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小鼠胚胎脊髓神经干细胞提取与传代培养：3种常用消化酶优劣的比较与分析

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中国组织工程研究 2024年

作者：罗丹葛志林侯永辉王万舜詹吉恒侯宇林定坤陈树东广州中医药大学第二附属医院广东省中医药科学院广州中医药大学

背景：在神经干细胞的研究及应用过程中，细胞的培养与传代是关键环节，直接影响到细胞的质量和实验结果。寻找一种最适宜的消化酶类，对维持胚胎小鼠脊髓神经干细胞的生物学特性并增强其传代效率，具有重要意义。目的：探讨胚胎小鼠脊... 详细信息

背景：在神经干细胞的研究及应用过程中，细胞的培养与传代是关键环节，直接影响到细胞的质量和实验结果。寻找一种最适宜的消化酶类，对维持胚胎小鼠脊髓神经干细胞的生物学特性并增强其传代效率，具有重要意义。目的：探讨胚胎小鼠脊髓神经干细胞传代最适合的消化酶。方法：显微解剖分离提取孕14 d C57BL/6胎鼠脊髓组织，用含有表皮生长因子、碱性成纤维生长因子及B27的DMEM/F12无血清培养基培养，待成球后进行Nestin与Sox2免疫荧光鉴定。神经干细胞传代培养过程中分别采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及TrypLETM Express酶消化结合吹打法制成单细胞悬液，观察细胞分散效果及成球情况，取第3代细胞进行碘化丙啶染色观察细胞死亡情况，通过计数细胞总数观察细胞增殖情况，通过免疫荧光染色、Western blot和RT-PCR检测Olig2、Tuj1、GFAP、NeuN蛋白和mRNA表达鉴定细胞分化情况。结果与结论：脊髓组织细胞培养72 h后可形成悬浮生长的神经球，5-7 d后即可传代。与胰蛋白酶、木瓜蛋白酶相比，TrypLETMExpress酶结合吹打法进行传代的细胞分散率高，活性较好，分化为NeuN与Tuj1的阳性神经元细胞较多。此研究优化了神经干细胞的培养和传代过程，为进一步开展脊髓疾病的干细胞移植治疗研究奠定了基础。

关键词：神经干细胞 C57BL/6小鼠胚胎脊髓胰蛋白酶木瓜蛋白酶 TrypLE Express酶工程化干细胞

硫化铜/氧化石墨烯/壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合材料的抗菌及促成骨作用

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中国骨科临床与基础研究杂志 2024年第1期14卷 32-46页

作者：冯治滨王万舜陈玲玲孔志远张涛马向阳夏虹遂宁市中心医院骨科四川629000 广州中医药大学第二临床医学院 510405 中国人民解放军南部战区总医院骨科广州510010

目的探讨硫化铜(CuS)/氧化石墨烯(GO)/壳聚糖(CS)/纳米羟基磷灰石(nHA)复合材料(CGCHs)的抗菌和促成骨作用及其作用机制。方法采用水热法合成CuS/GO纳米颗粒,通过原位沉淀法合成CS/nHA支架和CGCHs支架,检测材料表征、光热转换性能和生... 详细信息

目的探讨硫化铜(CuS)/氧化石墨烯(GO)/壳聚糖(CS)/纳米羟基磷灰石(nHA)复合材料(CGCHs)的抗菌和促成骨作用及其作用机制。方法采用水热法合成CuS/GO纳米颗粒,通过原位沉淀法合成CS/nHA支架和CGCHs支架,检测材料表征、光热转换性能和生物安全性,评估CGCHs组和近红外光(NIR)照射下CGCHs(CGCHs+NIR)组的细菌抑制效果及其对细菌生物膜相关基因表达的影响,观察CGCHs和CS/nHA不同材料组的促成骨分化和成骨、破骨相关基因表达。结果CGCHs是具有高度孔隙率的三维支架,在CuS/GO浓度为200μg/mL时CGCHs同时兼具良好的红外升温效果和生物安全性。琼脂糖平板涂菌和细菌死活染色结果均表明CGCHs+NIR组抗菌性能最佳,生物膜相关基因qPCR检测证实其具有抑制细菌生物膜相关基因表达的作用。茜素红染色结果表明CGCHs具有良好的体外促成骨性能,体外共培养3、7、14、21和28 d qPCR结果表明CGCHs对成骨早期和晚期相关基因表达均具有促进作用。与破骨细胞共培养结果可观察到CGCHs具有抑制破骨细胞形成的作用,细胞凋亡检测结果进一步验证这一结论,破骨分化相关基因qPCR检测结果表明,CGCHs主要通过抑制抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K、CTR、P65和P38在共培养7、14 d的表达来抑制破骨细胞的分化。结论作为纳米复合材料,CGCHs生物安全性好,具有良好的红外光热协同抗菌作用,在促成骨分化的同时抑制破骨细胞分化,有望为感染性骨缺损治疗提供新的思路。

