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马传染性贫血病毒LTR在驴胎皮肤细胞中的基因进化及启动子活性比较

马传染性贫血病毒LTR在驴胎皮肤细胞中的基因进化及启动子活性比较

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：全滟平韩秀娥沈楠赵立平周建华沈荣显相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室

将EIAV驴白细胞弱毒疫苗株在驴胎皮肤细胞中连续传代,分别提取第13、18、21、23、26代病毒培养物的前病毒DNA,以LTR特异性引物PCR扩增前病毒LTR,并进行克隆及测序分析。与本实验室已测定的驴白细胞毒株LTR的序列比较发现,驴胎皮肤细胞毒... 详细信息

将EIAV驴白细胞弱毒疫苗株在驴胎皮肤细胞中连续传代,分别提取第13、18、21、23、26代病毒培养物的前病毒DNA,以LTR特异性引物PCR扩增前病毒LTR,并进行克隆及测序分析。与本实验室已测定的驴白细胞毒株LTR的序列比较发现,驴胎皮肤细胞毒株LTR的U3负调节区出现大段的插入、点突变、缺失,U3增强子区变异较小。将LTR片段插入到pCAT-basic载体CAT报告基因前,瞬时转染驴胎皮肤细胞,通过检测CAT表达量来评价LTR的启动子活性。驴胎皮肤细胞毒株LTR的启动子活性随着病毒传代次数的增加而逐渐增强,而驴白细胞弱毒株LTR的启动子活性很低。

关键词：马传染性贫血病毒 LTR 基因进化启动子活性

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新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：郭巍闫妍王英原刘霓虹戴伶俐李雪峰赵立平张春生贺磊周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室慢病毒及马病课题组新疆动物卫生监督所

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马... 详细信息

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马流行性感冒病毒北美洲流行株的同源性较高,命名为:A/equine/XinjiangFuyun/3/2007(H3N8)。

关键词：马流行性感冒流感病毒 H3N8

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A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析

A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力东北农业大学生命科学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

参考GenBank中发表PRV OSU毒株VP6序列ORF两端保守区,设计1对特异引物,以PRV JS株反转录cDNA为模板,通过PCR方法获得约113kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:获得了VP6的1320bp全基因序列;将其ORF与国内外9... 详细信息

参考GenBank中发表PRV OSU毒株VP6序列ORF两端保守区,设计1对特异引物,以PRV JS株反转录cDNA为模板,通过PCR方法获得约113kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:获得了VP6的1320bp全基因序列;将其ORF与国内外9株PRV VP6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较,核苷酸同源性在77.11%～91.11%之间,氨基酸的同源性在89.17%～99.15%之间;在氨基酸系统发育进化树中,JS毒株与A131、OSU、CN86毒株亲缘关系较近,为一个进化群。

关键词： PRV VP6基因序列分析

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鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：王永强祁小乐高宏雷高玉龙宇文延青林欢秦立廷宋修庆王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒基因组设计了一对针对病毒VP5基因的引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测鸡传染性法氏囊病病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体... 详细信息

根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒基因组设计了一对针对病毒VP5基因的引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测鸡传染性法氏囊病病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在106～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可敏感地检测初始模板中30个拷贝的病毒核酸,其灵敏度是常规RT-PCR检测方法的100倍。该方法不与其它的禽源病毒发生非特异性反应,并且具有良好的重复性。该方法为鸡传染性法氏囊病病毒的定性定量检测提供了有力的工具。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒荧光定量RT-PCR TaqMan水解探针

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3株不同年代H9N2亚型禽流感病毒HA基因差异分析

3株不同年代H9N2亚型禽流感病毒HA基因差异分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：王金良沈志强李峰刘吉山管宇曲光刚唐娜山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司

对3株同一地区不同年代H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增,PCR产物纯化后送出测序。测序结果表明:所扩增的HA基因全长1683bp,编码560个氨基酸;3个毒株的裂解位点的氨基酸序列为R-S-S-R,属于低致病力毒株;分离株氨基酸推倒序列... 详细信息

对3株同一地区不同年代H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增,PCR产物纯化后送出测序。测序结果表明:所扩增的HA基因全长1683bp,编码560个氨基酸;3个毒株的裂解位点的氨基酸序列为R-S-S-R,属于低致病力毒株;分离株氨基酸推倒序列分析发现均存在7个潜在糖基化位点,受体结合位点为禽源性流感病毒特异性序列,左侧壁氨基酸均为NGQQG,右侧壁均为GTSKA。与一些参考毒株的HA基因序列进行比较分析表明分离株与参考株核苷酸与氨基酸同源率均较高,进化树分析表明3个毒株均属欧亚种系,与A/duck/Hong Kong/Y280/97代表株亲源关系较近。

关键词：禽流感病毒血凝素基因序列分析

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封闭带毒素ΔG功能片段促进H5N1亚型禽流感粘膜免疫的佐剂活性研究

封闭带毒素ΔG功能片段促进H5N1亚型禽流感粘膜免疫的佐剂活性研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：焦玉萍谢青梅陈峰马静云曹永长毕英佐华南农业大学动物科学学院中山大学生命科学学院

本研究扩增了霍乱弧菌封闭带毒素ZOT基因编码264～399氨基酸残基的C末端ΔG功能片段,插入表达质粒pBCX,构建了表达ΔG片段的融合蛋白表达载体pBCXG。将重组质粒转入表达菌BL21(DE3)中,在终浓度1mmol/LIPTG诱导下进行表达,表达的融合蛋白... 详细信息

