侵染广东黄瓜的瓜类褪绿黄化病毒分子检测及基因组序列分析
作者单位：广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室
会议名称：《中国植物病理学会2021年学术年会》
会议日期：2021年
学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学]
关 键 词：瓜类褪绿黄化病毒 黄瓜 广东 分子检测 基因组序列
摘 要：瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV）属于长线形病毒科（Closteroviridae）毛线病毒属（Crinivirus）成员,主要由烟粉虱（Bemisia tabaci）以半持久性方式传播,是一种双分体正单链RNA病毒,包括RNA1和RNA2两条链。CCYV病害症状主要表现叶片褪绿、黄化,早期叶脉仍然保持绿色,后期整株叶片变黄。该病毒于2004年首次在日本甜瓜上被发现,2010年起已在我国台湾、山东、河南、北京等多地有报道,可见该病毒扩散速度快,已成为影响瓜类作物正常生产的重要病毒。2020年调查发现广东省广州市、湛江市、廉江市的黄瓜植株叶片明显黄化,且植株上存在大量烟粉虱,由此推测这些黄瓜植株可能被CCYV侵染。并从每调查点随机采集5份典型症状的黄瓜病样,合计15份疑似病样,利用扩增CCYV的热激蛋白70的特异引物对病样进行RT-PCR检测,能从12份病样中扩增出单一预期大小目的条带证实黄瓜病样中确实存在CCYV,且检出率80%。进一步采用分段扩增、克隆测序方法,共获得GDNS2、GDLJ4、GDXW1共3个广东分离物全基因组序列,3个分离物大小和基因组结构一致,RNA1全长大小为8 607 bp,包含4个ORF,分别编码ORF1a、RdRp、P6、P22蛋白,5’UTR和3’UTR的长度分别为73 nt和250 nt,所获的3个广东分离物相似性为99.73%～99.81%,与已报道的CCYV其他分离物的全基因组序列相似性为99.55%～99.90%,其中与台湾分离物（登录号:JN641883.1）的相似性最高,分别为99.87%、99.90%、99.86%。RNA2全长大小8 041bp,包含8个ORF,分别编码p4.9、Hsp70 h、p6、p59、p9、CP、CPm、p26蛋白,5’UTR和3’UTR的长度分别为1 034 nt和221 nt,所获的3个广东分离物相似性为99.73%～99.80%,与已报道的CCYV其他分离物的全基因组序列相似性为99.53%～99.91%,其中GDNS2、GDXW1分离物与台湾分离物（登录号:JF502222）的相似性最高,为99.91%和99.83%,GDLJ4分离物与山东分离物（登录号:MH819191）相似性最高,为99.91%。本文首次明确CCYV 3个广东黄瓜分离物的分子特征,为开展该病毒种群遗传特征、序列变异与进化等研究提供了素材。