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对内耳氧化抗氧化失衡的反思

临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2013年第17期27卷 965-974页

作者：王璐丁大连孙虹 Richard Salvi 中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉-头颈外科长沙410013 Center for Hearing and Deafness State University of New York at Buffalo 中南大学湘雅医院耳鼻咽喉-头颈外科

生物氧化是指生物细胞内通过对代谢物的一系列氧化一还原反应产生能量的化合过程，也被称之为细胞呼吸或组织呼吸，因此生物氧化可以说是生物存活须臾不可缺少的生命活动，一旦生物氧化终止则意味着生命的终结。伴随生物氧化过程所产生... 详细信息

生物氧化是指生物细胞内通过对代谢物的一系列氧化一还原反应产生能量的化合过程，也被称之为细胞呼吸或组织呼吸，因此生物氧化可以说是生物存活须臾不可缺少的生命活动，一旦生物氧化终止则意味着生命的终结。伴随生物氧化过程所产生的活性氧自由基（reactiveoxygenspecies，ROs）是生命体活动中多种生化反应的正常中间代谢产物，作为机体的有效防御系统之一，自由基在维持能量供应、促进机体新陈代谢、剿灭细菌病原体、清除机体内毒素、调节机体内多种信号传递通路等许多方面都发挥着十分重要的积极作用。

关键词：内耳氧化应激

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缺氧豚鼠耳蜗功能瑟结构的改变

中华耳鼻咽喉科杂志 1993年第5期28卷 265-267,T031页

作者：丁大连吴大正上海第二医科大学仁济医院

观察豚鼠缺氧和窒息致死蜗内电位（ＥＰ）、微音电位（ＣＭ）和总和电位（ＳＰ）的变化，耳蜗的亚微结构改变和听毛细胞存活时间，发现在窒息和死亡过程中；①血管纹对缺氧比毛细胞更敏感；②８５％的ＣＭ对缺氧敏感，并依赖于耳蜗正常... 详细信息

观察豚鼠缺氧和窒息致死蜗内电位（ＥＰ）、微音电位（ＣＭ）和总和电位（ＳＰ）的变化，耳蜗的亚微结构改变和听毛细胞存活时间，发现在窒息和死亡过程中；①血管纹对缺氧比毛细胞更敏感；②８５％的ＣＭ对缺氧敏感，并依赖于耳蜗正常代谢，窒息致后仍有１５％ＣＭ残留，其消失的时间外毛细胞的存活时间有关；③－ＳＰ出现极性倒转现象；④－ＥＰ的消失与外毛细胞死亡和ＣＭ消失有关。

关键词：缺氧耳蜗听力测验法诱发电位

弱冲击波对豚鼠耳蜗表面结构损伤的扫描电镜观察

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中华创伤杂志 1991年第5期7卷 135-138页

作者：高文元丁大连第二军医大学海医系上海仁济医院耳科实验室

豚鼠暴露157,160,163和166dB SPL峰值的冲击波10发,暴露后0.5h,8d和30d分别进行皮层声诱发电位测试和耳蜗扫描电镜观察。结果表明,暴露后阈移随峰值增大而严重,但不完全呈线性关系。随峰值不同,静纤毛损伤程度,类型,范围也不同。第3排... 详细信息

豚鼠暴露157,160,163和166dB SPL峰值的冲击波10发,暴露后0.5h,8d和30d分别进行皮层声诱发电位测试和耳蜗扫描电镜观察。结果表明,暴露后阈移随峰值增大而严重,但不完全呈线性关系。随峰值不同,静纤毛损伤程度,类型,范围也不同。第3排外毛细胞静纤毛头部弯曲和分离是可逆性病变,内毛细胞和第1排外毛细胞静纤毛紊乱,倒伏,折断和融合则和永久性阈移有关。

关键词：冲击波耳蜗静纤毛阈移

Tiron对抗外源性过氧化氢对离体培养小鼠耳蜗Corti器损伤研究

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临床耳鼻咽喉科杂志 2003年第4期17卷 220-223页

作者：祝威王苹金昕丁大连 SalviR 杜宝东吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科长春130021 美国布法罗大学听力-耳聋研究中心

目的:探讨Tiron能否有效对抗过氧化氢(H_2O_2)对离体培养小鼠Corti器内、外毛细胞的损伤。方法:采用新生小鼠Corti器体外培养技术,建立外源性H_2O_2损伤内外毛细胞模型,给予不同浓度的Tiron,观察对H_2O_2损伤的保护作用、结果:H_2O_2浓... 详细信息

