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作者：付俊淑天津大学

学位级别：硕士

酯酶是啤酒酵母产生风味物质的重要代谢酶类。目前国内对于酿酒酵母酯代谢酶的研究较少,因此对重组酯酶的体外催化活性进行测定,认识几种酯酶的催化功能,研究其催化活性的差异,了解酵母酯类代谢酶的调控作用对酯类开发利用有重要意义。... 详细信息

酯酶是啤酒酵母产生风味物质的重要代谢酶类。目前国内对于酿酒酵母酯代谢酶的研究较少,因此对重组酯酶的体外催化活性进行测定,认识几种酯酶的催化功能,研究其催化活性的差异,了解酵母酯类代谢酶的调控作用对酯类开发利用有重要意义。本研究通过构建3种酯代谢酶基因eht1(Genbank登录号GU471248)、eeb1(Genbank登录号GU471249)和tgl3(Genbank登录号GU471250)的原核、真核表达载体,获得重组酯酶5种,并比较研究了不同重组酯酶的催化活性及其产生风味物质的差异。应用3种克隆的酯代谢酶基因eht1、eeb1和tgl3与pET28a构建原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)进行表达,确定了EHT1和EEB1蛋白的诱导表达条件,经镍螯合层析法获得可溶性His-EHT1和His-EEB1重组蛋白,蛋白含量分别达到1.034 mg/mL和0.683 mg/mL,而TGL3蛋白基本没有表达。分别将3种酵母酯酶基因eht1、eeb1、tgl3成功导入毕赤酵母工程菌GS115中,构建了GS115/ pPIC9k-EHT1,GS115/ pPIC9k-EEB1和GS115/ pPIC9k- TGL3工程菌。将筛选到的工程菌进行三角瓶培养,其诱导条件:pH6.0,甲醇终浓度0.5% (每12h补加一次),温度28℃,诱导时间9620h,在此条件下,EHT1、EEB1、TGL3蛋白的含量分别达到100.34mg/L,113.62 mg/L,88.73mg/L。利用生物信息学软件对三种蛋白的结构进行预测,发现EHT1蛋白和EEB1蛋白的二级结构非常相似。对三种酯酶糖基化位点预测,EHT1蛋白中存在4个糖基化位点,EEB1蛋白中存在2个糖基化位点,TGL3蛋白中存在2个糖基化位点。通过水解酯实验对不同分子设计的重组蛋白进行酶活测定,证明其均具有酯水解活性,真核重组蛋白的酶活力和比活力均高于原核重组蛋白。真核重组蛋白EHT1酶比活力为74.569 U/mg;EEB1酶比活力为81.614 U/mg;TGL3酶比活力为34.570 U/mg。通过诱导发酵实验比较EHT1和EEB1的重组毕赤酵母工程菌风味物质产生的差异,固相微萃取(SPME)-气相-质谱分析表明,未加甲醇诱导时发酵后仅产生苯乙醇,加入甲醇诱导后产生的风味物质明显增多,产生了较多酯类,如辛酸乙酯,己酸乙酯,壬酸乙酯,癸酸乙酯等。表明毕赤酵母重组酯酶EHT1和EEB1具有合成催化活性;EEB1、EHT1酯酶在酵母代谢过程中,参与中短链脂肪酸脂的代谢合成。重组酯酶制备与功能的研究,为酵母风味物质代谢机理的理论研究及酯代谢酶的开发利用奠定了基础。

关键词：酿酒酵母酯代谢酶重组蛋白 EHT1 EEB1 TGL3 毕赤酵母

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酵母菌合成酯类化合物关键酶基因的研究进展

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食品工业科技 2012年第2期33卷 433-436页

作者：庄世文付俊淑黄金海天津大学农业与生物工程学院天津300072

酯类化合物是发酵食品的重要香气成分之一,酵母发酵是酯类化合物产生的主要来源。在分析酵母菌酯类生物合成途径的基础上,对合成途径中的关键酶基因,包括脂肪酶/酯酶基因、醇酰基转移酶基因和醇脱氢酶基因及其酶作用进展作了综述。

关键词：酵母酯类化合物关键酶基因

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酮香型羊酸奶的研制及与牛酸奶风味物质的比较

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食品工业科技 2010年第4期31卷 231-234页

作者：寇晓虹付俊淑涂崔刘晔飞李想李金洲冯建忠天津大学农业与生物工程学院天津300072 天津中意畜牧科技有限公司天津300381

以羊奶粉为主要原料,选用丁二酮乳链球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌相配合的发酵剂研制山羊酸奶,酮香型羊酸奶各因素的最佳配比为丁二酮乳链球菌、嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌配比为1∶1∶2,菌种添加量为4%,加糖量为8%,发酵温度为40... 详细信息

