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HIV-1膜蛋白抗原优化改造研究进展

国际病毒学杂志 2007年第2期14卷 49-54页

作者：万延民（综述）吴岚徐建青邵一鸣（审校）中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京100050

HIV-1的外膜糖蛋白能与T细胞或单核／巨噬细胞表面的CD4受体分子结合，从而起始HIV感染靶细胞的生物学过程。由于HIV-1膜蛋白是中和抗体的主要作用靶位，因此成为HIV疫苗中不可缺少的组分。越来越多的研究表明：天然HIV-1膜蛋白不能激... 详细信息

HIV-1的外膜糖蛋白能与T细胞或单核／巨噬细胞表面的CD4受体分子结合，从而起始HIV感染靶细胞的生物学过程。由于HIV-1膜蛋白是中和抗体的主要作用靶位，因此成为HIV疫苗中不可缺少的组分。越来越多的研究表明：天然HIV-1膜蛋白不能激发有效的中和抗体，所以需要对膜蛋白进行优化改造，以提高中和表位的免疫原性。本文就近年来HIV-1膜蛋白抗原优化改造研究做一简要回顾以供参考。

关键词： HIV膜蛋白疫苗中和抗体抗原改造

人类免疫缺陷病毒DNA疫苗黏膜免疫小鼠免疫力研究

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中华医学杂志 2006年第44期86卷 3109-3113页

作者：黄相刚徐建青任莉仇超张宁刘连兴万延民彭虹邵一鸣中国疾病预防控制中心性病与艾滋病预防控制中心中国疾病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京100050

目的以人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）疫苗免疫BALB／c（H-2^d）小鼠为模型，探讨有效活化黏膜与系统免疫力的策略。方法将6～8周龄BALB／c小鼠随机分为6组，每组3只；利用DNA疫苗加或不加疫苗佐剂滴鼻途径进行黏膜引导免疫，利用重组痘... 详细信息

目的以人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）疫苗免疫BALB／c（H-2^d）小鼠为模型，探讨有效活化黏膜与系统免疫力的策略。方法将6～8周龄BALB／c小鼠随机分为6组，每组3只；利用DNA疫苗加或不加疫苗佐剂滴鼻途径进行黏膜引导免疫，利用重组痘苗天坛株疫苗进行系统加强的策略以提高机体免疫反应。DNA疫苗免疫时间是0、14、28d，剂量每只小鼠10μg/次；重组痘苗病毒加强免疫时间是第42天，剂量每只小鼠1×10^7PFU／次。初次免疫后第56天处死小鼠。ELISPOT和胞内染色测定T淋巴细胞免疫反应；ELISA法测血清特异的IgG和鼻咽部、肺部灌洗液特异的IgA。结果单独DNA疫苗黏膜免疫后只活化微弱的系统T细胞免疫（2±1）斑点形成细胞（***／10^6个细胞），黏膜共同施用霍乱毒素可提高相应的系统T细胞免疫力（14±11SFC／10^6个细胞），重组痘苗天坛株疫苗系统加强后，分泌γ-干扰素（IFN-γ）的特异性T淋巴细胞升高4．5倍（61±35 SFC／10^6个细胞）；胞内染色可获得1．8％±1．4％HIV-1 Gag特异性CD8^＋T细胞免疫反应，同时，血清中特异性IgG抗体与肺部灌洗液的特异性IgA抗体水平在痘苗天坛株疫苗系统加强后分别提高2倍[吸光度（A）值：1．5±0．3]和2．5倍（A值：1．8±0．8）。结论黏膜进行引导免疫并辅以系统加强的免疫策略可诱发有效的黏膜、系统体液免疫反应和T淋巴细胞免疫。

关键词： HIV-1 疫苗,DNA 免疫,黏膜

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节／辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第4期30卷 355-359页

作者：袁松华万延民仇超张聪优黄杨乔勇叶芮琪邱趁丽张晓燕徐建青上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心 201508 复旦大学生物医学研究院

目的构建表达gag—env融合基因和tat-rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗，并评价其免疫原性。方法按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化，构建真核表达质粒。用West... 详细信息

