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中国李RAPD、ISSR和SSR反应体系的建立及其品种资源遗传多样性分析

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中国李RAPD、ISSR和SSR反应体系的建立及其品种资源遗传多样性分析

作者：乔玉山南京农业大学

学位级别：硕士

中国李是我国和世界广泛栽培的重要果树树种之一。本文选择了56个中国李品种资源(包括2个欧洲李品种)，从叶片基因组DNA提取方法入手，在建立和优化中国李RAPD、ISSR和SSR反应分析体系的基础上，利用这三种分子标记对中国李品种资源进... 详细信息

中国李是我国和世界广泛栽培的重要果树树种之一。本文选择了56个中国李品种资源(包括2个欧洲李品种)，从叶片基因组DNA提取方法入手，在建立和优化中国李RAPD、ISSR和SSR反应分析体系的基础上，利用这三种分子标记对中国李品种资源进行聚类分析，旨在促进中国李品种资源分类和遗传育种研究。结果表明：1、改良陈大明法是提取中国李叶片基因组DNA的适宜方法。2、以5′-GACCGCTTGT-3′为随机引物，建立了优化的中国李RAPD反应分析体系：25μL反应体系中，Taq酶、Mg、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是：1.0u、2.5mmol·L、20ng、40ng和0.2mmol·L。利用该优化反应体系，用10个随机引物，构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱，并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析，结果表明：5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2％，变异幅度为20.1％～44.9％。3、以5′-(AC)A-3′为引物建立和优化了中国李ISSR反应分析体系：25μL ISSR反应体系中，Taq酶、Mg、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的最适浓度分别是：0.3u、1.5mmol·L、0.2μmol·L、20ng和0.16mmol·L。利用该优化体系，以5′-(AC)T-3′为引物，构建了中国李18个品种的ISSR指纹图谱，该引物可将这些品种完全区别开来;以5′-(AC)C-3′为引物，构建了李属6类种质资源的ISSR指纹图谱，该引物区分率为100％。4、中国李品种适宜的SSR反应分析体系是：25μL SSR反应体系中，Taq DNA聚合酶、Mg、每个引物、模板DNA和dNTPs等5种成分的适宜浓度分别是：1.5u、2.0mmol·L、0.8μmol·L、30～40ng和0.16～0.24mmol·L。5、采用RAPD、ISSR和SSR等三种分子标记技术对中国李品种资源54份和2个欧洲李品种进行了遗传多样性分析，并以品种间的遗传相似系数构建了Jaccard聚类树状图。结果表明：中国李品种间遗传相似系数较低，平均为0.451，从分子水平证明了我国中国李品种的遗传多样性很高;将供试中国李品种分为五类，其中第一类是原产我国北方地区的一些品种，第二是原产我国南方地区的一些品种;第三类是从国外引进的品种，并提出了将我国的中国李品种分为北方品种群和南方品种群观点。

关键词：中国李 RAPD ISSR SSR 遗传多样性聚类分析

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南方砂梨简易棚架栽培技术

中国南方果树 2003年第4期32卷 64-65页

作者：乔玉山徐长宝沈根华南京农业大学园艺学院南京210095 上海市松江区林业站

我国南方地区栽培的梨属于砂梨系统或具有砂梨遗传因子的杂交类型,即砂梨品种群.比较分析我国南方部分砂梨产区与日本砂梨产区的气象因子后认为,我国南方砂梨采用棚架式栽培具有独特优势,同时总结了简易棚架的搭建和配套栽培技术.

关键词：砂梨南方地区简易棚架栽培栽培技术气候特点

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植物ZIP基因家族铁载体蛋白基因研究进展

西北植物学报 2004年第7期24卷 1348-1354页

作者：渠慎春章镇乔玉山南京农业大学园艺学院南京210095

主要概述了植物ZIP基因家族铁载体蛋白基因研究的最新进展。从结构和功能上介绍了铁载体蛋白基因IRT1、IRT2、LeIRT1、LeIRT2、PsRIT1和OsIRT1。应用ClustalX序列分析软件,对6个铁载体蛋白基因在蛋白质水平上比较后发现,与IRT1基因蛋白... 详细信息

主要概述了植物ZIP基因家族铁载体蛋白基因研究的最新进展。从结构和功能上介绍了铁载体蛋白基因IRT1、IRT2、LeIRT1、LeIRT2、PsRIT1和OsIRT1。应用ClustalX序列分析软件,对6个铁载体蛋白基因在蛋白质水平上比较后发现,与IRT1基因蛋白质序列有较高的同源性。植物ZIP基因家族铁载体蛋白基因主要受缺铁胁迫条件的诱导,在根部表达。表达的量与环境中的铁含量、时间、温度、光照等因素有关。铁载体蛋白基因在转录和转录后水平上被环境中的铁含量和植物体内的铁营养水平综合调控。转铁载体蛋白基因植物表现出较强的抗缺铁能力,预示其在农业生产上有广阔的应用前景。

关键词： ZIP 植物铁载体蛋白基因

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杏在南京地区的适应性及提高着果率的措施

中国南方果树 2002年第1期31卷 49-50页

作者：徐长宝乔玉山章镇南京农业大学园艺学院 210095

我国杏的分布范围大体以秦岭和淮河为界,淮河以南杏树栽培较少,淮河以北杏的分布较多.据1997年统计,江苏省杏树面积200.2hm2,主要分布在徐州、连云港、镇江、南京等地.