以羊奶粉为主要原料,选用丁二酮乳链球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌相配合的发酵剂研制山羊酸奶,酮香型羊酸奶各因素的最佳配比为丁二酮乳链球菌、嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌配比为1∶1∶2,菌种添加量为4%,加糖量为8%,发酵温度为40℃。采用SPME-GC-MS技术,对羊酸奶中风味物质进行分析,检测出19种主要风味物质,以酮类、醇类、呋喃类和羧酸类为主,主要特征风味物质是丁二酮、乙酸、甲酸甲酯、辛酸、丁醛、棕榈酸、苹果酸、DL-丙氨酸、呋喃甲醇、庚醇、邻苯二甲酸二乙酯。

关键词：羊奶酸奶风味物质固相微萃取法气相色谱-质谱法

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酵母分离株分子鉴定及其挥发性香气成分检测分析

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食品与发酵工业 2010年第2期36卷 44-48页

作者：付俊淑庄世文徐丹丹刘莹曾琳姣黄金海天津大学农业与生物工程学院

测定了8类不同食品来源的12株酵母分离株26S rDNA D1/D2序列,与Genbank登陆序列比较分析,12株分离酵母鉴定为:3株酿酒酵母,2株戴尔有孢圆酵母、1株马克斯克鲁维氏酵母、1株喜仙人掌毕赤酵母、1株鲁西坦念珠菌、1株膜噗毕赤酵母、2株Kudr... 详细信息

测定了8类不同食品来源的12株酵母分离株26S rDNA D1/D2序列,与Genbank登陆序列比较分析,12株分离酵母鉴定为:3株酿酒酵母,2株戴尔有孢圆酵母、1株马克斯克鲁维氏酵母、1株喜仙人掌毕赤酵母、1株鲁西坦念珠菌、1株膜噗毕赤酵母、2株Kudriavzevii毕赤酵母,1株疑似新种。选用固相微萃取-气质联用(SPME-GC/MS)方法,完成了各分离株挥发性成分的检测。结果表明,酵母发酵后的香气组分主要为酯类,包括乙酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、癸酸乙酯等,其中菌株A1发酵后产生多种含量较高的挥发性组分及独有组分己酸乙酯。结果表明,酵母产生的香气组分、含量与酵母分离来源、种类有关,这可能与不同酵母代谢途径的差异相关。

关键词：酵母菌分子鉴定 26S rDNA 酵母产香 SPME-GC/MS

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保健羊奶冰淇淋的研制

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食品工业科技 2008年第8期29卷 173-175页

作者：李金洲寇晓虹涂崔付俊淑李想刘烨飞天津大学农业与生物工程学院天津300072

以羊奶与羊奶粉为主要原料研制保健冰淇淋,对其低、中、高脂配方与乳化稳定剂的选择、用量和老化时间进行了比较与研究,综合产品品质与成本得出最佳配方与最佳工艺,研制出一种风味独特、营养丰富的羊奶冰淇淋。

关键词：羊奶冰淇淋配方乳化稳定剂老化

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抗原肽免疫磁珠检测BLV抗体的研究

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食品研究与开发 2014年第20期35卷 104-108页

作者：赵卫东付俊淑黄金海郑文杰陈磊刘伟王玉玲天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 300061 天津大学化工学院天津300072

建立抗原肽偶联磁珠进行BLV抗体的检测技术,探讨肽偶联磁珠的条件及效力。对牛白血病病毒gp51和p24蛋白的抗原表位进行预测分析,合成3条抗原肽,把合成肽与表面带-COOH功能团的磁珠进行偶联,形成固定化,反应原性良好的免疫磁珠,用于BLV... 详细信息

建立抗原肽偶联磁珠进行BLV抗体的检测技术,探讨肽偶联磁珠的条件及效力。对牛白血病病毒gp51和p24蛋白的抗原表位进行预测分析,合成3条抗原肽,把合成肽与表面带-COOH功能团的磁珠进行偶联,形成固定化,反应原性良好的免疫磁珠,用于BLV抗体的检测。确定了肽与磁珠最佳偶联条件,3种免疫磁珠均有反应原性,gp51蛋白上的253-266:SSFNTTQGWHHPSQ线性序列具有最佳的检测结果。利用免疫微球对191份样品进行检测,结果与国外牛白血病检测试剂盒进行对比,检测符合率为92.6%。gp51蛋白上存在BLV的优势B细胞线性表位;抗原肽免疫磁珠可以用于检测BLV抗体,这为进一步研制液体磁流芯片了奠定基础。

关键词：牛白血病病毒抗原表位合成肽免疫磁珠

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玉泉区人大调研玉泉区科技局科技服务及企业创新工作开展情况

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呼和浩特科技 2018年第2期 28-28页

作者：付俊峰

5月25日，玉泉区人大常委会副主任昌淑君一行对玉泉区科技局科技服务及企业创新工作开展情况进行了实地调研。

关键词：企业创新科技服务科技局调研人大常委会副主任

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