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红莲型细胞质雄性不育育性恢复基因的遗传与及Rf6的克隆

红莲型细胞质雄性不育育性恢复基因的遗传与及Rf6的克隆

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：黄文超胡骏朱英国武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室

细胞质雄性不育(CMS)现象是指雌性器官发育正常,能够正常受精而雄性器官发育不正常,不能产生正常受精配子的现象,而CMS现象能够在植物细胞核基因的作用下育性恢复正常,人们正是利用这一现象实现水稻三系配套,为世界粮食安全作出了巨大... 详细信息

细胞质雄性不育(CMS)现象是指雌性器官发育正常,能够正常受精而雄性器官发育不正常,不能产生正常受精配子的现象,而CMS现象能够在植物细胞核基因的作用下育性恢复正常,人们正是利用这一现象实现水稻三系配套,为世界粮食安全作出了巨大贡献。通过构建多个杂交群体分析了红莲型水稻恢复基因的遗传,发现了使红莲型水稻CMS现象恢复正常的细胞核基因Rf6,利用分子标记技术对恢复基因Rf6进行定位分析,构建红莲型水稻强恢复系9311基因组文库,筛选目标基因克隆,测序发现候选基因并完成功能互补实验,同时对其恢复机理进行了初探,研究发现的红莲型杂交稻双基因的育性恢复模式,将对配子体雄性不育水稻强恢复系选育具有重大实践指导意义,为深入理解细胞质雄性不育和育性恢复提供了新亮点。

关键词：水稻细胞质雄性不育恢复基因基因克隆

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TCTP使VHL降解来促进肿瘤发生

TCTP使VHL降解来促进肿瘤发生

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：陈科陈述亮周荣家程汉华武汉大学生命科学学院遗传学系

VHL综合症是由抑癌基因VHL失活而引起的,由VHL的缺失导致的肿瘤途径有很多种,其中包括激活HIF这一转录因子。TCTP最初是在是在肿瘤细胞系中发现的并且其表达是在蛋白翻译水平上受调控的,因此命名为TCTP(Translationally controlled tumo...

VHL综合症是由抑癌基因VHL失活而引起的,由VHL的缺失导致的肿瘤途径有很多种,其中包括激活HIF这一转录因子。TCTP最初是在是在肿瘤细胞系中发现的并且其表达是在蛋白翻译水平上受调控的,因此命名为TCTP(Translationally controlled tumor protein)。TCTP在酵母、动物以及植物中具有很高的同源性。近几年的研究证实TCTP具有非常重要的生物学功能,TCTP可以刺激组胺的释放,它能被释放到细胞外并且受到TSAP6和P53的调控。TCTP在肿瘤逆转过程中起着很重要的作用,其表达量降低可以使一些肿瘤细胞逆转为正常细胞。TCTP在抗凋亡以及刺激细胞生长过程中也起着很重要的作用,并且它还是OCT4的一个转录因子。我们证实TCTP在细胞内能与VHL相互作用并且调节VHL的稳定性。超表达TCTP能够促进VHL的降解。研究TCTP与VHL相互作用的功能对于了解TCTP在肿瘤发生过程中的作用有很大的帮助。综上所述,在一些肿瘤发生中,TCTP很可能通过使VHL降解来促进肿瘤发生。

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通过ELISA方法测定生长激素水平缩短转基因鱼的育种周期

通过ELISA方法测定生长激素水平缩短转基因鱼的育种周期

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：钟山汪亚平陈竹鲁鹏廖兰杰朱作言中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉大学生命科学学院遗传学系武汉大学基础医学院遗传学系

为缩短快速生长转基因鱼育种年限并降低选育工作量,本研究采用了特研制的能检测鲤科鱼血清生长激素水平的单克隆抗体,结合酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbentassays,ELISA)技术测定鲤鱼的血清生长激素水平,比较了快速生长转... 详细信息

