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CB1介导△9-THC抑制CA1区LTD的作用

CB1介导△9-THC抑制CA1区LTD的作用

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：杨红卫三峡大学医学院

四氢大麻酚（Δ-tetrahydrocannabinol,Δ-THC）是桑科植物大麻（marijuana）的主要活性成分,通过作用于中枢神经系统的大麻素受体1（cannabinoid receptor 1,CB1）起作用。长时程抑制（long-term depression,LTD）与长时程增强（long-term potentiation,LTP）同样是一种与学习与记忆有关的活动依赖性突触可塑性变化的形式。内源性大麻素通过与G-蛋白藕联的CB1受体的激活促进记忆和突触的可塑性。研究表明Δ-THC对伏隔核或外侧杏仁核区电刺激诱导的LTD起阻断和抑制作用,然而急性给予Δ-THC是如何影响海马CA1区LTD尚不清楚。本研究在小鼠腹腔注射Δ-THC（10mg/kg）或CB1受体的选择性抑制剂SR141716（SR,5mg/kg）24h后制备海马脑片,在海马CA1区记录场电位EPSP和在全细胞钳制下记录膜的基本特性和放电频率,拟观察Δ-THC在海马CA1区LTD中的作用及CB1是否介导其效应。结果发现:①给予低频电刺激（1Hz 15min）诱导CA1区LTD,Δ-THC可显著降低LTD。②Δ-THC并不改变海马CA1区基本的突触传递和膜的兴奋性（包括膜电位、输入阻抗及放电特性）。③Δ-THC显著降低LTD的效应可被CB1的选择性抑制剂SR所翻转。④在CB1基因敲除的小鼠,Δ-THC对LTD的效应与溶剂对照组相比无统计学差异。上述结果表明CB1受体介导Δ-THC抑制离体海马CA1区LTD的作用。

关键词： CB1 四氢大麻酚 LTD LTP

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胚内注射雌马酚对肉鸡甘油三脂和胆固醇代谢的影响

胚内注射雌马酚对肉鸡甘油三脂和胆固醇代谢的影响

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：倪迎冬魏晓静张春晓钟远赵茹茜南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

采用鸡胚内注射雌马酚(equol,Eq)的方法,探讨其对肉鸡甘油三酯及胆固醇代谢的影响。选取蛋重相近的三黄肉鸡种蛋585枚,随机分为三组:蛋清内注射100μL白油乙醇混合溶剂(对照组,Con);处理组分别注射100μL 0.2mg/mL(低剂量组,L)和1mg/mL... 详细信息

采用鸡胚内注射雌马酚(equol,Eq)的方法,探讨其对肉鸡甘油三酯及胆固醇代谢的影响。选取蛋重相近的三黄肉鸡种蛋585枚,随机分为三组:蛋清内注射100μL白油乙醇混合溶剂(对照组,Con);处理组分别注射100μL 0.2mg/mL(低剂量组,L)和1mg/mL(高剂量组,H)的雌马酚,出雏后按同一标准化饲养方式饲养,49日龄时采集血清和肝脏样品。血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)采用生化检测试剂盒测定,参与肝脏脂肪代谢与胆固醇代谢的关键基因mRNA表达丰度采用Real-time RT-PCR方法检测。结果表明:胚内注射Eq降低49日龄肉鸡血清中TG水平,尤其对雌鸡的影响显著,并呈现出剂量依赖性降低效应。与Con组相比,Eq组雌性肉鸡血清总TC含量显著升高,主要表现在HDLC的显著升高上。RT-PCR结果显示:L组和H组雌鸡血清TG含量的显著降低与肝脏乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-coA carboxylase-α,ACC-α)、肉碱脂酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase,CPT-I)和载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)mRNA表达显著上调,以及脂肪酸合成酶(fattyacid synthase,FAS)mRNA表达的显著下调有关。而肝脏中参与胆固醇代谢的关键酶HSMG、CYP7A1 mRNA表达无显著变化。

关键词：甘油三酯胆固醇雌马酚肉鸡

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中国林蛙(Rana chensinensis)皮肤抗菌肽基因和功能多样性研究

