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经大鼠面神经管引导耳蜗生物电反应

中华耳科学杂志 2014年第1期12卷 128-135页

作者：于进涛丁大连孙虹 Richard Salvi 中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈外科长沙410013 Center for Hearing and Deafness State University of New York at Buffalony14214

耳蜗生物电包括耳蜗内淋巴直流电位(EP),耳蜗微音器电位(CM),总和电位(SP),及听神经复合动作电位(CAP),这些不同的电位成份分别起源于耳蜗内不同的组织器官。除了EP是反映血管纹功能状态的静息电位之外,其它耳蜗生物电位都是声刺激诱发... 详细信息

耳蜗生物电包括耳蜗内淋巴直流电位(EP),耳蜗微音器电位(CM),总和电位(SP),及听神经复合动作电位(CAP),这些不同的电位成份分别起源于耳蜗内不同的组织器官。除了EP是反映血管纹功能状态的静息电位之外,其它耳蜗生物电位都是声刺激诱发的耳蜗内不同组织细胞的电反应。因此,记录耳蜗生物电是直接反映耳蜗功能的最佳观察指标。许多传统的耳蜗生物电引导方法由于把电极置放到中耳腔内难免损伤中耳组织和结构而大都仅适用于急性或亚急性动物实验却不利于开展慢性实验的长期记录和观察。尤其在大鼠目前还缺少一种稳定可靠的长时期观察耳蜗生物电的引导方法。本实验将银丝电极经大鼠茎乳孔插入到面神经管水平段,由于面神经管水平段与耳蜗仅以很薄的骨壁相隔,因此可以从近距离引导出良好的耳蜗生物电反应。同时,由于电极埋藏在面神经管内而无需打开中耳腔,因此也避免了中耳粘膜或听骨链损伤以及因此而可能发生的术后中耳感染。我们在电极植入到同一动物测试耳面神经管水平段后不同时间测试的CAP和CM以及SP波形清晰并具有可靠的重复性,但是在不同动物之间的耳蜗生物电振幅却存在一定的差异,提示本方法引导的耳蜗生物电更适合于对同一测试耳进行实验前后的比较和观察。经面神经管这一天然骨性管道把引导耳蜗生物电的电极巧妙地植入到耳蜗隔壁,为更有效直接观察耳蜗各个组织器官对声刺激的反应提供了有益的参考经验。本文还就各种耳蜗生物电反应的特点及其相互内在联系以及与ABR之间的关系展开了讨论。

关键词：面神经管大鼠耳蜗微音器电位总和电位听神经复合动作电位

耳蜗急性纯音损伤后下丘及耳蜗核快速功能重组

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中华耳鼻咽喉科杂志 1997年第4期32卷 218-221页

作者：王坚丁大连 RichardJ.Salvi 美国纽约布法罗大学耳聋及听力学研究中心

实验比较高强度纯音损伤耳蜗局部区域前后，耳蜗背核及下丘接近损伤区边缘的神经元反应特性的改变。致损纯音的频率高于神经元的特征频率，且位于其兴奋区以外，所以不影响其兴奋性输入。结果发现此种纯音损伤在逾半数的神经元产生不同... 详细信息

实验比较高强度纯音损伤耳蜗局部区域前后，耳蜗背核及下丘接近损伤区边缘的神经元反应特性的改变。致损纯音的频率高于神经元的特征频率，且位于其兴奋区以外，所以不影响其兴奋性输入。结果发现此种纯音损伤在逾半数的神经元产生不同程度的去抑制效应，提示皮层的功能重组可能部分地起源于低位中枢的功能改变，下丘和耳蜗背核的抑制性神经网络具有相当程度的侧抑制组分。

关键词：耳蜗疾病下丘听力障碍功能重建耳蜗核

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微波治疗利尿酸中毒性聋的实验研究

中华耳鼻咽喉科杂志 1993年第4期28卷 225-227,T023页

作者：陈学明丁大连上海第二医科大学附属仁济医院耳鼻咽喉科邮政编码200001

利用豚鼠利尿酸中毒性聋的动物模型,采用低功率密度的微波进行耳部照射处理,观察耳蜗的功能和形态学改变。结果发现:豚鼠静脉注射利尿酸后即刻进行微波照射能使利尿酸所致的ABR阈移明显变小,听阈恢复到正常的时间明显缩短,螺旋韧带铺片... 详细信息