为缩短快速生长转基因鱼育种年限并降低选育工作量,本研究采用了特研制的能检测鲤科鱼血清生长激素水平的单克隆抗体,结合酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbentassays,ELISA)技术测定鲤鱼的血清生长激素水平,比较了快速生长转基因鲤鱼与普通鲤鱼杂交后F代中转基因鲤鱼与对照鲤鱼血清生长激素表达水平的差异,结果表明快速生长转基因鲤鱼F代其血清生长激素水平显著高于对照鲤鱼,转基因鲤鱼血清生长激素平均水平可为对照鲤鱼的52倍以上,并具有快速生长效应。结果提示在筛选快速生长转基因鱼亲本时,以往只选留转基因鱼,这种育种方式养殖成本高,并且后代筛选工作量大,而结合ELISA技术选留血清生长激素高的鱼育种则能降低养殖成本、降低后代筛选工作量并缩短育种的年限。

关键词：转基因鱼生长激素 ELISA 育种

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水稻花粉发育过程中多糖多光谱显微定量分析研究

水稻花粉发育过程中多糖多光谱显微定量分析研究

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：刘树楠潘磊丁毅武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室生命科学学院遗传学系

水稻花粉的发育与多糖营养物质的积累有关。然而,在水稻花粉发育的过程中,有关多糖营养物质含量变化的定量生物学研究,还未见报道。多光谱显微成像技术是一种能够在连续光谱段上对同一目标成像并记录其光谱特征的技术,是从事细胞定量生... 详细信息

水稻花粉的发育与多糖营养物质的积累有关。然而,在水稻花粉发育的过程中,有关多糖营养物质含量变化的定量生物学研究,还未见报道。多光谱显微成像技术是一种能够在连续光谱段上对同一目标成像并记录其光谱特征的技术,是从事细胞定量生物学研究的一种新方法。本研究是将多光谱显微成像技术与细胞内大分子物质的定量研究结合起来,通过高碘酸-席夫试剂染色、多光谱成像仪扫描观察,对四种不同的水稻细胞质雄性不育系(红莲、马协、珍汕97、紫稻)及其对应保持系等8种供试材料花粉发育过程中细胞内多糖物质进行了多光谱显微定量分析研究。取得如下实验结果:

关键词：多糖多光谱显微成像相对透光率花粉败育水稻雄性不育

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液态荧光原位杂交结合流式技术对异倍体间期细胞的检测

液态荧光原位杂交结合流式技术对异倍体间期细胞的检测

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：吴小艳金润铭华中科技大学附属协和医院儿科

【目的】我们建立了在培养的间期细胞溶液中利用荧光探针进行原位杂交技术(SolutionHybridization,SH),结合流式细胞仪对细胞的分析采集,能够敏感,准确,快速地俭测到遗传或肿瘤病变。【方法】在人类21三体细胞中,运用21q探针,在500个间...

【目的】我们建立了在培养的间期细胞溶液中利用荧光探针进行原位杂交技术(SolutionHybridization,SH),结合流式细胞仪对细胞的分析采集,能够敏感,准确,快速地俭测到遗传或肿瘤病变。【方法】在人类21三体细胞中,运用21q探针,在500个间期细胞中比较SH技术和传统的FISH方法;具有双倍体1q的肿瘤细胞系通过SH技术与1q—FITC探针杂交后,BD FACAria和Cyclomation MoFlo两种流式细胞仪分别对其信号进行检测;并进行稀释浓度实验(1:10,1:100,1:1,000 and 1:10,000),了解流式的灵敏度。【结果】SH技术和传统的FISH方法比较得到了相似的结果,流式细胞仪能够检测到SH杂交后的细胞信号,一系列稀释浓度和产生的荧光信号呈线性关系,流式的灵敏度至少在1:10,000。【结论】SH结合流式技术兼备了FISH的特异性和流式的定量及高效性,将极大地帮助临床对癌症的早期检测,化疗或骨髓移植后微小残留病的检测等。

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A novel mutation of PAX3 in a large Chinese family with Waardenburg syndrome I

A novel mutation of PAX3 in a large Chinese family with Waar...