中国林蛙(Rana chensinensis)皮肤抗菌肽基因和功能多样性研究

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：尚德静白冰李晓帆付欣郑俊杰辽宁师范大学生命科学学院辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室日本宝生物大连公司大连经济技术开发区

两栖动物是从水生动物进化到陆生动物的过渡物种,多样的生存环境使其在长期的自然选择过程中进化形成了防御机制,即依靠皮肤分泌出大量分子结构特殊、功能复杂多样的抗菌肽来抵御外来侵入物。抗菌肽由基因编码,核糖体合成,一般由10—50... 详细信息

两栖动物是从水生动物进化到陆生动物的过渡物种,多样的生存环境使其在长期的自然选择过程中进化形成了防御机制,即依靠皮肤分泌出大量分子结构特殊、功能复杂多样的抗菌肽来抵御外来侵入物。抗菌肽由基因编码,核糖体合成,一般由10—50个氨基酸残基组成,带正电荷,并能形成两性α螺旋结构。各种两栖动物产生的抗菌肽一级结构差异巨大。在科,属,种甚至亚种之间,抗菌肽在分子量,氨基酸组成,带电性,疏水性,空间结构和抗菌活性等方面均有不同。目前,在不同物种间从未发现过相同的抗菌肽。本文以中国林蛙（Rana chensinensis）为代表性物种,揭示了两栖类皮肤抗菌肽丰富的分子多样性。我们在中国林蛙皮肤中已发现3类不同的抗菌肽、缓激肽、缓激肽相关肽、抗癌肽和蛋白酶抑制剂等。并根据Rana属皮肤抗菌肽信号肽末端保守序列设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术,从中国林蛙皮肤中获得196条不同的抗菌肽序列,共编码53种不同的抗菌肽前体。基因结构分析发现,中国林蛙皮肤抗菌肽表达和功能具有高度多样性的特点。抗菌肽为多基因家族,序列高度同源,可编码出相似的一类抗菌肽。不同抗菌肽基因转录后的剪切方式不同,甚至编码同一抗菌肽的多基因座位也可能经历不同的剪切过程,这两点是抗菌肽表达多样性的主要原因。抗菌肽分子多样性及其形成机制揭示了在多样的生态条件下,两栖类皮肤抗菌肽环境适应的分子基础及生物合成的调控机制。两栖类皮肤功能基因组具有多样性丰富、快速重组突变的特征,是探讨生物适应的基因基础、基因形成机制和进化特性等生物学基本问题的优秀模型。

关键词：林蛙抗菌肽功能多样性

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Sequencing,Sequencing and Sequencing

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：王俊 Beijing Genomics Institute at Shenzhen

Breathtaking progress in DNA sequencing technology has made the costs dropping and throughput increasing in a lighting *** more organisms including human sequenced,flood of genetic data is being generated worldwide every *** in genomics has been moving incrementally due to this revolution in sequencing *** a reference genome for certain organism becomes mundane and more different strains are now being sequenced to discover the variations related to certain trait in that *** the same time,large scale studies in exomics,metagenomics, epigenomics,and transcriptomics all become realistic suddenly.

关键词： Sequencing,Sequencing and Sequencing

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Hes基因在神经干细胞发育中的作用

Hes基因在神经干细胞发育中的作用

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：伍亚民刘媛王正国第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

Hes基因属于碱性螺旋-环-螺旋基因(basic helix-loop-helix,bHLH)家族的一类成员。最近的研究发现bHLH基因由于在神经干细胞(neural stem cell,NSC)的分化过程中发挥着关键的作用,因此对发育过程中脑组织的大小、形状以及脑结构的完整... 详细信息

