基于单细胞测序研究非典型T细胞在口腔扁平苔藓中的调控作用
作者单位：同济大学附属口腔医院
会议名称：《中华口腔医学会第15次全国口腔黏膜病学学术大会暨第13次全国口腔中西医结合学术大会》
会议日期：2023年
学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学]
关 键 词：单细胞转录组测序 口腔扁平苔藓 非典型T细胞 γδT细胞 自然杀伤T细胞 黏膜相关不变T细胞
摘 要：目的:口腔扁平苔藓（OralLichenPlanus,OLP）是口腔黏膜病中的三大常见病之一,其发病机制不明,很难彻底根治。当前认为OLP是一种由T淋巴细胞介导的免疫相关疾病,深入研究OLP中T细胞的分子特征有助于揭示OLP的发病机理。关于常规T细胞的研究已有很多,但关于非典型T细胞在OLP中作用机理的研究较少。本研究拟通过单细胞转录组测序（singlecellRNA sequencing,scRNA-seq）,一种可以对单个细胞进行无偏移、高分辨率和高通量转录组分析的方法,描绘OLP单细胞图谱以及其中非典型T细胞的分子特征,探索非典型T细胞在OLP致病过程中可能发挥的作用。方法:选取OLP患者及正常个体的口腔颊黏膜各3例,制备单细胞悬液,使用10Xgenomics单细胞测序平台对6个样本进行单细胞文库构建。使用Seurat软件对所有细胞进行无监督聚类,找出各细胞簇上调的差异表达基因,将所有细胞分成免疫细胞、成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞四大类。对所有免疫细胞再次聚类,根据差异基因表达鉴定出非典型T细胞,分析OLP组中非典型T细胞群的分子特征,并利用CellPhoneDB进行细胞通讯分析,探索非典型T细胞和其他细胞间的相互作用。使用免疫组化染色检测非典型T细胞标记基因在OLP病损组织和正常对照组织中的表达情况。结果:6个样本的测序数据经过质检后统计出52429个细胞,降维后聚类出29个细胞簇,根据差异基因表达,将29个细胞簇分成四大类:免疫细胞、成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞;对免疫细胞进一步亚群分析,鉴定出表型为CD247TRDCNCAM1的非典型T细胞;相比对照组,OLP中的非典型T细胞细胞毒性相关基因表达较低,抗凋亡基因和NF-κB相关基因表达较高;非典型T细胞和内皮细胞以及单核-巨噬细胞之间的配体-受体对数量较高,可对非典型T细胞进行抗原呈递的分子主要在成纤维细胞,内皮细胞和单核-巨噬细胞中表达;免疫组化染色发现OLP病损组织中的非典型T细胞标记基因表达高于正常对照组,且大多定位于固有层。结论:1.鉴定出口腔颊黏膜中表型为CD247TRDCNCAM1的非典型T细胞,且免疫组化染色显示该类细胞在OLP中增多;2.相比正常对照组,OLP中非典型T细胞的细胞毒性功能减弱,NF-κB信号增强,并且OLP组中非典型T细胞的凋亡抑制增强,这可能导致非典型T细胞在病损组织中长期滞留,导致OLP形成慢性炎症;3.细胞通讯分析显示非典型T细胞和内皮细胞以及单核-巨噬细胞之间的相互作用最为密切,在OLP中,成纤维细胞,内皮细胞和单核-巨噬细胞可能通过抗原呈递作用激活非典型T细胞。