20天处死小鼠，ELISA检测肿瘤组织匀浆中IL-12和IFN-γ水平。流式细胞术检测肿瘤组织匀浆中浸润NK细胞数量的变化，免疫组化法检测NKG2D表达水平的变化。结果成功构建CD40 scFv-pET28a重组质粒，并经基因测序验证无误。SDS-PAGE和His-tag Western blot检测证实CD40 scFv表达成功，蛋白质相对分子质量约为27×103。CD40 scFv处理的DC细胞的培养上清中IL-12水平为（555.86±40.48） pg/ml，较对照组明显升高（P〈0.05）。利用各组激活后的DC细胞培养上清刺激NK细胞后，与CD40 scFv处理的DC共培养的NK细胞对T6-17细胞的杀伤能力为（72.23±3.99）%，较对照组明显升高（P〈0.05）。CD40 scFv在体内对BALB/c裸鼠的T6-17肿瘤生长有明显抑制作用，肿瘤最终生长体积相较于对照组显著降低（P〈0.05）。CD40 scFv组肿瘤组织匀浆中IL-12和IFN-γ水平分别为（188.801±32.718） pg/ml和（121.428±30.994） pg/ml，均较生理盐水（normal saline，NS）组显著升高（P〈0.05）。CD40 scFv组肿瘤组织NKG2D表达阳性率为（8.18±2.01）%，较NS组明显升高（P〈0.05）。结论激动型CD40 scFv可以通过DC细胞增强NK细胞的抗肿瘤能力。

关键词：激动型CD40单链抗体树突状细胞自然杀伤细胞 T6-17细胞

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胃肠间质瘤合并消化道出血的预后分析

中华肿瘤杂志 2016年第5期38卷 377-380页

作者：李若彤张国敬付蔚华李卫东天津医科大学总医院普通外科 300052

目的探讨原发性胃肠间质瘤（GIST）消化道出血与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析2008年4月至2014年12月间收治的200例GIST患者的临床病理和术后随访资料，比较消化道出血与GIST患者临床病理特征和预后的关系。结果200例GIST... 详细信息

目的探讨原发性胃肠间质瘤（GIST）消化道出血与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析2008年4月至2014年12月间收治的200例GIST患者的临床病理和术后随访资料，比较消化道出血与GIST患者临床病理特征和预后的关系。结果200例GIST患者根据消化道出血情况分为消化道出血组（57例）和未出血组（143组）。在消化道出血组中，肿瘤直径为1．8～22．0cm，平均为6．5cm；肿瘤位于胃31例，小肠25例，结直肠1例；核分裂象≤5个／50HPF者50例，6～10个／50HPF者6例，〉10个／50HPF者1例；其中有6例患者合并肿瘤破裂。在消化道未出血组中，肿瘤直径0．4～18cm，平均为2．5cm；肿瘤位于胃125例，小肠8例，结直肠1例，其他（食管及未知来源）9例：核分裂象≤5个／50HPF者141例，6～10个／50HPF者1例，〉10个／50HPF者1例；有1例患者合并肿瘤破裂。GIST消化道出血与肿瘤大小、核分裂象、肿瘤部位、肿瘤危险分级、肿瘤破裂和肿瘤复发情况有关（均P〈O．05）。200例GIST患者的3、5年生存率分别为96．5％和8618％，有16例患者出现复发和（或）转移，死亡11例。消化道出血组和未出血组患者的5年生存率分别为76．2％和91．6％．差异有统计学意义（P〈0．05）。结论合并消化道出血的GIST患者预后较差，应引起临床重视，

关键词：胃肠道间质肿瘤出血预后

RNA干扰技术阻断CD40/CD40L共刺激通路对小鼠移植心存活时间的影响

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中华器官移植杂志 2010年第8期31卷 488-491页

作者：朱杰昌付蔚华朱理玮天津医科大学总医院普通外科 300052

目的探讨慢病毒介导RNA干扰（RNAi）技术阻断CD40/CD40L共刺激通路对小鼠移植心存活时间的影响.方法以针对小鼠CD40基因的RNAi慢病毒载体在体外感染供者骨髓来源的树突状细胞（DC）,制备低表达CD40的耐受性DC（Tol-DC）.荧光实时定量... 详细信息