Hes基因属于碱性螺旋-环-螺旋基因(basic helix-loop-helix,bHLH)家族的一类成员。最近的研究发现bHLH基因由于在神经干细胞(neural stem cell,NSC)的分化过程中发挥着关键的作用,因此对发育过程中脑组织的大小、形状以及脑结构的完整性具有重要的调控作用。Hes基因是抑制性的bHLH基因。其结构特征为在氨基酸的末端具有一个保守的碱性螺旋-环-螺旋结构域,以及在碱性结构区域具有一个脯氨酸残基,同时还具有一个蛋白与蛋白之间发生特异性作用的ORANGE结构域。Hes因子的另一个结构特征是羧基末端的Trp-Arg-Pro-Trp序列(即WRPW区域)。辅抑制因子TLE/Grg,果蝇Groucho同源物,可与WRPW结构区域相互作用,并使组蛋白脱乙酰基酶聚集,而导致染色体转录过程失活。在发育的过程中,当缺乏抑制性的Hes基因,激活的bHLH基因会上调,NSC就只有过早地分化为神经元,而导致其它种类神经细胞的缺失。而Hes基因的错误表达却引起胶质细胞的大量增加,说明抑制性的bHLH基因可促进神经胶质形成。Hes基因的表达是受到Notch通路的调节,而最初的表达却不依赖于Notch信号通路。随着发育阶段的变化,NSC生物学功能的变化可能是由于NSC内表达的系列转录因子发生了变化。深入研究当时各阶段基因表达变化的机制对了解NSC的基本特性是非常必要的。

关键词： Hes基因神经干细胞发育

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CD9在日本七鳃鳗免疫中作用的初探

CD9在日本七鳃鳗免疫中作用的初探

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：苏鹏吴芬芳宋德利李默刘欣李庆伟海洋生物功能基因与蛋白质组学研究所

目的通过检测日本七鳃鳗中CD9的基因水平上免疫前后的变化,来初探CD9在日本七鳃鳗免疫中发挥的作用。制备抗CD9的抗体,为以后检测以及从蛋白水平上分析CD9在七鳃鳗中发挥的免疫学方面的作用打下良好的基础。方法设计CD9引物,利用反转录... 详细信息

目的通过检测日本七鳃鳗中CD9的基因水平上免疫前后的变化,来初探CD9在日本七鳃鳗免疫中发挥的作用。制备抗CD9的抗体,为以后检测以及从蛋白水平上分析CD9在七鳃鳗中发挥的免疫学方面的作用打下良好的基础。方法设计CD9引物,利用反转录技术获得CD9的cDNA片段,插入PET-32a表达载体上,并将重组质粒转入RosettaBlue细胞中进行原核表达,得到CD9蛋白,并采用镍亲和层析的方法对CD9进行纯化,得到纯化的CD9蛋白;饲养新西兰兔,制备抗CD9的多克隆抗体;应用流式细胞仪来检测之前制备的抗CD9的抗体与亲本的抗原的结合情况;利用Real time PCR技术来检测CD9在七鳃鳗9种不同组织中的分布情况以及免疫前后其各组织中表达量的变化。结果成功构建出CD9的原核表达载体。首次成功制备出了兔抗七鳃鳗的高效价多克隆抗体。经过流式细胞仪的检测,之前所制备抗CD9抗体能够成功的识别亲本性抗原。Real time PCR的检测结果显示,在免疫后的CD9在不同组织中的含量均明显要高于免疫前的含量,其中心脏和卵子中的CD9表达差异性尤为的显著。结论CD9在七鳃鳗的免疫作用中扮演着其中一个重要的角色。

关键词： CD9 多克隆抗体日本七鳃鳗

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鱼类Kisspeptin和GnIH基因起源、进化与功能研究

鱼类Kisspeptin和GnIH基因起源、进化与功能研究

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：张勇李水生刘云刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室