本研究扩增了霍乱弧菌封闭带毒素ZOT基因编码264～399氨基酸残基的C末端ΔG功能片段,插入表达质粒pBCX,构建了表达ΔG片段的融合蛋白表达载体pBCXG。将重组质粒转入表达菌BL21(DE3)中,在终浓度1mmol/LIPTG诱导下进行表达,表达的融合蛋白ΔG分子量约为45ku。用50%Ni-NTA蛋白纯化树脂以非变性方法纯化融合蛋白ΔG,获得了纯度较高的蛋白ΔG。融合蛋白ΔG与H5N1亚型禽流感(AIV)联合通过滴鼻免疫途径免疫SPF鸡,结果表明:pBCX-ΔG融合蛋白起到了很好的粘膜免疫佐剂作用,且1?g/mL高剂量添加组的免疫增强效果更明显。

关键词：霍乱弧菌封闭带毒素 ΔG-片段粘膜免疫活性

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抗CD22人源基因工程多价微型抗体在重组杆状病毒中的表达及纯化

抗CD22人源基因工程多价微型抗体在重组杆状病毒中的表达及纯化

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：马玲邵帅潘汉世陈凤莲黄红梅吴健敏广西兽医研究所

探讨抗CD22人源化基因工程多价微型抗体在杆状病毒表达系统中的表达。构建含有抗CD22人源化基因工程多价微型抗体基因的重组杆状病毒表达质粒pAcSG2-CH3,并在Sf9细胞中表达。通过对表达产物进行PCR和免疫荧光反应鉴定,证实获得了可以稳... 详细信息

探讨抗CD22人源化基因工程多价微型抗体在杆状病毒表达系统中的表达。构建含有抗CD22人源化基因工程多价微型抗体基因的重组杆状病毒表达质粒pAcSG2-CH3,并在Sf9细胞中表达。通过对表达产物进行PCR和免疫荧光反应鉴定,证实获得了可以稳定表达抗CD22人源化基因工程多价微型抗体的重组杆状病毒并通过空斑试验纯化病毒,其中一株纯化病毒的滴度达到4.5×107pfu/mL;结论杆状病毒表达系统能够很好的表达抗CD22人源化基因工程多价微型抗体分子,这就为这治疗白血病药物的开发和应用打下了基础。

关键词： CD22 人源化基因工程多价微型抗体重组杆状病毒蛋白表达

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几种猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫效力比较

几种猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫效力比较

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：陈瑞爱裴仉福田克恭遇秀玲陈春燕叶健聪广东大华农动物保健品有限公司中国动物疫病预防控制中心

为了评价应用高致病性猪蓝耳病JXA1株研制的猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的免疫效力,我们引进了国外某公司PRRS活疫苗、并与国内甲公司猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗(CH-1R株)、乙公司猪繁殖与呼吸综合征活疫苗CH-1R株进行了免疫保护对... 详细信息

为了评价应用高致病性猪蓝耳病JXA1株研制的猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的免疫效力,我们引进了国外某公司PRRS活疫苗、并与国内甲公司猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗(CH-1R株)、乙公司猪繁殖与呼吸综合征活疫苗CH-1R株进行了免疫保护对比试验。经对注苗猪的局部反应、抗体检测、攻毒后的临床症状、剖检病变分离结果表明,我们研制的高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1株)与国内甲公司猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗(CH-1R株)的免疫效果基本相同,均优于进口某公司生产的活疫苗和国内乙公司生产的猪繁殖与呼吸综合征活疫苗CH-1R株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫效力

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TGEV-PEDV-PRV基因芯片探针的构建

TGEV-PEDV-PRV基因芯片探针的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：邓俊花尹燕博陈静单虎杨瑞梅秦晓冰黄绢莱阳农学院动物科技学院山东省畜牧兽医总站

将TGEV、PEDV、PRV接种PK15细胞观察细胞病变,将细胞反复冻融三次收获病毒,并对病毒增值纯化。根据GenBank中已发表各病毒基因序列设计特异性引物,以病毒RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出TGEV-S、PEDV-M、PRV-VP6基因,相应的片段分别长410b... 详细信息

将TGEV、PEDV、PRV接种PK15细胞观察细胞病变,将细胞反复冻融三次收获病毒,并对病毒增值纯化。根据GenBank中已发表各病毒基因序列设计特异性引物,以病毒RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出TGEV-S、PEDV-M、PRV-VP6基因,相应的片段分别长410bp、501bp、432bp。将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体上,经蓝白斑筛选出阳性克隆进行序列测定。用DNAStar工具将其与GenBank上标准代表毒株序列进行了比较。结果显示:通过RT-PCR扩增出TGEV-S、PEDV-M、PRV-VP6基因,所选基因特异性很强,通过序列分析,同源性分别高达96.1%、97.4%、85%,具有高度保守性,表明可以作为芯片探针应用到基因芯片的制备。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪轮状病毒(PRV) S基因 M基因 VP6基因 RT-PCR 克隆序列分析基因芯片探针

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兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果

兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：王芳胡波任雪枫范志宇杨龙圣徐为中张则斌何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所江苏省动物疫病预防控制中心

用RT-PCR方法扩增兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60基因,通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid-VP60,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-VP60,经RT-PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blot、HA和HI鉴定,结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下,用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔,结果显示,免疫后21d,兔体内可产生抗RHDV抗体,抗体血凝抑制效价在26～27之间,该抗体可以抵抗血凝效价为210致死剂量RHDV强毒的攻击,本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白杆状病毒表达系统重组杆状病毒表达免疫

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