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家蚕BmColⅣ α1基因的结构特征与表达谱分析

家蚕BmColⅣ α1基因的结构特征与表达谱分析

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中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会

作者：季明明鲁延军甘丽萍牛艳山司马杨虎徐世清现代丝绸国家工程实验室苏州大学医学部应用生物学系

线虫emb-9基因和let-2基因分别编码Ⅳ型胶原蛋白质（ColⅣ）α1链和α2链,两者的Gly-X-Y重复区域氨基酸残基的突变能引起胚胎期温敏性致死。本文利用网络公共数据库资源,结合RACE技术和生物信息学方法,从家蚕克隆和分析了线虫let-2基因... 详细信息

线虫emb-9基因和let-2基因分别编码Ⅳ型胶原蛋白质（ColⅣ）α1链和α2链,两者的Gly-X-Y重复区域氨基酸残基的突变能引起胚胎期温敏性致死。本文利用网络公共数据库资源,结合RACE技术和生物信息学方法,从家蚕克隆和分析了线虫let-2基因的同源基因（BmColⅣα1）。BmColⅣα1基因全长6583bp（Genbank:EU183410）,含4个外显子,cDNA全长3847bp（Genbank登录号:EU183409）,最大ORF2460bp（694nt-3153nt）,编码820个氨基酸残基,理论分子量82.1K,等电点6.43。BmColⅣα1蛋白质有2个胶原蛋白保守区和9个PFAM结构域,跨膜区域分析和亚细胞定位分析显示为细胞外分泌型蛋白质。基因电子表达谱分析结果表明,BmColⅣα1基因在家蚕脂肪体、卵巢、精巢、血细胞、翅原基、上颌骨突起物、滤泡细胞、复眼、大脑等组织中均有表达,以脂肪体和血细胞中表达量最大。蛋白质同源性分析和分子进化分析结果,BmColⅣα1与果蝇、蜜蜂和冈比亚按蚊中的ColⅣα1亲缘关系最近,所以命名为Ⅳ型胶原α1链基因（BmColⅣα1）。从家蚕胚胎温敏性致死系统（sch）蚕卵中克隆的BmColⅣα1基因存在8个SNP位点,分别为T242A、T279A、T556C、C675T、T1343C、A1463G、T1574C和K2014T,其中5个SNP位点引起氨基酸的改变,分别为L81Q、S186P、L448S、Q488R、V525A和G672W,分子建模分析结果,其中L81Q、S186P、L448S、Q488R和V525A5个氨基酸残基突变位于蛋白质的4个三倍螺旋重复片段。

关键词：家蚕 Ⅳ型胶原蛋白质基因温敏致死生物信息学

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家蚕第27连锁群的形态性状标记基因——新绿茧（Gn）

家蚕第27连锁群的形态性状标记基因——新绿茧（Gn）

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中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会

作者：代方银童晓玲胡海李涛乔梁伴野丰鲁成向仲怀西南大学生物技术学院蚕学与系统生物学研究所重庆大学农学及生命科学研究院日本九州大学家蚕基因资源研究中心

已研究报道的支配绿色茧的基因有2个互补绿茧基因即Ga（基因座至今不明）、Gb（7-7.0）和1个独立起作用的基因Gc（15-?）。Gc单独存在时,纯合体或杂合体都能结淡绿色茧;而Ga和Gb必须二者同时存在,蚕才能结淡绿色茧。我们从表型、遗传及... 详细信息

已研究报道的支配绿色茧的基因有2个互补绿茧基因即Ga（基因座至今不明）、Gb（7-7.0）和1个独立起作用的基因Gc（15-?）。Gc单独存在时,纯合体或杂合体都能结淡绿色茧;而Ga和Gb必须二者同时存在,蚕才能结淡绿色茧。我们从表型、遗传及来源几方面考察,新发现了2个独立起作用的绿色茧基因,命名为绿茧d（Greend,Gd）和新绿茧（Newgreen,Gn）。遗传分析实验结果表明,Gd和Gn均为显性遗传。对Gn进行连锁分析,结果表明:Gn不仅与Gc所在的第15连锁群的标记基因——眼纹全黑（bl）独立,说明Gn与过去报到的属于该连锁群的Gc在遗传上是独立的,而且发现Gc与其他连锁群的标记基因间均为独立遗传,代表着新的连锁群信息,推测属于至今没有发现突变基因的第27染色体（第27连锁群）。我们组配杂交组合,用家蚕微卫星（SSR）分子连锁图上的标记对Gn进行连锁分析,发现了与Gn连锁的分子标记。进一步将与Gn连锁的分子标记与家蚕全基因组精细图序列进行比对,从基因组水平证明了Gn属于家蚕第27染色体。家蚕有28对同源染色体,近些年伴野丰等多位学者相继证明原家蚕经典连锁遗传图的第24和27连锁群上的基因间具有连锁关系,属于同一连锁群,对应于同一染色体,因而第27连锁群是空白。本研究发现并证明Gn是27连锁群的代表基因,填补了家蚕经典连锁图谱第27连锁群突变基因的空白。这是家蚕经典连锁图谱研究攻坚完善阶段的突破性进展。