研究表明,新型的神经内分泌因子kisspeptin与GnIH(gonadotropin-inhibitoryhormone)对哺乳动物的生殖轴起着直接而相反的调控作用,Kisspeptin刺激GtH(gonadotropin)的合成与释放,而GnIH抑制GtH的合成与释放。然而,在鱼类中,相关报道甚少。本研究利用比较基因组学技术,通过同线性分析结合分子生物学手段,在斑马鱼、金鱼中克隆得到了kisspeptin(kiss1、kiss2)与GnIH基因的cDNA序列。氨基酸序列同源比对结果显示:在脊椎动物中,kisspeptin的核心肽相对保守,而GnIH的核心肽在不同物种中则有较大的差异。比较基因组分析显示kisspeptin与GnIH基因在鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类都维持着保守的同线性结构;并且,同线性的结果表明,鱼类kiss1与kiss2基因来源于早期的基因组复制,在漫长的进化过程中,哺乳类丢失了kiss2基因。通过配体受体结合实验,证明两种kisspeptins均能激活其相关受体GPR54(GPR54a、GPR54b),启动下游通路,但却存在一定的配体-受体选择性差异。金鱼、斑马鱼组织表达模式研究显示:kisspeptins与GnIH在生殖相关组织或区域(下丘脑、垂体、性腺)均有丰富的表达,提示kisspeptins与GnIH可能参与鱼类的生殖调控。通过化学合成金鱼kisspeptins与GnIH核心肽,在体注射成熟的雌性金鱼,发现kiss1能显著刺激金鱼LH的分泌,而kiss2不能;在高剂量的状况下,GnIH亦能有效抑制金鱼LH的分泌。然而,在离体实验中,两种kisspeptin与GnIH对金鱼垂体细胞LH的分泌均没有显著的影响,提示kisspeptins与GnIH对金鱼的LH调控可能发生于下丘脑水平。以上结果表明:与哺乳动物相类似,在鱼类生殖轴中也存在kisspeptins与GnIH的正负调控系统。

关键词： Kisspeptin GnIH 同源比对

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日本七鳃鳗新蛋白CD29的鉴定及组织定位研究

日本七鳃鳗新蛋白CD29的鉴定及组织定位研究

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：吴芬芳刘欣苏鹏李默李庆伟辽宁师范大学生命科学学院

通过对日本七鳃鳗类淋巴细胞cDNA文库同源序列分析,发现了一个与人CD29基因有46%同源性的新基因,将其命名为CD29-like基因。通过3′RACE和5′RACE PCR获得了其全长基因序列。该基因含有2340个碱基,编码780个氨基酸。对CD29分子进行结构... 详细信息

通过对日本七鳃鳗类淋巴细胞cDNA文库同源序列分析,发现了一个与人CD29基因有46%同源性的新基因,将其命名为CD29-like基因。通过3′RACE和5′RACE PCR获得了其全长基因序列。该基因含有2340个碱基,编码780个氨基酸。对CD29分子进行结构分析与预测表明,该蛋白结构包含信号肽、胞外EGF样结构域和富含半胱氨酸结构域、跨膜段和胞内酪氨酸磷酸化位点等。用LPS对七鳃鳗进行刺激,设计CD29特异引物,对七鳃鳗刺激前后红细胞、白细胞、口腔腺、心、肝、肾、肠、鳃、雌性和雄性生殖腺进行实时定量PCR分析,结果表明这些组织中都有不同程度的CD29基因转录,其中白细胞CD29基因转录水平最高,而且刺激后各组织中CD29转录水平都高于刺激前,说明此蛋白在七鳃鳗免疫反应中发挥了较为明显的作用。随后用自己制备的抗七鳃鳗CD29兔多克隆抗体对七鳃鳗白细胞进行了流式细胞分析和激光共聚焦显微镜观察,结果显示CD29主要在粒细胞表面表达,而在淋巴细胞表面表达较低,表明CD29作为整合素分子可能参与了七鳃鳗粒细胞与血管内皮细胞基底膜的粘附及迁移。上述结果表明,七鳃鳗作为原始无颌脊椎动物的代表,其在进化中已经能够表达与高等生物细胞迁移与粘附功能相似的白细胞分化抗原CD29样分子,对该免疫相关分子功能的进一步研究将有助于阐明七鳃鳗在免疫进化中所扮演的关键角色。

关键词：日本七鳃鳗 CD29-like 免疫进化

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中国卤虫Orthodenticle和Hunchback基因的序列分析及在不同发育时期的表达

中国卤虫Orthodenticle和Hunchback基因的序列分析及在不同发育时...