关键词：杏树品种南京地区适应性着果率

中国李RAPD的优化反应体系及其在品种鉴定中的应用

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果树学报 2003年第6期20卷 445-449页

作者：乔玉山章镇房经贵郭洪南京农业大学园艺学院江苏南京210095 江苏省农业科学院园艺研究所江苏南京210014

以5'-GACCGCTTGT-3'为随机引物,以奉化李(***)为试材,对中国李RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:25μL反应体系中,TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0U、2.5mmol/L、20ng、40ng和0.2mm... 详细信息

以5'-GACCGCTTGT-3'为随机引物,以奉化李(***)为试材,对中国李RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:25μL反应体系中,TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0U、2.5mmol/L、20ng、40ng和0.2mmol/L。利用该优化反应体系,用10个随机引物,构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱;并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析,5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2%,变异幅度为20.1%～44.9%。

关键词：中国李 RAPD 品种鉴定指纹图谱

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苏北丰、沛地区红富士苹果水分盈亏及其调控

中国农业气象 2003年第2期24卷 21-24页

作者：徐长宝乔玉山章镇南京农业大学果树研究所南京210095

丰县、沛县位于江苏省西北部 ,是我国重要的红富士苹果生产基地。本文调查和分析了该地区全年的雨量分布状况及可能引起的旱、涝灾害 ,结合当地红富士苹果的生长发育动态进行了研究 ,提出了不同季节水分盈亏、消长及调控的时机和方法 ,... 详细信息

丰县、沛县位于江苏省西北部 ,是我国重要的红富士苹果生产基地。本文调查和分析了该地区全年的雨量分布状况及可能引起的旱、涝灾害 ,结合当地红富士苹果的生长发育动态进行了研究 ,提出了不同季节水分盈亏、消长及调控的时机和方法 ,为节水灌溉。

关键词：苏北地区丰县沛县红富士苹果水分盈亏状况调控技术

磁珠富集法分离小黄李基因组微卫星DNA片段

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西北植物学报 2006年第7期26卷 1320-1325页

作者：薛华柏乔玉山许宽勇章镇南京农业大学园艺学院南京210095

将微卫星探针5′端生物素化后与链亲和素磁珠特异结合,用磁珠和探针的结合物与两端连接已知序列人工接头的中国李品种小黄李(Prunus ***)基因组DNA酶切片段杂交,以此杂交片段为模板用人工接头序列为引物进行PCR扩增,根据PCR产物测序结... 详细信息

将微卫星探针5′端生物素化后与链亲和素磁珠特异结合,用磁珠和探针的结合物与两端连接已知序列人工接头的中国李品种小黄李(Prunus ***)基因组DNA酶切片段杂交,以此杂交片段为模板用人工接头序列为引物进行PCR扩增,根据PCR产物测序结果设计引物作为微卫星DNA的标记引物.结果在随机挑选的36个克隆进行菌落PCR检测时,从31个阳性克隆中挑选18个克隆进行测序后获得了12条特异序列,设计的8对SSR引物均在5个中国李受试品种上获得了预期的扩增产物,其中4对引物在受试品种上表现出多态性.

关键词：小黄李磁珠富集法SSR标记

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若光梨叶片诱导不定芽的研究

江苏农业科学 2007年第2期35卷 91-92页

作者：胡钟东乔玉山渠慎春章镇南京农业大学园艺学院

以NN69为基本培养基,附加TDZ 1.0 mg/L、IBA 0.15 mg/L、AgNO30.1 mg/L,处理若光梨叶片,暗培养21 d,再于光照条件下培养30 d,获得不定芽和再生植株,再生频率为63.2%。

关键词：叶片再生若光梨不定芽

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果树农艺性状基因的分子标记及其应用

果树学报 2004年第2期21卷 158-163页

作者：乔玉山房经贵沈志军章镇南京农业大学园艺学院江苏南京210095

总结了果树农艺性状基因标记策略和已获得的分子标记及其在果树上的应用。集团混合分离分析法(BSA)、平行芽变分析法(PSA)和已知信息捕捉法(KIH)是果树农艺性状基因标记筛选的主要方法。目前已获得了大量果树农艺性状基因的分子标记,这... 详细信息

总结了果树农艺性状基因标记策略和已获得的分子标记及其在果树上的应用。集团混合分离分析法(BSA)、平行芽变分析法(PSA)和已知信息捕捉法(KIH)是果树农艺性状基因标记筛选的主要方法。目前已获得了大量果树农艺性状基因的分子标记,这些标记是果树基因作图、图位克隆、分子辅助选择和种质资源鉴定等遗传研究与育种实践的有用工具。

关键词：果树农艺性状基因分子标记分子辅助选择种质鉴定