目的探讨慢病毒介导RNA干扰（RNAi）技术阻断CD40/CD40L共刺激通路对小鼠移植心存活时间的影响.方法以针对小鼠CD40基因的RNAi慢病毒载体在体外感染供者骨髓来源的树突状细胞（DC）,制备低表达CD40的耐受性DC（Tol-DC）.荧光实时定量聚合酶链反应及流式细胞术检测DC感染前后CD40 mRNA及DC表面抗原CD40、CD11c和MHCⅡ的表达.建立小鼠异位腹腔心脏移植模型.在小鼠异位心脏移植前7 d,经静脉给受者输注体外制备的低表达CD40的Tol-EC（慢病毒感染DC注射组）,并设置单纯移植对照组和未感染DC注射组作为对照.观察各组移植心的存活时间,评定各组术后第7天移植心排斥反应的病理分级.结果 CD40-RNAi慢病毒载体在体外感染DC 48 h后,CD40 mRNA表达明显受到抑制,抑制率为80.9%;CD40表达明显下降,由（74.37±4.08）%降至（40.07±4.03）%（P＜0.05）.单纯移植对照组、未感染DC注射组和慢病毒感染DC注射组移植心存活时间分别为：（8±2）d、（9±1）d和（14±4）d,慢病毒感染DC注射组移植心存活时间明显延长,并且移植心排斥反应病理分级显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论阻断CD40/C40L共刺激通路可抑制异系T淋巴细胞的活化,从而抑制急性排斥反应,延长小鼠移植心的存活时间.

关键词： RNA干扰共刺激通路树突状细胞 CD40 心脏移植

调节性T细胞对输注树突状细胞后小鼠移植心脏的保护作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第4期33卷 298-302页

作者：朱杰昌付蔚华许翼麟朱理玮天津医科大学总医院普通外科 300052

目的探讨在输注供者低表达CD40的树突状细胞（dendriticcells，DC）后，调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）对小鼠移植心脏的保护作用。方法以针对小鼠CD40基因的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）慢病毒载体在体外感染供者骨髓来... 详细信息

目的探讨在输注供者低表达CD40的树突状细胞（dendriticcells，DC）后，调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）对小鼠移植心脏的保护作用。方法以针对小鼠CD40基因的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）慢病毒载体在体外感染供者骨髓来源的DC，制备低表达CD40的耐受性DC（T01-DC）。建立小鼠异位腹腔心脏移植模型。设置异系对照组、未感染DC组及单纯慢病毒感染DC组。观察各组移植心脏存活时间，评定术后7d移植物排斥反应、病理分级，并以流式细胞术检测手术前后外周血CD4^＋CD25^＋Treg变化水平。结果CD40-RNAi慢病毒载体在体外感染DC48h后，CIM0mRNA表达明显受到抑制，抑制效率为80．9％。CD40表达明显下降，由74．37％±4．08％降至40．07％±4．03％（P〈0．05）。与异系对照组和未感染DC组相比，单纯慢病毒感染DC组移植心脏存活时间（14±4）d明显延长（P〈0．01）；术后7d急性排斥反应病理分级均明显降低（P〈0．05）；术后3d．7d外周血CD4^＋CD25^＋Treg水平均明显升高（P〈0．05）。结论CD4^＋CD25^＋Treg对输注供者低表达CD40的树突状细胞的小鼠移植心脏具有保护作用。

关键词：调节性T细胞共刺激通路树突状细胞 CD40 心脏移植

激动性CD40抗体通过调节Th1/Th2平衡增强抗肿瘤作用的机制研究

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中国肿瘤临床 2018年第4期45卷 163-166页

作者：郑凯源黄飞陆礼张骜付蔚华天津医科大学总医院普通外科研究所天津市300052

目的:探讨激动性CD40抗体中单链抗体(CD40Sc Fv)和单克隆抗体(CD40m Ab)抑制小鼠乳腺癌细胞生长情况及对癌组织中Th1和Th2平衡的改变,分析通过调节Th1/Th2平衡达到抗肿瘤作用的机制。方法:将含CD40Sc Fv基因片段的重组质粒转化至Rosett... 详细信息