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：侯林李楠伊男王海山陈文博张悦辽宁师范大学生命科学学院

中国卤虫(Artemia sinica)属于节肢动物门(Phylum Arthropoda),甲壳纲(Class Crustacea),鳃足亚纲(Subclass Branchiopoda),无甲目(Order Anostaca),卤虫科(Family Artemiidae),卤虫属(Genus Artemia)。从80年代初至今在形态学、发育生物学、生态学、资源生物学、遗传学等学科的卤虫研究已有报道。但关于中国卤虫(Artemia)早期发育过程中基因表达的研究很少,还有待于进一步深入细致的研究和分析。本文根据GenBank上美国卤虫orthodenticle、Hunchback基因序列设计引物,以中国卤虫总RNA为模板,经RT-PCR,分别得到了长121bp、376bp的基因片段,经Blastn比对、ClustalX 1.83软件和MEGA 4.0对该序列的假定氨基酸序列和相近蛋白的氨基酸序列进行分子进化分析,确认该序列是中国卤虫orthodenticle、Hunchback基因的部分序列,并根据这部分序列设计了RCAE引物。并且首次得到了orthodenticle、Hunchback基因的序列全长。使用在线分析软件对orthodenticle、Hunchback基因的假定蛋白的氨基酸序列进行了分析和功能预测。使用整体免疫组化的方法首次确定了orthodenticle、Hunchback基因在中国卤虫不同发育时期的表达部位。并通过半定量PCR粗略的鉴定了orthodenticle、Hunchback基因在中国卤虫不同发育时期的表达量。orthodenticle、Hunchback基因都在中国卤虫的胚胎时期进行表达。orthodenticl基因在头部、胸部和躯干部都有表达。Hunchback基因在拟成虫期的头部、胸部、尾部肛门处以及附肢上都有表达。orthodenticle、Hunchback基因的表达量都随着中国卤虫的不断发育呈现了递减的趋势。推测orthodenticle、Hunchback基因与中国卤虫的体轴发育、体节形成及神经发育有关。

关键词：中国卤虫 Orthodenticle基因 Hunch-back基因全序列序列分析整体免疫组化半定量PCR

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药物早期ADME研究体系与模式动物选择

药物早期ADME研究体系与模式动物选择

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：杨凌张延延中国科学院大连化学物理研究所药用资源开发研究组

在药物研发的过程中,动物的使用只是一种替代或过渡,药物最终将在人体中使用。动物模型的终极目标是预测人体内可能出现的生理、病理、药理或毒理学变化,因此,模式动物的选择及评价非常关键。机体对外源性物质的吸收、分布、代谢、排泄(... 详细信息

在药物研发的过程中,动物的使用只是一种替代或过渡,药物最终将在人体中使用。动物模型的终极目标是预测人体内可能出现的生理、病理、药理或毒理学变化,因此,模式动物的选择及评价非常关键。机体对外源性物质的吸收、分布、代谢、排泄(ADME)能力差异,是影响药物在机体内发挥功能和效应的最重要因素。在进行药物先导化合物优化及其体内外活性研究的同时,常常需要比较人与不同动物对药物的多种ADME性质决定因素,如代谢酶亚型组成、表达、活性等方面的差异。对这些种属间差异的了解,有助于选择合适的动物模型进行药代动力学(PK)的种间推导,使得在整体研究的过渡阶段始终不迷失其方向。药物早期ADME研究正是以人源性或人源化组织功能性蛋白质为"药靶",通过体外的分析技术与计算机模拟等方法相结合,研究药物与制约药物ADME性质的生物物理和生物化学屏障因素间的相互作用。同时采用基于生理学的PK理论(PBPK),有效整合临床前人源化体外ADME及动物PK性质和参数,系统研究随时间、组织浓度分配变化对药物ADME性质所产生的影响,完成实验动物种属间PK参数推导、转化和放大,确保向人体PK性质预测的准确性,为新药临床前开发阶段提供适宜和有效的PK研究技术平台。目前,我们已经利用该套评价体系,成功考察了多种西药成分(如醋酸甲羟孕酮、紫杉烷类抗肿瘤药物),以及中药活性成分(如原儿茶醛、雷公藤内酯醇、五味子木脂素类成分)在不同种属间ADME行为的异同,可以作为一项标准化的技术应用于模式动物的选择和评价。

关键词：早期ADME 模式动物种属差异

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