关键词：骨代用品硫化铜氧化石墨烯壳聚糖羟基磷灰石类纳米复合物谱学,近红外线细胞毒性消炎药微生物敏感性试验基因表达骨生成破骨细胞

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咔唑肟酯衍生物的合成和光引发性

四川大学学报（工程科学版） 2009年第4期41卷 109-113,219页

作者：谢川李万舜冯岩陈秋容四川大学化工学院四川成都610065

以N-烃基咔唑为原料,经Friedel-Crafts酰化、成肟和酯化反应,合成了6种咔唑肟酯衍生物。通过正交设计实验,探讨了产物1-[3’-(6’-苯甲酰基-N-乙基咔唑)]-1-丁酮肟-O-乙酸酯的Friedel-Crafts酰化的最佳反应条件:N-乙基咔唑为0.02 mol时... 详细信息

以N-烃基咔唑为原料,经Friedel-Crafts酰化、成肟和酯化反应,合成了6种咔唑肟酯衍生物。通过正交设计实验,探讨了产物1-[3’-(6’-苯甲酰基-N-乙基咔唑)]-1-丁酮肟-O-乙酸酯的Friedel-Crafts酰化的最佳反应条件:N-乙基咔唑为0.02 mol时,反应物苯甲酰氯与N-乙基咔唑摩尔配比为1∶1.2,催化剂A lC l3与N-乙基咔唑摩尔配比为1∶1.2,25℃下反应3.5 h,产率可达94.6%。利用1HNMR,IR,UV和元素分析对目标产物进行了结构表征。并进行了光引发性能测试。

关键词：咔唑肟酯合成正交实验光引发性能

NEEDER开源SNS信息交流平台设计与实现

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NEEDER开源SNS信息交流平台设计与实现

作者：万舜吉林大学

学位级别：硕士

互联网发展初期,很多终端设备在性能上已经得到了很大的提升,但可惜的是,相比浩瀚的互联网资源相应的计算能力就逊色很多?如果按照终端的大小和能力重新分配这些资源,那么这些设备联合在一起处理问题的能力就会大大的提升,自此分布式理... 详细信息

互联网发展初期,很多终端设备在性能上已经得到了很大的提升,但可惜的是,相比浩瀚的互联网资源相应的计算能力就逊色很多?如果按照终端的大小和能力重新分配这些资源,那么这些设备联合在一起处理问题的能力就会大大的提升,自此分布式理论根源诞生,同时也为SNS技术的诞生打下了理论基础? Social Network Software(SNS),社会性网络软件,依据六度理论,每个人的人际关系以树形结构展开并扩展,在与其他人建立联系后再借助于其他人的人际关系进行无限扩展?这样就形成了发散星形结构?现实社会中,人与人的交流是通过人与人之间的介绍来形成一个朋友圈ǐ联系圈的,每个人不需要直接认识所有人,只需要通过他的朋友,朋友的朋友,就能促成一次握手?而普通的网络交际,将自己放到一个平台中去,让很多人看到,并且联系你认识你?两者的优缺点明显,社会性交际优点是可靠,彼此关系建立在可靠的人际网络上,缺点是产生握手的时间长ǐ代价较高;平台式的网络交际优点是成本低,但不可靠?那么在网络中将这套机制拷贝,即在理论上,获得可靠与低成本的双重优点?还有一些优点就是,SNS中,在朋友圈内关系往往真实度很高,非常可靠,互相之间不存在所谓网络的假面具?,因此,比较容易实现实名制;SNS基于人传人联系网络,一传多,多传多,利用网络这一低廉而快速的平台,网络建立的速度会非常快,这又使得建立人脉网络的成本进一步降低?NEEDER开源SNS信息交流平台是一款基于***技术开发的WEB2.0社区平台?平台提供了博客ǐ相册ǐ网摘ǐ迷你博客ǐ资讯ǐ活动ǐ圈子等应用模块,用户可以快速的搭建WEB2.0特征的在线社区? NEEDER开源SNS信息交流平台采用*** MVCǐWebForm开发,采用了领先的技术体系架构ǐ优异的缓存技术ǐ动态压缩ǐ页面重定向ǐ基于Lucene的全文检索技术,可以承载千万级的数据,并提供良好的安全性及用户体验?