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者： Juan Liu~1,Xiangfu Meng~2,Caixia Sun~2,Jingmin Wen~1,Yulei Li~3,Yong Gao~1,Xiangyang Zhang~1, Mugen Liu~1,Qing K Wang~(1,4),Jing Yu Liu~(1*) 1 Key Laboratory of Molecular Biophysics of the Ministry of Education,Center for Human Genome Research,College of Life Science and Technology,Huazhong University of Science and Technology, Wuhan,430074,China 2 Development of Neurology,Renmin Hospital of Xiajin,Xiajin,253000, China 3 Key Open Laboratory for Tissue Regeneration of Henan Universities,Department of Life Science and Technique,Xinxiang Medical University,Xinxiang,453003,China 4 Department of Molecular Cardiology,Lerner Research Institute,The Cleveland Clinic Foundation,Case Western Reserve University,44195,Cleveland,Ohio,USA

Waardenburg syndrome(WS) is a genetically heterogeneous disorder characterized by manifests with sensorineural deafness and pigmentation defects of the hair,skin,and iris.Waardenburg syndrome is classified into four types depending on the presence or absence of additional symptoms. Waardenburg syndrome type 1 WS,type 2 WS,Type 3 WS and Type 4 WS.WSl and 3 are due to mutations in the PAX3 gene.WS2 are associated with mutations of MITF,SNAI2,and SOX10,in addition,there are two loci,1p21-p13.3 and 8p23.WS4 can result from mutations in the endothelin-B receptor gene(EDNRB),and in the gene for its ligand,endothelin-3(EDN3).WSl and 2 are distinguished by the presence or absence of dystopia canthorum,respectively.WS3 is distinguished by the presence of limb abnormalities.WS4,referred to as Shah-Waardenburg syndrome or Waardenburg-Hirschsprung disease is characterized by the presence of an aganglionic megacolon.WS1, 2 and 3 are autosomal dominant disorder,whereas WS4 is autosomal recessive disorder.

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非同源末端连接机制在转基因斑马鱼胚胎的外源基因串连体形成及整合过程具有重要作用

非同源末端连接机制在转基因斑马鱼胚胎的外源基因串连体形成及整...

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：戴军胡炜崔小娟朱作言中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室

本文研究了转基因斑马鱼胚胎内转植基因串连体的形成和与宿主基因组整合的方式。我们构建了一个报告质粒并用7种双酶切组合移除CMV启动子和eGFP之间的插入片段,得到带有5’-、3’-或平端等不同形式末端组合的线性化DNA片段。将这些含不... 详细信息

本文研究了转基因斑马鱼胚胎内转植基因串连体的形成和与宿主基因组整合的方式。我们构建了一个报告质粒并用7种双酶切组合移除CMV启动子和eGFP之间的插入片段,得到带有5’-、3’-或平端等不同形式末端组合的线性化DNA片段。将这些含不同末端组合的线性DNA分别注射入斑马鱼受精卵中,由于其末端在受体内的修复和连接,eGFP得以表达而使转基因胚胎发出绿色荧光。我们对绿色荧光胚胎中分离得到的197个CMV与eGFP的连接处进行序列分析,发现转植基因间DSBs是通过NHEJ机制接合和修复,并以串联体形式整合到宿主基因组的。斑马鱼NHEJ复合体主要以末端碱基微同源性的模板引导型方式修复转植基因3’-3’末端组合的DSBs,,转植基因其它末端组合的DSBs则主要是依赖平末端直接连接、突出末端平端化后连接和连接后补平或切平方式实现修复。

关键词：转基因串联体整合双链断裂非同源末端连接

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Cloning and Characterization of a novel Mannanase from Paenibacillus sp.BME-14

Cloning and Characterization of a novel Mannanase from Paeni...

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者： Xiaoyu Fu~(12),Xiaoluo Huang~(12),Pengfu Liu~1,Ling Lin~1,Gaobing Wu~1,Chanjuan Li~1,Chunfang Feng~1, Yuzhi Hong~(2*) 1State Key Laboratory of Agricultural Microbiology,College of Life Science and Technology, Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,People’s Republic of China 2College of Plant Science and Technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,People’s Republic of China

