由慢病毒编码β-catenin shRNA产生的Wnt信号通路对鼠颅骨愈合的影响
作者单位：中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科 Johns Hopkins UniversityPathology University of California Los Angeles David Geffen School of Medicine UCLABioengineering UCLAOrthopaedic Surgery University of CaliforniaLos AngelesOrthopaedic Hospital Reseach Center University of California San Diego School of Medicine
会议名称：《第十四次中国口腔颌面外科学术会议》
会议日期：2018年
学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学]
关 键 词：Wnt信号通路 骨愈合 骨修复 成骨 颅骨 Beta-catenin shRNA 颅骨缺损 膜内成骨
摘 要：研究目的:从胚胎时期的骨骼类型,到胎儿骨的发育和骨修复,Wnt/β-catenin信号通路在成骨中都扮演了十分重要的作用[1]。体内拮抗Wnt信号通路的方法包括系统性拮抗或暂时性拮抗,包括基因途径[2],应用小分子抑制剂[3],或中和抗体[4]。我们设计了一个能够在骨组织中局部应用并暂时可控的Wnt/β-catenin信号抑制剂。研究方法:首先在体内验证了β-catenin抑制能够影响颅骨愈合。然后将β-catenin shRNA编码的慢病毒或有GFP标记的随机序列sh RNA分别皮下注射到18周的NOD-SCID鼠的颅骨中线。在7天后,在NOD-SCID鼠的额骨或顶骨上分别做1.8mm的缺损。4周后,通过microCT,组织学分析,免疫组化等对结果进行分析。研究结果:慢病毒介导β-Catenin shRNA在体外抑制了73%鼠的骨髓间充质干细胞,在体内抑制了59%的骨愈合(图1)。在用慢病毒编码的β-catenin shRNA处理过的鼠中,从microCT重建中能看到额骨缺损愈合受到明显抑制(图2),定量骨愈合分析得到同样的结果(图3)。HE染色和组织学切片验证了同样的结果(图4)。免疫组化也验证了同样的结果(图5)。研究结论:慢病毒编码的β-Catenin shRNA对于抑制成骨有效,相比于顶骨,对于额骨的抑制作用更加明显。