目的构建表达gag—env融合基因和tat-rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗，并评价其免疫原性。方法按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化，构建真核表达质粒。用Westernblot法验证体外表达情况；用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应。结果限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确，可以表达相应的融合蛋白。ELISPOT结果显示，Gag—Env特异性的T细胞反应强度为（3010±566）SFC／10^6脾细胞；Tat-Rev—Integrase（***）-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为（948±737）SFC／10^6脾细胞，均显著高于空载体组。结论构建的表达HIV-1CRF01_AE流行株gag—env融合基因和tat—rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应。

关键词： HIV-1 艾滋病疫苗结构基因调节基因

载脂蛋白E在免疫调节及病毒感染过程中的作用

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微生物学免疫学进展 2023年第1期51卷 82-88页

作者：郭翠鸳(综述) 王万海万延民(审校) 复旦大学附属华山医院感染科、国家传染病医学中心、上海市传染病与生物安全应急重点实验室上海200040 郑州大学第一附属医院检验科河南省检验医学重点实验室河南郑州450052

载脂蛋白E(apolipoprotein E, APOE)是一种多功能蛋白,肝细胞、星形胶质细胞、巨噬细胞等多种体细胞均可以合成APOE。APOE除参与脂代谢外,还具有免疫调节作用,并被证明在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis ... 详细信息

载脂蛋白E(apolipoprotein E, APOE)是一种多功能蛋白,肝细胞、星形胶质细胞、巨噬细胞等多种体细胞均可以合成APOE。APOE除参与脂代谢外,还具有免疫调节作用,并被证明在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)和人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)等多种病毒感染中发挥重要作用。最近研究显示,APOE基因多态性(gene polymorphism)与严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-COV-2)的易感性及感染后的严重程度和病死率相关。为了更全面地认识APOE的功能,现就APOE的免疫调节功能及在不同病毒感染过程中的作用作一概述。

关键词：载脂蛋白E 病毒感染免疫调节丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2

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氧和二氧化碳慢性感知机制的免疫调节作用

生命的化学 2022年第2期42卷 167-175页

作者：田向向万延民王万海朱召芹上海市公共卫生临床中心检验医学科上海201508 郑州大学第一附属医院检验科河南省检验医学重点实验室郑州450052 复旦大学附属华山医院感染科国家传染病医学中心上海市传染病与生物安全应急重点实验室上海200040

感知氧和二氧化碳浓度变化并做出适当响应是机体维持正常生理功能的重要环节。目前已知的氧与二氧化碳感知信号通路主要分为急性感知(acute sensing)和慢性感知(chronic sensing)两类。通过由中枢和外周化学感受器介导的急性感知信号通... 详细信息

感知氧和二氧化碳浓度变化并做出适当响应是机体维持正常生理功能的重要环节。目前已知的氧与二氧化碳感知信号通路主要分为急性感知(acute sensing)和慢性感知(chronic sensing)两类。通过由中枢和外周化学感受器介导的急性感知信号通路,机体能够对氧或二氧化碳水平的突然变化做出快速响应,即时调整通气量;而当长时间处于氧或二氧化碳浓度异常环境时,机体则不仅需要通过急性感知系统调整通气量,还需要通过慢性感知通路调整组织、细胞的基因转录和代谢状态来适应异常的氧和二氧化碳浓度。慢性感知是由分布于各种细胞中的分子感受器介导的,该通路对细胞功能具有广泛而复杂的影响。该文将在扼要回顾氧和二氧化碳感知机制的基础上,着重阐述二者的慢性感知通路与机体免疫应答之间的关系。

关键词：氧感知机制二氧化碳感知机制低氧诱导因子可溶性腺苷酸环化酶免疫应答

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不同感染时间与感染途径的HIV-1感染者全基因组CTL免疫反应比较研究

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中华检验医学杂志 2011年第2期34卷 158-163页

作者：邱趁丽黄相刚卫军乔晓春仇超万延民王万海张晓燕徐建青上海市公共卫生临床中心复旦大学附属公共卫生临床中心上海201508 山西省运城市疾病预防控制中心山西省疾病预防控制中心复旦大学生物医学研究院

目的分析研究不同感染时间和不同途径感染HIV／AIDS感染者覆盖全基因组的CTL应答特征。方法将75例HIV／AIDS感染者分为3组，血液感染1～2年组（10例）、血液感染〉10年组（43例）和性接触感染1～2年组（22例）；以HIV—lB亚型构建全... 详细信息