关键词：家蚕新绿茧遗传连锁第27连所群

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利用分子标记技术对家蚕亲缘关系及杂种优势的研究

利用分子标记技术对家蚕亲缘关系及杂种优势的研究

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中国蚕学会第六届青年学术研讨会

作者：蔡明文姜振司马杨虎徐世清现代丝绸国家工程实验室苏州大学医学部应用生物学系

＜正＞家蚕（Bombyx mori.L）既是鳞翅目昆虫的模式昆虫,又是重要的经济动物,其品种资源丰富,品种间的遗传关系复杂,传统的家蚕分类方法一直是以形态学标记为依据的,对于基因型的准确鉴定较为困难。近年来,DNA分子标记技术的迅速发展,... 详细信息

＜正＞家蚕（Bombyx mori.L）既是鳞翅目昆虫的模式昆虫,又是重要的经济动物,其品种资源丰富,品种间的遗传关系复杂,传统的家蚕分类方法一直是以形态学标记为依据的,对于基因型的准确鉴定较为困难。近年来,DNA分子标记技术的迅速发展,为家蚕品种间的亲缘关系分析提供了途径。家蚕品种主要以一代杂交种用以生产,因此杂交效果的分析和预测也就显得日益重要。传统的配合力测定方法不仅费时费力,而且受环境影响大,从而影响育种效率和效果。因而找到一种合适的预测杂种优势的方法迫在眉睫,对家蚕杂种优势的充分利用具有重要的意义。利用分子标记方

关键词：家蚕 RAPD SSR 亲缘关系杂种优势

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七种微孢子虫核糖体小亚基基因（SSU rRNA）的克隆及其系统发育分析

七种微孢子虫核糖体小亚基基因（SSU rRNA）的克隆及其系统发育分...

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中国蚕学会第六届青年学术研讨会

作者：董世楠朱峰徐莉沈中元江苏科技大学生物与环境工程学院农业部蚕桑遗传改良重点开放实验室中国农业科学院蚕业研究所

对家蚕微粒子虫镇江株（Nosema bombycis Zhenjiang）、柞蚕微孢子虫（Nosema antheraeae）、棉铃虫微孢子虫（Nosema heliothidis）、从菜粉蝶（Pieris rapae）分离的微孢子虫、从蓝叶虫（Phyllobrotica armta）分离的微孢子虫、从桑... 详细信息

对家蚕微粒子虫镇江株（Nosema bombycis Zhenjiang）、柞蚕微孢子虫（Nosema antheraeae）、棉铃虫微孢子虫（Nosema heliothidis）、从菜粉蝶（Pieris rapae）分离的微孢子虫、从蓝叶虫（Phyllobrotica armta）分离的微孢子虫、从桑尺蠖（Hemerophila atrilineata）分离的微孢子虫以及从家蚕分离的微孢子虫的SSU rRNA基因进行PCR扩增、克隆和测序,得到该7种微孢子虫的SSU rRNA基因的全序列。采用Phylip软件的邻位相连法（Neighbour-Joining）和MEGA4.0软件的UPGMA法,以微孢子虫的SSU rRNA基因序列构建系统发育树,通过对新微孢子虫的聚类分析,以及基因长度、G+C含量、相似性和分化度等方面的分析,确定了4种新分离的微孢子虫的分类地位。研究结果表明,从菜粉蝶分离的微孢子虫、从蓝叶虫分离的微孢子虫和从桑尺蠖分离的微孢子虫与微粒子属（Nosema）微孢子虫较近,因此,将这3种微孢子虫归为Nosema属,暂分别定名为Nosema ***、Nosema ***、Nosema ***;从家蚕中分离的微孢子虫与内网虫属（Endoreticulatus）微孢子虫关系相近,将其归为Endoreticulatus属,暂定名为Endoreticulatus ***。研究结果同时显示,用微孢子虫的SSU rRNA基因分析微孢子虫的进化关系及其分类地位是可行的。

关键词：微孢子虫 SSU rRNA基因系统发育分析分类地位

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蓖麻蚕微孢子虫（Nosema philosamiae）核糖体基因全序列的克隆及系统进化分析

蓖麻蚕微孢子虫（Nosema philosamiae）核糖体基因全序列的克隆及...

