黄瓜霜霉病菌孢子囊流式细胞术识别计数研究与应用
作者单位：北京市农林科学院信息技术研究中心国家农业信息化工程技术研究中心农产品质量安全追溯技术及应用国家工程实验室中国气象局-农业农村部都市农业气象服务中心
会议名称：《中国植物病理学会2023年学术年会》
会议日期：2023年
学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治]
关 键 词：古巴假霜霉菌 植病流行学 荧光染色 系统评价 田间应用
摘 要：由古巴假霜霉菌(Pseudoperonospora cubensis)引起的黄瓜霜霉病是一种世界范围内黄瓜生产上危害性较强的病害,发生严重及防控不当所导致的产量降低、品质下降问题普遍存在。因此,建立病害监测预警技术对实现预防为主的防治策略有重要意义,其中的关键是对田间病原菌建立快速监测方法从而进行风险预警,为防治策略提供可靠的预测模型参数。本文建立在对古巴假霜霉菌孢子囊开展实验室研究的基础上,通过流式细胞仪结合荧光染剂SYBR GreenⅠ对古巴假霜霉菌孢子囊进行计数检测,探讨流式细胞术在日光温室中的实际应用检测效果。主要研究内容如下。(1)以古巴假霜霉菌孢子囊为对象建立了流式细胞术定量检测方法。试验用田间采集的病叶制备古巴假霜霉菌孢子囊悬浮液开展。通过染色方法、上样方式、仪器阈值、仪器增益等试验,对比选择最佳方案。结果表明最佳染色方式为500μL悬浮液样本中加入30μL荧光染剂SYBR GreenⅠ,在室温下染色20 min;上样方式选取流速高速,30 s上样时间;仪器参数确定FL1阈值为8×10、SSC通道阈值为3×10,增益为低增益。(2)对建立的流式细胞术检测计数方法的结果进行评价。用血细胞计数板对同一孢子囊样本进行计数,与流式细胞术计数方法比较,即使两种方法目标范围有所差异,但有相关性(r=0.851 01);对多次重复的样本检测结果展开评价,相对标准偏差多数结果均在5%以下;然后通过对空白样本的检测获得检出限的数据1～10个/μL;设计实验评价不同人员操作下的结果实现对重现性的评价,其相对标准偏差多在15%以下。(3)应用流式细胞术计数方法在日光温室进行试验。黄瓜霜霉病在田间发展迅速,在经过打叶管理后,病害发展速度减缓,病情指数维持在70以下,计数方法与显微镜观察法结果有较好的相关性(r=0.825 16),得到流式细胞术的检测计数结果。田间各采样点孢子囊数量也下降且稳定在2×10以下,符合田间情况,验证了从采样到计数整个流程在田间的可行性。