关键词： SNS WEB2.0 *** MVC 数据缓存动态压缩页面重定向

硫化铜及其氧化石墨烯纳米复合材料的制备与性能的研究

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硫化铜及其氧化石墨烯纳米复合材料的制备与性能的研究

作者：王万舜广州中医药大学

学位级别：硕士

致病菌一直严重威胁着人类的健康安全,在数十年预防与治疗细菌感染的过程中,滥用抗生素导致病原菌的耐药性普遍增强,增加了治愈难度,提高了治疗成本,加重了社会负担。然而,临床上传统的口服或静脉注射抗生素等预防与治疗手段,在使用植... 详细信息

致病菌一直严重威胁着人类的健康安全,在数十年预防与治疗细菌感染的过程中,滥用抗生素导致病原菌的耐药性普遍增强,增加了治愈难度,提高了治疗成本,加重了社会负担。然而,临床上传统的口服或静脉注射抗生素等预防与治疗手段,在使用植入物的骨科等外科手术的治疗过程中,很难清除附着并定植在植入物表面的细菌生物膜。为了控制种植体相关感染,通常需要增加抗生素的治疗时间和使用剂量,这就引起另一个世界性医疗难题——细菌耐药性感染。多重耐药菌随着抗生素的滥用逐渐在全球范围内出现和传播,无时无刻不危及人类与动物的健康。“超级细菌”的诞生,使得人类的感染率和死亡率逐年增加,开发新型抗菌剂及其治疗措施以应对当前植入相关的细菌生物膜的挑战已成为解决耐药性细菌感染的当务之急。虽然目前如抗菌肽、噬菌体、免疫调节剂及掠食性细菌等各种新型抗菌剂可以抑制耐药性细菌感染,但是它们仍存在各种缺点,例如复杂的技术要求,高昂的实施成本以及潜在的健康风险。然而,金属纳米颗粒不仅具有良好的抗菌性能,还具有制备简单、高效率、低毒性、靶向性及低成本等优点。此外,纳米碳材料及其衍生的纳米复合物作为新型抗菌材料,因其低毒性、绿色环保、成本低廉等特点同样备受瞩目。目的:构建新型铜基纳米颗粒(如硫化铜纳米颗粒)以及石墨烯复合纳米材料(如硫化铜/氧化石墨烯纳米复合材料),分别评价其材料表征、生物安全性、抗菌性能与机制,评估其联合光热/光动力作用抑制植入物细菌生物膜,修复耐药菌感染性创面的效果与应用价值。方法:1.构建硫化铜纳米颗粒(Cu9S8 NPs)评估其联合光热/光动力消除细菌生物膜的应用。采用半胱氨酸,硝酸铜和硫化钠通过湿化学法合成Cu9S8NPs,并用聚乙二醇修饰表面;使用透射电镜观察晶体形貌以及晶粒尺寸,X线衍射仪测试纳米颗粒的物相和晶胞类型;测量Cu9S8 NPs在红外光谱下的吸收峰以及升温与冷却曲线计算光热转化率;通过细胞毒性与增殖、血液相容性、细胞活/死染色评估纳米材料的生物相容性;通过细菌涂板试验、钛片表面细菌活/死染色、扫描电镜、动态抗菌活性评估Cu9S8 NPs联合近红外(NIR)的抗菌活性;通过单线态氧检测、过氧化氢检测、活性氧检测、基因组完整性探讨Cu9S8 NPs联合NIR的抗菌作用机制;最后通过细菌生物膜活/死染色、扫描电镜、结晶紫染色评估Cu9S8 NPs联合NIR对细菌生物膜的清除效果。