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中国蚕学会第六届青年学术研讨会

作者：朱峰董世楠徐莉沈中元江苏科技大学生物与环境工程学院中国农业科学院蚕业研究所农业部蚕桑遗传改良重点开放实验室

基于丰富蓖麻蚕微孢子虫分子生物学信息的目的,用特异性PCR方法扩增克隆了其核糖体基因全序列,全长4314bp。包括核糖体大亚基基因（LSUrRNA）2497bp,内转录间隔区（ITS）188bp,核糖体小亚基基因（SSUrRNA）1232bp,基因间隔区（IGS）282b... 详细信息

基于丰富蓖麻蚕微孢子虫分子生物学信息的目的,用特异性PCR方法扩增克隆了其核糖体基因全序列,全长4314bp。包括核糖体大亚基基因（LSUrRNA）2497bp,内转录间隔区（ITS）188bp,核糖体小亚基基因（SSUrRNA）1232bp,基因间隔区（IGS）282bp和5S区域115bp。研究结果同时表明,蓖麻蚕微孢子虫与家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）、斜纹夜蛾微孢子虫（Nosema spodopterae）和柞蚕微孢子虫（Nosema antheraeae）具有相同的核糖体基因排列顺序,即:5’-LSU-ITS-SSU-IGS-5S-3’。经同源性及系统发育分析结果表明,蓖麻蚕微孢子虫与微粒子属（Nosema）模式种***有着很近的亲缘关系,进一步从分子生物学的角度上证实蓖麻蚕微孢子虫归属于Nosema属。本研究通过对蓖麻蚕微孢子虫核糖体基因全序列的克隆以及系统发育分析,为蓖麻蚕微孢子虫分类地位的确定、检测诊断技术的建立,以及与其它微孢子虫的亲缘关系等奠定了一定的基础。

关键词：蓖麻蚕微孢子虫核糖体基因相似性分化度系统进化分析

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Establishment and Characterization of an Ovarian Cell Line of the Silkworm,Bombyx mori

Establishment and Characterization of an Ovarian Cell Line o...

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中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会

作者： Min-Hui Pan Xiu-Juan Cai Min Liu Jun L v Hui Tang Juan Tan Cheng Lu (The Key Sericultural Laboratory of Agricultural Ministry Southwest University Chongqing 400716 China)

A cell line BmN-SWU1 was established from the ovarian tissues of 3-day-old fourth instar Bombyx mori larvae of the 21-872nlw variety by performing primary cultures in Grace’s medium supplemented with 20% fetal bovine serum （FBS）. The cell line primarily consisted of short spindle cells and round cells. The frequency of cells with chromosome number 2n = 56 was 80.5%;therefore, the cell line was considered to be a diploid cell line. The population-doubling time （PDT） at 45th passage line was 57.7 h. This cell line was susceptible to the *** nuclear polyhedrovirus （BmNPV）, and the median tissue culture infective dose （TCID50） at a cell density of 105 cells/ml was 16.3 OBs/ml. The transient expression efficiency of the green fluorescent protein （GFP） gene in this cell line was 54.8%. We used the BmN-SWU1 cell line to select and establish a GFP transgenic cell line.

关键词： Bombyx mori ovarian cell line growth curve BmNPV infection transgenic cell line

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The roles of BmSRF gene in patterning the wing of silkworm,Bombyx mori

The roles of BmSRF gene in patterning the wing of silkworm,B...

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中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会

作者： X.-L.Tong1 2 F.-Y.Dai2 j.Chen2.L Qiao2.Z.Zhang1 2 Q.-Y.Xia1 2 C.Lu2 and Z.-H.Xiang2 1 Institute of Agriculture and Life Science Chongqing University Chongqing 400030 China 2 College of Biotechnology Institute of Sericulture and System Biology Southwest University Chongqing 400716 China

Serum response factor（SRF） is an ancient and evolutionarily conserved member of the MADS box family of transcriptional regulators that regulates a wide range of genes involved in cell growth,migration,cytoskeletal organization,and ***,we isolated the homolog of the vertebrate SRF in silkworm,Bombyx mori,referred to as *** of expression profiles showed that BmSRF was widely expressed in silkworm tissues,including the ovary,testis,head,midgut,fat body,wing disc,middle（MSG）,and posterior（PSG） silk glands,but we didn’t detected its expression in anterior（ASG）,epiderm,malpighian tubule and *** the wing development stage from the 5th instar larva to the first day adult,the BmSRF gene expressed persistently and exhibited the expression peak at the onset of the *** examine the function of BmSRF in the wing development of silkworm,we performed gene silencing by injected the BmSRF dsRNAs into wing disc on the first day of 5th instar（V1）,and then the treated silkworms were reared under standard conditions and developed to *** of the adults treated by the BmSRF dsRNA showed abnormal phenotype which exhibit additional veins and blister on the ***,more sockets and scales were present on the wings in the abnormal *** phenomenon may be resulted from the increased *** is well known that the tracheae which are scabbarded in the veins can transport the oxygen,and the oxygen has been shown to play a key role in the formation of *** conclusion,our results demonstrated that BmSRF plays an important role during wing development in *** silencing of BmSRF expression in silkworm produced additional veins and blistered wings.

关键词： BmSRF Bombyx mori expression pattern RNA interference

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