目的:探讨Tiron能否有效对抗过氧化氢(H_2O_2)对离体培养小鼠Corti器内、外毛细胞的损伤。方法:采用新生小鼠Corti器体外培养技术,建立外源性H_2O_2损伤内外毛细胞模型,给予不同浓度的Tiron,观察对H_2O_2损伤的保护作用、结果:H_2O_2浓度大于1.0mmol/L时,基底膜顶回、中回和底回毛细胞损伤程度不同,底回较重,顶回和中回损伤程度在统计学上无差别。在低于0.5mmol/L时毛细胞损伤与位置无关。在培养液中加入Tiron(10 mmol/L)可以明显减轻H_2O_2对毛细胞的损伤程度。当H_2O_2浓度在0.01～1.0 mmol/L之间时,Tiron几乎可以完全抑制毛细胞的损伤和缺失。结论:Tiron对于小鼠离体培养的Corti器具有明显的保护作用,其对抗H_2O_2损伤的机制可能通过清除超氧阴离子O_2^-和螯合铁离子共同发挥作用。

关键词：自由基 4,5-二羟1,3-苯二磺酸二钠耳蜗毛细胞

豚鼠卡那霉素中毒内耳毛细胞中溶酶体的电镜细胞化学观察

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中华耳鼻咽喉科杂志 1990年第5期25卷 281-282页

作者：罗德峰丁大连上海第二医科大学附属仁济医院耳科研究室邮政编码200001

利用酸性磷酸酶的电镜细胞化学方法,对正常及卡那霉素中毒豚鼠内耳毛细胞中的溶酶体进行观察。发现正常动物溶酶体呈均质高电子密度集中于表皮板下,用药组动物溶酶体几乎均表现为多泡体,并发现溶酶体增大、移位,其中的小泡融合成大空泡... 详细信息

利用酸性磷酸酶的电镜细胞化学方法,对正常及卡那霉素中毒豚鼠内耳毛细胞中的溶酶体进行观察。发现正常动物溶酶体呈均质高电子密度集中于表皮板下,用药组动物溶酶体几乎均表现为多泡体,并发现溶酶体增大、移位,其中的小泡融合成大空泡样溶酶体,在胞质溶解、胞内容物外溢及坏死的细胞中溶酶体消失。溶酶体中的小泡可能为卡那霉素或其代谢产物的吞饮小泡,提示溶酶体内药物及其代谢产物的蓄积,溶酶体过载、破裂导致细胞自溶是卡那霉素损害内耳的可能机制之一。

关键词：卡那霉素耳中毒溶酶体内耳鼠

caspase-3激活在庆大霉素所致耳蜗螺旋神经元延迟性死亡过程中的作用

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中国老年学杂志 2007年第19期27卷 1882-1885页

作者：王苹杜波丁大连杜宝东 Salvi RJ 吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科吉林长春130021 Center for Hearing and Deafness University of Buffalo

目的观察毛细胞丢失后耳蜗神经元延迟性死亡模式以及caspase-3的活动。方法采用3mol的庆大霉素作用离体培养的耳蜗24h,损毁全部毛细胞,分别在毛细胞丢失后1、3、5、7和14d收获样本。采用Neurofilament 200KDa标记耳蜗神经元,TRITC-label... 详细信息

目的观察毛细胞丢失后耳蜗神经元延迟性死亡模式以及caspase-3的活动。方法采用3mol的庆大霉素作用离体培养的耳蜗24h,损毁全部毛细胞,分别在毛细胞丢失后1、3、5、7和14d收获样本。采用Neurofilament 200KDa标记耳蜗神经元,TRITC-labeled phalloidin标记毛细胞,免疫荧光染色观察神经元和毛细胞的存活数量,采用WesternBlot的方法检测caspase-3特异降解产物α-spectrin,间接确定caspase-3活动。结果3mol庆大霉素作用于培养的耳蜗24h,耳蜗毛细胞几乎全部消失。螺旋神经元和神经纤维的数目随培养时间的延长而减少,神经元存活从第1天的87%降至第14天的5%。神经元变小且形状不规则,在神经纤维上出现实质小体。检测caspse-3激活的特异降解带-120KDa的灰度值,发现在毛细胞丢失后24h,caspase-3活性明显高于毛细胞丢失的初时(P<0.01)。结论毛细胞丢失引起螺旋神经元死亡具有时间依赖效应,神经元出现凋亡的形态学特征,并且有caspase-3的活动。

关键词：耳蜗螺旋神经元延迟性死亡 caspase-3

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实验性膜迷路积水早期耳蜗电活动的变化

中华耳鼻咽喉科杂志 1993年第1期28卷 8-10,T002页

作者：吴大正丁大连上海中医学院附属曙光医院邮政编码200021 上海第二医科大学附属仁济医院

阻塞豚鼠内淋巴囊与内淋巴管造成实验性膜迷路积水(HL),4周后测试耳蜗内电位(EP)、耳蜗微音电位(CM)及合电位(SP)。发现膜迷路积水时EP降低7.29μV。6个频率(0.5、1、2、4、5与8kHz)导出的CM最小输出分别下降83.1%、82.4%、84.5%、84.2%... 详细信息