目的分析研究不同感染时间和不同途径感染HIV／AIDS感染者覆盖全基因组的CTL应答特征。方法将75例HIV／AIDS感染者分为3组，血液感染1～2年组（10例）、血液感染〉10年组（43例）和性接触感染1～2年组（22例）；以HIV—lB亚型构建全基因组17个肽库作为抗原，采用ELISpot检测各组HIV特异性CTL应答；采用流式细胞术检测各组CD。计数；采用实时定量tit—PCR检测各组HIV病毒载量。结果血液感染1～2年组、血液感染〉10年组和性接触感染1～2年组感染者对HIV—B亚型17个肽库的平均应答频率分别为40％、65％、23％，经单向方差分析，3组感染者对HIV·1B亚型17个肽库的应答频率差异有统计学意义（F=19．96，P〈0．01）；3组感染者对HIV—B亚型17个肽库总应答强度范围分别为0～5835SFCs／10。PBMC、0～7225SFCs／10。PBMC、0～9740SFCs／IO。PBMC，且3组感染者对HIV—B亚型17个肽库的应答强度差异亦有统计学意义（H=101．90，P〈0．01）；此外，3组感染者对HIV—lB亚型17个肽库的应答广度分别为7（2—11）个、11（9—14）个、4（2—6）个，5组感染者应答广度的差异也有统计学意义（H=34．75，P〈0．01）。3组感染者应答频率、应答强度和应答广度从高到低依次为血液感染〉10年组、血液感染1—2年组、性接触感染1～2年组。不同感染时间和不同感染途径的感染者对Nef肽库和Gag肽库的应答百分比和应答强度均高于其他肽库。cD。计数〈200／~1、CD。计数为200～500／~1和≥500／~15组感染者对17个肽库的总应答强度范围分别为0～18475SFCs／10。PBMC、350～34095SFCs／10。PBMC、490～21550SFCs／IO。PBMC，但差异无统计学意义（H=2．93，P=0．23）；3组感染者CTL应答广度分别为3（0～8）个、10（2～17）个、10（1～17）个，3组间差异有统计学意义（H=14．72，P〈0．01），cD4计数〈200／~1的感染者CTL应答广度低于cD。计数为200—500／~]和≥500／“l组。不同病毒载量3组（〈LDL、LDL一1×10。拷贝／ml和≥1×10。拷贝／m1）标本对17个肽库的总应答强度范围分别为490—18475SFCs／10。PBMC、0～24115SFCs／10。PBMC、770～34095SFCs／10。PBMC，但3组间差异无统计学意义（H=0．79，P=0．67）；应答广度分别为8（1～17）个、11（0～17）个、8（1～16）个，3组间差异也无统计学意义（日=5．27，P=0．07）。结论中国HIV／AIDS感染者中CTL应答多集中在Nef和Gag，这两个抗原为HIV／AIDS感染的优势抗原；感染时间和感染途径对CTL应答可产生显著影响；随感染时间的延长，免疫反应的强度与应答比例均增加。这些信息对设计针对中国人群的AIDS疫苗有较重要意义。

关键词： HIV感染 HIV-1 T淋巴细胞,细胞毒性基因组免疫酶技术

HIV感染者接种新型冠状病毒疫苗的必要性及免疫效果研究进展

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微生物学免疫学进展 2022年第6期50卷 80-85页

作者：张一帆(综述) 王万海万延民(审校) 复旦大学附属华山医院感染科国家传染病医学中心上海市传染病与生物安全应急重点实验室上海200040 郑州大学第一附属医院检验科河南省检验医学重点实验室河南郑州450052

目前,接种新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)是预防严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染及降低新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)重症率、死亡率的重要措施之一。人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者(HIV infector)是COVID-19的高风险人群,多国疾病预防控制机构和相关学术团体均建议优先为HIV感染者接种新冠疫苗,且已有研究显示HIV感染者接种新冠疫苗后的益处远大于风险。现通过梳理和总结近两年的相关研究,就HIV感染者接种新冠疫苗的必要性、接种效果、影响HIV感染者接种新冠疫苗效果的因素及接种新冠疫苗对HIV感染者的影响等作一概述,以期为HIV感染者新冠疫苗预防接种提供参考。

关键词：人类免疫缺陷病毒 HIV感染者新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒疫苗安全性有效性