利用豚鼠利尿酸中毒性聋的动物模型,采用低功率密度的微波进行耳部照射处理,观察耳蜗的功能和形态学改变。结果发现:豚鼠静脉注射利尿酸后即刻进行微波照射能使利尿酸所致的ABR阈移明显变小,听阈恢复到正常的时间明显缩短,螺旋韧带铺片观察显示的血管纹缺血和透射电镜观察的血管纹细胞水肿均较未经微波照射者为轻,恢复也快。因此提示微波具有改善耳蜗血管纹缺血,减轻血管纹细胞的亚微病理,从而促进听功能恢复的作用。

关键词：微波利尿酸听力障碍耳聋

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卡那霉素在耳蜗毛细胞中的积聚部位

中华耳鼻咽喉科杂志 1997年第6期32卷 348-349页

作者：丁大连金晓杰赵纪余上海第二医科大学耳科研究室仁济医院耳鼻咽喉科

为进一步探讨卡那霉素的耳中毒机理，应用放射自显影和电镜技术观察了３Ｈ标记卡那霉素在５只豚鼠耳蜗毛细胞中的积聚部位。发现卡那霉素主要积聚在线粒体、质细胞膜和静纤毛。卡那霉素积聚在线粒体的原因可能是由于线粒体具有与细菌相... 详细信息

为进一步探讨卡那霉素的耳中毒机理，应用放射自显影和电镜技术观察了３Ｈ标记卡那霉素在５只豚鼠耳蜗毛细胞中的积聚部位。发现卡那霉素主要积聚在线粒体、质细胞膜和静纤毛。卡那霉素积聚在线粒体的原因可能是由于线粒体具有与细菌相同的蛋白质合成方式，卡那霉素可以其杀菌的相同方式抑制线粒体的蛋白质合成。卡那霉素积聚在质膜的原因可能由于这里是药物进入细胞的途径。而药物积聚在静纤毛的原因可能与卡那霉素对糖萼的化学亲和力有关。

关键词：卡那霉素线粒体耳蜗毛细胞放射自显影术

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大鼠耳蜗器官培养及其组织学检查技术

中国耳鼻咽喉头颈外科 2009年第11期16卷 604-607页

作者：付勇丁大连 Richard Salvi 浙江大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科浙江杭州310003 美国纽约布法罗大学听力与耳聋中心美国纽约14214

目的探讨大鼠耳蜗器官体外培养的方法和观察毛细胞、神经纤维及螺旋神经节细胞的组织学检查技术。方法将出生3天的SASCO Sprague Dawley大鼠耳蜗取出平铺培养。应用神经丝免疫组织化学方法对螺旋神经节细胞及神经纤维染色,同时应用鬼笔... 详细信息

目的探讨大鼠耳蜗器官体外培养的方法和观察毛细胞、神经纤维及螺旋神经节细胞的组织学检查技术。方法将出生3天的SASCO Sprague Dawley大鼠耳蜗取出平铺培养。应用神经丝免疫组织化学方法对螺旋神经节细胞及神经纤维染色,同时应用鬼笔环肽染色特异性显示耳蜗毛细胞的静纤毛和表皮板。在共聚焦显微镜下应用不同的激发荧光分别显示耳蜗毛细胞、螺旋神经节和神经纤维。结果耳蜗器官经1～3天离体培养,内、外毛细胞生长良好,无衰亡和缺损;神经纤维排列有序;螺旋神经节细胞形态正常。结论本文介绍的耳蜗器官体外培养方法和组织学检查指标,将在常规评估耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞和神经纤维的离体培养损害实验模型中,有一定应用价值。

关键词：大鼠动物实验耳蜗细胞培养的

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一种用于内耳siRNA转染的新型蛋白载体

中华耳科学杂志 2020年第5期18卷 932-937页

作者：亓卫东丁大连曹轶倓袁芳复旦大学附属华山医院耳鼻咽喉头颈外科上海200040 美国纽约州立大学布法罗分校耳聋及听力研究中心 NY 14214 USA

目的通过体外实验与脂质载体LipoFiter^(TM)进行对比,验证小干扰RNA(siRNA)蛋白载体TAT-DRBD载体在耳蜗的转染效率及安全性。并在卡铂南美栗鼠内耳损害实验模型中,通过TAT-TRBD载体携带siRNA特异性下调铜转运蛋白Slc31a1基因的表达,验... 详细信息