阻塞豚鼠内淋巴囊与内淋巴管造成实验性膜迷路积水(HL),4周后测试耳蜗内电位(EP)、耳蜗微音电位(CM)及合电位(SP)。发现膜迷路积水时EP降低7.29μV。6个频率(0.5、1、2、4、5与8kHz)导出的CM最小输出分别下降83.1%、82.4%、84.5%、84.2%、47.2%与54.2%,CM最大输出分别下降54.3%、41.0%、43.2%、21.2%、26.0%与21.4%。4、5kHz SP最小输出分别下降62.4%与70.5%,SP最大输出分别下降41.5%和45.2%。表明膜迷路积水早期,EP、CM与SP均出现降低,其中低频CM的降低明显大于高频。并对膜迷路积水早期EP、CM与SP降低的机制进行了讨论。

关键词：听力测验诱发电位迷路

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庆大霉素在豚鼠外淋巴中的蓄积现象

第二军医大学学报 1993年第6期14卷 568-571页

作者：朱巧英刘皋林丁大连金西铭上海市红光医院耳鼻咽喉科 200003 长海医院药剂科 200433 上海市仁济医院耳鼻咽喉科 200001

根据药代动力学原理,采用荧光偏振免疫法(FPIA)检测不同时间内豚鼠外淋巴中庆大霉素的浓度,了解其蓄积的情况。结果表明:(1)外淋巴内的药物浓度随庆大霉素用药量的增加而上升,基本上呈线性关系:(2)在注射7d的一组动物,停药72h仍能测到药... 详细信息

根据药代动力学原理,采用荧光偏振免疫法(FPIA)检测不同时间内豚鼠外淋巴中庆大霉素的浓度,了解其蓄积的情况。结果表明:(1)外淋巴内的药物浓度随庆大霉素用药量的增加而上升,基本上呈线性关系:(2)在注射7d的一组动物,停药72h仍能测到药物,其浓度接近血清最低有效浓度,达1.3±0.95μg/ml,提示内耳对药物排泄十分缓慢,确实存在外淋巴对庆大霉素的明显蓄积:(3)前述事实表明,即使已停药数日,药物的耳毒作用仍在继续,从而解释了临床上有些病人在停药后仍出现耳毒症状或症状加剧的问题。

关键词：庆大霉素外淋巴毒性

重组腺病毒对体外培养耳蜗Corti器的转染特性

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第42期11卷 8453-8456页

作者：王苹杜波丁大连杜宝东吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科吉林省长春市130021

目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用最广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显。通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性。方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校... 详细信息

目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用最广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显。通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性。方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校听力耳聋研究中心完成。①实验材料:Fisher大鼠来源于布法罗大学的实验动物中心。AdV/EGFP是Buffalo大学***惠赠。②实验方法:选取出生3d的大鼠分离获取耳蜗组织。使用携带报告基因-EGFP的重组腺病毒(AdV/EGFP),以1×107,1×108,1×109,2×109VP/mL作用耳蜗,于感染后6,12,24,48h和3d,固定组织,观察感染特性。分离出生3d的大鼠耳蜗Corti器,基底膜分离后,立即进入2mL滴度为1×109VP/mL,含2mmol/L的庆大霉素病毒溶液,作用3h后平铺到胶粒上,加入含2mmol/L庆大霉素的生长培养基,作用24h后收获样品。③实验评估:采用TRITC-labeledphaloidin组织化学染色,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白EGFP和TRIC在耳蜗细胞中的表达定位。结果:①重组腺病毒可转染离体培养耳蜗组织中的各种类型细胞,外沟细胞感染率最高,其次为齿间细胞。仅有很少部分的毛细胞和螺旋神经元被感染。②在病毒滴度在107～109VP/mL的范围内,重组腺病毒感染耳蜗具有剂量依赖性,但大于这个滴度并不会增加感染效率,而且高浓度的重组病毒可造成毛细胞和外沟细胞破坏。③EGFP最早于感染后6h出现,48h达到高峰,外源基因高表达至少可维持7d。④庆大霉素损伤所有的毛细胞后,重组腺病毒能够感染多数的Deiters’细胞,齿间细胞的感染效率高于腺病毒对正常耳蜗组织的感染。结论:重组腺病毒转染效率在耳蜗各种类型细胞明显不同,重组腺病毒优先感染耳蜗支持细胞。

关键词：内耳,重组腺病毒,基因转染组织工程细胞工程