T细胞表位对新型冠状病毒疫苗诱导抗体反应的影响

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微生物学免疫学进展 2022年第6期50卷 7-14页

作者：李少帅张一帆万延民闫冬梅佳木斯大学基础医学院微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室黑龙江佳木斯154007 郑州大学第一附属医院检验科河南省检验医学重点实验室河南郑州450052 复旦大学附属华山医院感染科上海200040

目的通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)S1蛋白与通用型辅助性T淋巴细胞表位(pan HLA DR-binding epitope,PADRE)融合的DNA疫苗,探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒(pJW4303-S1)、表达S1和PADRE融合蛋白的重组质粒(pJW4303-S1-PADRE)。以人源密码子优化的SARS-CoV-2刺突蛋白基因为模板设计引物,PCR扩增获得基因片段,并将其克隆入真核表达载体pJW4303。对pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE进行PCR扩增和酶切,产物通过琼脂糖凝胶电泳验证,并将重组质粒进行测序。构建正确的质粒转染293T细胞,Western blot验证蛋白体外表达情况。以C57BL/6小鼠为实验动物并分组,采用不同的免疫接种策略进行动物免疫,每次免疫间隔2周,免疫前采血,第6次免疫2周后处死小鼠并采血。通过ELISA检测不同免疫策略诱导的针对SARS-CoV-2 S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)的特异性抗体水平及其亲和力指数。结果PCR扩增和酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果及质粒测序结果表明质粒构建成功;Western blot结果表明这2个质粒可以在体外稳定表达S1蛋白、S1融合PADRE蛋白;ELISA结果显示,pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE单次免疫均可以诱导产生明显的针对RBD的抗体水平(P0.05)。抗体亲和力检测结果显示,第6次免疫后不同免疫策略诱导的针对RBD的抗体亲和力指数差异也无统计学意义(P>0.05)。结论pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE均具有较强的体液免疫原性,但PADRE不能进一步提高S1蛋白DNA疫苗的体液免疫原性。

关键词：抗体滴度 DNA疫苗通用型辅助性T淋巴细胞表位严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 刺突蛋白重组质粒疫苗评价

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ELISPOT辅助临床结核病诊断价值分析

中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 360-363页

作者：朱召芹卢水华王瑶娟熊延青刘晓茜万延民席秀红许艳张仁芳施裕新卢洪洲 Douglas Lowrie 上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心生物安全部上海201508 上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心科学研究部上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心呼吸科上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心感染一科上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心放射科

目的探讨ELISPOT在结核病诊断中的应用价值。方法分离TB患者54例和非TB患者52例的外周血单个核淋巴细胞,并采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10为抗原的ELISPOT试验技术进行结核分枝杆菌(Mtb)特异性T淋巴细胞免疫反应的检测,同... 详细信息

目的探讨ELISPOT在结核病诊断中的应用价值。方法分离TB患者54例和非TB患者52例的外周血单个核淋巴细胞,并采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10为抗原的ELISPOT试验技术进行结核分枝杆菌(Mtb)特异性T淋巴细胞免疫反应的检测,同时做痰涂片、痰培养、PPD试验和胶体金法检测。以临床明确诊断为标准,比较分析评价不同检测方法的敏感度和特异度。结果 TB-ELISPOT的敏感度(Se)90.7%、特异度(Sp)96.15%、阳性预测值(PPV)0.96、阴性预测值(NPV)0.91、阳性似然比(+LR)23.55和阴性似然比(-LR)0.1;胶体金法的Se 59.26%、Sp 88.46%、PPV0.84、NPV 0.68、+LR 5.14和-LR 0.46;PPD试验的Se 64.81%、Sp 82.69%、PPV 0.80、NPV 3.74、+LR 0.69和-LR 0.43;痰涂片的Se 40.74%、Sp 100.00%、PPV 1.0、NPV 0.62、+LR>10和-LR0.52;痰培养的Se 25.93%、Sp 100.00%、PPV 1.0、NPV 0.57、+LR>10和-LR0.77。统计结果显示ELISPOT检测的敏感度明显高于其它常用结核病诊断方法。ELISPOT在痰涂片和痰培养阴性的TB患者中的阳性检出率分别为84.38%和87.5%。结论 ELISPOT是一种敏感度和特异度均较高的结核病免疫学辅助诊断方法,有助于提高诊断结核感染的阳性检出率,且耗时短,可作为临床结核病诊断尤其是菌阴结核病的重要辅助手段之一,具有较高的临床推广价值。

关键词：结核病诊断酶联斑点杂交技术