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MiR-150 impairs inflammatory cytokine production by targeting ARRB-2 after blocking CD28/B7 costimulatory pathway

作     者:桑威 王莹 张聪 潘彬 陈伟 闫冬梅 Thomas P.Loughran Jr 徐开林 

作者单位:徐州医科大学附属医院血液科 

会议名称:《第十一届全国免疫学学术大会》

会议日期:2016年

学科分类:1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

关 键 词:MiR-150 炎性细胞因子 ARRB-2 共刺激 

摘      要:目的 :研究miR-150作为异体造血干细胞移植后出现急性植物抗宿主病的预防与诊断指标的作用机制方法 :通过三质粒包装构建过表达miR-150的慢病毒载体。利用磁珠分选的方法从人外周血分离纯化出CD4+T细胞,流式细胞术分选出GFP阳性细胞,活化后进行慢病毒转染。采用q RT-PCR方法,检测miR-150的水平。利用q RT-PCR及Western Blot法检测转染LV-miR-150后ARRB2 m RNA水平及蛋白表达,并利用荧光素酶报告基因实验进行把基因验证。进行胞内细胞因子染色后上流式检测Th细胞亚群情况;Annexin V/7-AAD法检测细胞凋亡;CCK-8法检测细胞增殖情况;Western Blot法检测蛋白表达。c AMP检测试剂盒检测c AMP水平;Csk、Lck及PI3K活性检测试剂盒分别检测其活性。ELISA法检测细胞因子水平。结果 :miR-150可通过靶向ARRB2抑制CD28/B7共刺激信号通路的传导,并削弱IL-2等细胞因子的产生;miR-150可以增加c AMP水平,活化c AMP-PKA-Csk抑制性信号通路。并进一步证实miR-150不仅影响ARRB2/PDE4入筏量,还可以通过正反馈调控使PKB/ARRB2/PDE4三聚体入筏受阻,影响T细胞完全活化。综上,miR-150通过靶向ARRB2,影响PDE4/ARRB2二聚体的功能,在CD28/B7共刺激信号通路中削弱炎症细胞因子的产生,可能发挥免疫耐受的作用。结论 :miR-150可能成为移植免疫中的新的潜在治疗靶点。

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