目的:探讨激动性CD40抗体中单链抗体(CD40Sc Fv)和单克隆抗体(CD40m Ab)抑制小鼠乳腺癌细胞生长情况及对癌组织中Th1和Th2平衡的改变,分析通过调节Th1/Th2平衡达到抗肿瘤作用的机制。方法:将含CD40Sc Fv基因片段的重组质粒转化至Rosetta大肠杆菌中,诱导表达并经纯化后获得有功能的CD40Sc Fv蛋白,行SDS-PAGE和Western blot检测。体外培养小鼠乳腺癌4T1细胞,在Balb/C小鼠皮下成瘤建立模型,分为CD40Sc Fv组、CD40m Ab组和生理盐水组(NS组),分别给予CD40Sc Fv、CD40m Ab和生理盐水,观察各组小鼠肿瘤体积的变化。取出瘤体组织,ELISA法检测肿瘤组织上清中IL-12的浓度。提取肿瘤组织浸润淋巴细胞(TILs),应用流式细胞技术检测TILs中Th1与Th2的比例。结果:诱导表达的CD40Sc Fv鉴定表达成功,分子大小约为27KDa,蛋白纯化后经BCA测定浓度为1.12 mg/mL。CD40Sc Fv组与CD40m Ab组肿瘤大小分别为(3.044±0.239)cm^3与(2.749±0.261)cm^3,均小于NS组的(3.933±0.326)cm^3,差异具有统计学意义(P<0.05)。CD40Sc Fv组、CD40m Ab组肿瘤组织中IL-12浓度分别为(396.27±48.13)pg/mL、(457.63±58.37)pg/mL,均显著高于NS组的(79.51±14.97)pg/mL,差异具有统计学意义(P<0.05)。CD40Sc Fv组与CD40m Ab组的Th1/Th2细胞比值分别为6.32±0.87与5.54±0.71,均显著高于NS组的1.79±0.38,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:激动性CD40抗体在体内通过调节Th1与Th2的比例,发挥抑制肿瘤生长的作用,其中通过促进DC活化后分泌IL-12是影响肿瘤微环境中Th1/Th2平衡的重要机制之一。

关键词：激动性CD40抗体肿瘤微环境辅助性T淋巴细胞

输注转染FasL基因的供者树突状细胞减轻小鼠心脏移植排斥反应

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中华器官移植杂志 2008年第5期29卷 261-263页

作者：付蔚华赵娜邱宇杰朱理玮天津医科大学总医院普通外科 300052

目的探讨转染FasL基因的供者树突状细胞（DC）对小鼠心脏移植排斥反应的影响。方法分离并培养C57BL／6小鼠骨髓Dc，然后采用脂质体法以自行构建的pTracer-FasL真核表达质粒转染DC。以C57BL／6小鼠为供者，Balb／c小鼠为受者，将其分为... 详细信息

目的探讨转染FasL基因的供者树突状细胞（DC）对小鼠心脏移植排斥反应的影响。方法分离并培养C57BL／6小鼠骨髓Dc，然后采用脂质体法以自行构建的pTracer-FasL真核表达质粒转染DC。以C57BL／6小鼠为供者，Balb／c小鼠为受者，将其分为转染组（n=12）、未转染组（n=12）及移植对照组（n=12）。转染组小鼠心脏移植前7d经阴茎背静脉注射1×10^6个转染FasL基因的供者DC；未转染组小鼠心脏移植前7d经阴茎背静脉注射1×10^6个未转染的供者DC；移植对照组仅行心脏移植，不接受供者DC输注。供心均移植于受者腹腔内。各组中，6只小鼠用于观察移植心脏存活时间，另6只于术后7d处死，取移植心脏，进行组织学观察及移植心脏排斥反应病理分级。结果转染组、未转染组和移植对照组小鼠移植心脏存活时间的中位数分别为20d、8．5d和9d，转染组移植心脏的存活时间明显长于未转染组和移植对照组（P〈0．01）。转染组中，2只排斥反应的病理分级为0级，4只为1级；未转染组中，2只为2级，4只为3级；移植对照组中，1只为2级，5只为3级。转染组排斥反应的病理分级明显低于移植对照组（P〈0．01）。结论受者于心脏移植前输注转染FasL基因的供者DC，可有效延长移植心脏的存活时间，并减轻排斥反应的程度。

关键词：抗原 CD95 配体移植物排斥树突细胞转染小鼠