A mannanase gene(man26B) was obtained from the sea bacterium,Paenibacillus sp.BME-14, through the constructed genomic library and inverse PCR.The gene of man26B had an open reading frame of 1428 bp that encoded a peptide of 475-amino acid residues with a calculated molecular mass of 53 kDa.Man26B possessed two domains,a carbohydrate binding module(CBM) belonging to family 6 and a family 26 catalytic domain(CD) of glycosyl hydrolases,which showed the highest homology to Cel44C of P.polymyxa(60%identity).The optimum pH and temperature for enzymatic activity of man26B were 4.5 and 60℃,respectively.The activity of Man26B was not affected by Mg and Co,but was inhibited by Hg,Ca,Cu,Mn,K,Na and β-Mercaptoethanol,and slightly enhanced by Pb and Zn.EDTA did not affect the activity of Man26B,which indicates that it does not require divalent ions to function.Man26B showed a high specific activity for LBG and konjac glucomannan,with K,V and k,values were 3.80 mg/ml,91.70μmol/min/mg protein and 77.08/s, respectively,being observed when LBG was the substrate.Furthermore,deletion of the CBM6 domain increased the enzymes stability while enabling it to retain 80%and 60%of its initial activity after treatment at 80℃and 90℃for 30min,respectively.This finding will be useful in industrial application of Man26B because of the harsh circumstances associated with such processes.

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Connexin mutation that causes dominant congenital cataracts inhibits channel and hemichannel function in a dominant negative manner

Connexin mutation that causes dominant congenital cataracts ...

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者： Yuanyuan Liu,Fang Zheng~*,Guohua Yang,Shuren Guo,Qiang Chen,Xin Zhou. 1.Center for Gene Diagnosis,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan,Hubei,430071,P.R. China 2.Department of Ophthalmology,Zhongnan Hospital,Wuhan University.Wuhan,Hubei,430071,P.R. China

The connexin(Cx) 50,S276F,mutation is associated with a human dominant congenital cataract;however,the underlying molecular mechanism has not been characterized.Fluorescent protein-tagged wild type Cx50 and Cx50S276F mutant and 1%triton X-100 solution was used to detect the localization and assembly of Cx50S276F in HeLa cells and human lens epithelial cells(HLE). Cx50S276F mutant was found to form gap junction-like plaques at the cell surface,without transportation,assembly,folding,and oligmerization problems.By using scrape loading dye transfer methods,we found Cx50S276F expressed in(HLE) failed to induce dye transfer,and prevented wild-type chCx50 from forming functional gap junctions.In contrast to its effect on gap junctions, Cx50S276F mutation has effect on hemichannel activity only in HeLa cells expressing S276F mutant when assayed using low extracellular-Ca induced dye uptake.In conclusion,this dominant congenital cataract-associated Cx50 mutation results non-functional connexin hemichannels and gap junctions in a dominant negative manner.

关键词： Cataract Connexin Gap junction Hemichannel Lens

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红莲型水稻杂种F1幼穗细菌双杂交文库的构建

红莲型水稻杂种F1幼穗细菌双杂交文库的构建

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：王坤胡骏魏欣朱英国武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室

为了深入研究红莲型水稻不育和育性恢复的分子机理,我们构建了红莲型水稻杂种F幼穗的细菌双杂交文库。用Trizol提取红莲型水稻杂种F幼穗的总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/XhoI接头,再用EcoRⅠ... 详细信息

为了深入研究红莲型水稻不育和育性恢复的分子机理,我们构建了红莲型水稻杂种F幼穗的细菌双杂交文库。用Trizol提取红莲型水稻杂种F幼穗的总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/XhoI接头,再用EcoRⅠ和XholI消化接头;形成两端分别带有EcoRⅠ和XhoI粘性末端的双链cDNA。经自制sephrose 4B凝胶过滤柱层析后,收集大于400bp以上的双链cDNA片段,将其连接到带有EcoRⅠ和XhoI末端的pTRG载体上,转化到XL1-Blue MRF′Kan感受态细胞后构建成红莲水稻幼穗细菌双杂交文库。经测定显示该原始文库容量为1.03*106 pfu/mL,扩增后文库的容量达到1.05*10pfu/mL,对随机挑取的100个克隆进行PCR鉴定,重组率为100%且97%的插入片段大于800bp。本实验希望通过构建红莲杂种F幼穗细菌双杂交文库,从而能够筛选红莲型CMS与育性恢复相关基因的互作分子,为进一步深入了解CMS以及育性恢复的分子机理搭建较好研究平台。

关键词：水稻幼穗细菌双杂交文库构建

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