目的通过体外实验与脂质载体LipoFiter^(TM)进行对比,验证小干扰RNA(siRNA)蛋白载体TAT-DRBD载体在耳蜗的转染效率及安全性。并在卡铂南美栗鼠内耳损害实验模型中,通过TAT-TRBD载体携带siRNA特异性下调铜转运蛋白Slc31a1基因的表达,验证对毛细胞的保护。方法离体条件下,应用TAT-DRBD携带Cy3标记的siRNA转染新生SD大鼠耳蜗基底膜,12小时后激光共聚焦显微镜观察;TAT-DRBD及LipoFiter^(TM)载体转染新生SD大鼠耳蜗基底膜48小时后计数毛细胞丢失及损伤情况。南美栗鼠在接受单次腹腔内卡铂注射前24小时左耳通过TAT-DRBD载体行Slc31a1基因特异性siRNA转染,右耳为对照,12天后处死并通过行全耳蜗基底膜铺片计数毛细胞丢失比例。结果在离体耳蜗器官型培养中,TAT-DRBD可高效转染Cy3标记的siRNA进入毛细胞,效率几达100%。新生SD大鼠耳蜗基底膜中段在加入脂质体LipoFiterTM48小时后会导致严重的耳基底膜内、外毛细胞损害及纤毛排列紊乱;TAT-DRBD组却无明显毛细胞丢失及纤毛排列紊乱。在活体南美栗鼠,治疗耳的内毛细胞(IHC)仅在距蜗尖(Apex)45%~85%距离处有不超过20%的毛细胞丢失。而对照组全程均有IHC损害,在距蜗尖65%~75%处有近40%的IHC丢失。结论 TAT-DRBD作为一种新型的基因重组蛋白载体,在离体条件下可有很高的转染效率且无明显耳毒性作用,在内耳转染安全性方面较脂质体有明显优势。通过RNAi手段特异性抑制铜离子跨膜转运蛋白表达可以有效降低卡铂耳毒性。

关键词：内耳小干扰RNA 转染

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大鼠耳蜗疆孔内听神经纤维的定量观察

听力学及言语疾病杂志 2010年第5期18卷 470-473页

作者：付勇丁大连 Richard Salvi 浙江大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科 Center for hearing and Deafness State University of Newyork at BuffaloNYU.S.A14214

目的探讨定量观察正常SD大鼠疆孔内听神经纤维数量的方法。方法取5只正常SD大鼠耳蜗(正常组),EPON812包埋后,沿蜗轴平面作半薄切片,甲苯胺蓝染色后光镜下观察拍照,用Adobe Photoshop图像处理软件处理图像,并采用计数单个完整疆孔内神经... 详细信息

目的探讨定量观察正常SD大鼠疆孔内听神经纤维数量的方法。方法取5只正常SD大鼠耳蜗(正常组),EPON812包埋后,沿蜗轴平面作半薄切片,甲苯胺蓝染色后光镜下观察拍照,用Adobe Photoshop图像处理软件处理图像,并采用计数单个完整疆孔内神经纤维数量均值及疆孔内神经纤维密度均值的方法分别对耳蜗底回起始段、底回末段及中回中段疆孔内的听神经纤维进行计数,对耳蜗各部位听神经纤维数目的差异进行方差分析。以同法对5只乌苯苷耳中毒SD大鼠(耳中毒组)疆孔内听神经进行了定量观察,以验证此法的实用性。结果正常SD大鼠疆孔内的神经纤维数量在耳蜗底回起始段、耳蜗底回末段、耳蜗中回中段分别为22.78±7.15、130.12±50.73、58.66±9.12根,各部位的差异有显著统计学意义(F=195.15,P<0.01);疆孔内听神经纤维密度(104根/mm2)在底回起始段、底回末段、中回中段分别为7.17±1.51、23.95±2.73、15.95±2.26,在底回末段的疆孔内神经纤维的数量多于耳蜗底回起始端和耳蜗中回中段(F=804.86,P<0.01)。耳中毒组耳蜗底回起始段、末段和耳蜗中回中段疆孔内神经纤维数量分别为13.63±12.34、80.69±24.42、54.94±8.79根,神经纤维密度(104根/mm2)分别为2.06±1.53、15.94±2.26、15.68±2.52,其中,耳蜗底回起始段和末段均明显少于相应的正常组(P<0.01)。结论采用疆孔内神经纤维密度均值定量观察疆孔内听神经纤维的数量,其结果可靠且更稳定。