2.构建硫化铜/氧化石墨烯纳米复合材料(CuS/GO NCs)评估其抗耐药菌感染的应用。采用氧化石墨烯作为基底材料,使用硝酸铜和硫代乙酰胺以聚乙烯吡咯烷酮作为配体通过水热法合成CuS/GO NCs;使用透射电镜观察形貌特征,X线衍射仪测试纳米复合材料的物相和晶胞类型,激光拉曼光谱仪分析CuS/GO NCs的拉曼光谱变化,原子力显微镜观察并分析CuS/GO NCs的表面形貌;通过细胞毒性与增殖、活/死细胞染色、血液相容性评估纳米复合材料的生物相容性;通过细胞划痕试验评估其细胞迁移作用;通过细菌涂板试验、细菌活/死染色、透射电镜、扫描电镜、活性氧检测探讨CuS/GO NCs抗菌活性与机制;使用大鼠创面感染模型进行耐药菌感染性创面愈合试验,创面残余细菌量检测以及组织学分析评估CuS/GO NCs的体内抗菌性能和生物安全性以及促进感染创面愈合作用。成果:1.合成了具有良好生物相容性的独特的聚乙二醇表面改性Cu9S8 NPs。我们发现Cu9S8 NPs在近红外(808 nm,1w/cm2)照射下表现出较高的光热性能,可以增加活性氧(ROS)的生成。Cu9S8 NPs经近红外照射成功破坏细菌结构,导致钛片上粘附与生长的金黄色葡萄球菌死亡。此外,通过Cu9S8 NPs联合水浴加热处理,模拟NIR+Cu9S8组的温度变化,表明NIR+Cu9S8组所表现的优异的抗菌活性与光热疗法和光动力疗法具有协同作用。最后,NIR+Cu9S8组有效地破坏了钛片上细菌生物膜的形成,而Cu9S8 NPs联合加热处理后对其作用较弱。因此,基于Cu9S8 NPs的光热疗法和光动力疗法可以提供一种很有前途的方法来消除植入相关的细菌并破坏细菌生物膜。2.通过简便的水热法将CuS NPs与GO纳米片进行整合,得到了具有物理和化学的方式双重杀菌模式的新型CuS/GO NCs,实现了纳米铜粒子在氧化石墨烯纳米粒子上的原位生长和均匀分散。我们发现合成的CuS/GO NCs呈现独特的针状形态,可以与细菌表面结合,以物理方式破坏细菌细胞膜,还可以通过化学抗菌活性产生高水平的ROS从而杀死细菌。这些特点赋予了 CuS/GO NCs卓越的抗菌能力,单次使用即可杀死创面组织内的耐甲氧西林金黄葡萄球菌。此外,CuS/GO NCs具有良好的生物相容性,能促进细胞迁移和胶原分泌,在体内加速感染创面愈合。本研究提供了一种将纳米材料的物理和化学抗菌