关键词：疆孔神经纤维大鼠密度

CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式的比较

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中国实验动物学报 2019年第6期27卷 790-798页

作者：周凌宣伟军丁大连黑龙江中医药大学附属第一医院耳鼻咽喉科哈尔滨150040 广西中医药大学第一临床医学院耳鼻咽喉科南宁530023 马萨诸塞州总医院哈佛大学医学院波士顿MA 02114美国听力与耳聋中心纽约州立布法罗大学布法罗NY 14214美国

目的探讨和比较CBA/CaJ与C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式与规律。方法选择年龄在6个月、12个月、18个月和24个月的CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠各32只,其中每个年龄各8只,全身麻醉下取耳蜗,进行全耳蜗基底膜铺片,将全耳蜗... 详细信息

目的探讨和比较CBA/CaJ与C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式与规律。方法选择年龄在6个月、12个月、18个月和24个月的CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠各32只,其中每个年龄各8只,全身麻醉下取耳蜗,进行全耳蜗基底膜铺片,将全耳蜗内、外毛细胞计数结果输入计算机并应用耳蜗图软件,按照对应的不同年龄进行两个鼠种耳蜗毛细胞密度对比和统计学分析。结果CBA/CaJ小鼠于12月龄耳蜗顶部外毛细胞开始出现轻度损失,伴随着年龄增加,外毛细胞损失继续扩大,以顶部向中部发展为主,后期内毛细胞也出现损失。从18月龄开始,耳蜗外毛细胞损失与上个年龄组比较均增加显著(P<0.05)。而C57BL/6J小鼠于6月龄耳蜗底部均已出现外、内毛细胞损失,而且以外毛细胞损失为主,此后伴随着年龄增加,毛细胞损失不断扩大,于6月龄开始,耳蜗外、内毛细胞损失与同龄CBA/CaJ小鼠比较均明显增加(P<0.05),12月龄开始与同鼠种上个年龄组比较均明显增加(P<0.05)。结论CBA/CaJ小鼠耳蜗毛细胞损害遵循着从顶部和底部两端开始,向中部延伸,但顶部毛细胞损害比底部严重的病变规律。C57BL/6J小鼠耳蜗毛细胞损害遵循着主要从耳蜗底部开始,逐渐向中部和顶部扩展的病变规律。外毛细胞损害比内毛细胞早。C57BL/6J小鼠毛细胞损害比CBA/CaJ小鼠早。提示两个鼠种均可作为老年性毛细胞凋亡研究动物模型,但以C57BL/6J小鼠模型更适合短期观察研究,两者间所出现的毛细胞变化差别可能与Cdh23基因是否变异和缺失有关。

关键词：小鼠耳蜗毛细胞耳蜗图

Cochlear mitochondrial DNA3867bp deletion in aged mice

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Chinese Medical Journal 2002年第9期115卷 1390-1393,155页

作者：张欣欣韩东一丁大连戴朴杨伟炎姜泗长 Richard J.Salvi 北京中国人民解放军总医院耳鼻咽喉科北京100853 美国纽约洲Buffalo大学听力及聋病康复中心

OBJECTIVES: To study the status of cochlear mitochondrial DNA (mtDNA) and to determine the location of mtDNA deletion in aged mice. METHODS: We detected cochlear mtDNA in 2, 7 - 10 and 17 - 19 month old mice by nested polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing. RESULTS: mtDNA3867bp deletions were found in the cochleae of aged mice. The deletion occurred within nt9103-nt12970 and were flanked by 15 base pair direct repeats. Comparing the incidence of mtDNA3867bp deletions, 17 - 19 month old mice (7/8) were significantly higher than 7 - 10 month old mice (4/16). The deletion was not observed in 2 month old mice (0/7). The ratio of deleted mtDNA/total mtDNA in 17 - 19 month old mice was higher than in 7 - 10 month old mice (P

关键词： Sequence Deletion Aging Animals Base Sequence Cochlea DNA, Mitochondrial Mice Molecular Sequence Data Oxidative Phosphorylation Presbycusis Research Support, Non-U.S. Gov't