关键词：硫化铜纳米颗粒光热/光动力治疗抗菌活性细菌生物膜硫化铜/氧化石墨烯纳米复合材料多重耐药细菌创面愈合

钼铅取代的Dawson型POM的合成及其在氧化反应中的应用

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钼铅取代的Dawson型POM的合成及其在氧化反应中的应用

作者：李万舜四川大学

学位级别：硕士

本文在Dawson型杂多化合物PW 和PW 的基础上,通过取代和加成,合成出了6 种含一个铅原子以及不同数量钼原子的POM。通过IR、UV 等分析手段表征,证明它们保持了基本的Dawson型结构,利用TG 和EA 推断其为: KPWMoPbO ·10HO 、KHPWMoPbO ·... 详细信息

本文在Dawson型杂多化合物PW 和PW 的基础上,通过取代和加成,合成出了6 种含一个铅原子以及不同数量钼原子的POM。通过IR、UV 等分析手段表征,证明它们保持了基本的Dawson型结构,利用TG 和EA 推断其为: KPWMoPbO ·10HO 、KHPWMoPbO ·11HO 、KPWMoPbO ·10HO 、KHPWMoPbO ·8HO 、KHPWMoPbO·9HO 和K[Pb(PWMoO)]·13HO。在水溶液中利用线性扫描极谱法研究6 种POM 的氧化还原性质,实验结果表明它们的氧化性质都与PW 不同,特别是PW(17-n))MoPb(n =1～5)系列,其氧化性明显高于P2W18,并且随分子中钼含量的增高而增高。 7 种POM 催化30%过氧化氢氧化环己烯为己二酸的实验表明PW(17-n))MoPb 系列有相近的催化效果(约73%),且己二酸产率明显高于使用Pb(PWMo) 和PW 时的情况;使用Pb(PWMo) 进行催化时的产率略低(约67.6%)但明显高于用做对比的PW(约60.7%)。本文探讨了温度、催化剂用量、反应时间以及HO 与底物的摩尔比等条件对反应的影响,并优化了反应条件,确定了在环己烯用量10mmol 的情况下,较好的反应条件为:反应温度95℃,反应时间12h,PWMoPb0.01mmol,30%过氧化氢60mmol。此外,本文还对PWMoPb 在活性炭上进行了固载,在加入有机溶剂(t-BuOH)的情况下,用活性炭固载的PWMoPb 进行催化,产率可达72%,催化剂在重复使用6 次后性能未见明显下降。

关键词： Dawson型 POM 氧化还原性催化剂活性

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磷钨磷钼钨Dawson型杂多化合物的合成

化学研究与应用 2004年第5期16卷 711-712页

作者：李万舜陶卫国刘玉鑫四川大学化工学院四川成都610065 西华师范大学化学系四川南充637000

Three new Dawson-type HPCs:K14·24H2O,K15H3·26H2O and K15H3·27H2O were synthesized for the first *** are tungstophosphoric and molybdotungstophosphoric HPCs substituted by Ni or *** intermediate product K10Na2H2P2W16O60 was synthesized from Na2WO4·2H2O and Na4HPO4·*** structures of the compounds were confirmed by IR,UV,XAFS and elemental analysis.

关键词：过渡元素取代杂多化合物 Dawson型合成

1-(4-氨基苯基)-2-二乙胺基-1-丙酮盐酸盐的合成

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精细化工 2003年第11期20卷 702-704页

作者：黄杰谢川李万舜郑志明四川大学化工学院四川成都610065

以乙酰苯胺为原料,经过F-C酰基化、α 溴代、胺解成盐等3步反应合成了1 (4 氨基苯基) 2 二乙胺基 1 丙酮盐酸盐。溴代反应是用0 12mol的1 (4 乙酰胺基苯基) 1 丙酮和0 13mol溶于乙醇的溴在60℃下反应2～3h。通过紫外光谱、红外光谱、核... 详细信息

以乙酰苯胺为原料,经过F-C酰基化、α 溴代、胺解成盐等3步反应合成了1 (4 氨基苯基) 2 二乙胺基 1 丙酮盐酸盐。溴代反应是用0 12mol的1 (4 乙酰胺基苯基) 1 丙酮和0 13mol溶于乙醇的溴在60℃下反应2～3h。通过紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱、质谱及元素分析等方法确定了目标化合物的结构。该化合物是一种新型水溶性光引发剂。

关键词： α-胺基苯乙酮水溶性光引发剂

1-[3′-(6′-苯甲酰基-N-烯丙基咔唑)]-1-丁酮肟-O-乙酸酯的合成和光引发性能

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应用化学 2009年第7期26卷 762-765页

作者：谢川冯岩李万舜四川大学化工学院成都610065

以N-烯丙基咔唑为原料,经Friedel-Crafts酰化反应、成肟和酯化,得到目标化合物。通过正交试验研究了关键步骤Fridel-Crafts酰化,得到最佳反应条件:N-烯丙基咔唑用量为0.020mol,催化剂与原料摩尔比1.10,反应物摩尔比1.15,25℃下反应4h,... 详细信息

以N-烯丙基咔唑为原料,经Friedel-Crafts酰化反应、成肟和酯化,得到目标化合物。通过正交试验研究了关键步骤Fridel-Crafts酰化,得到最佳反应条件:N-烯丙基咔唑用量为0.020mol,催化剂与原料摩尔比1.10,反应物摩尔比1.15,25℃下反应4h,产率可达94.2%。目标产物的结构通过IR、UV、1HNMR和元素分析测试技术进行表征,并与商品IrgOXE-2的光引发性能进行了比较。

关键词：咔唑肟酯合成正交试验光引发性