GSK3β及EGFP基因共表达病毒载体构建及转染大鼠骨髓间充质干细胞
作者单位：西安交通大学医学院第二附属医院骨二科
会议名称：《第三届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会》
会议日期：2012年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学]
关 键 词：糖原合成酶3β 增强型绿色荧光蛋白 逆转录病毒载体 骨髓间充质干细胞
摘 要：正目的:构建携带大鼠GSK3β基因的逆转录病毒载体,并转染骨髓间充质干细胞,为研究GSK3β在骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中的作用打下坚实基础。方法:利用特异性引物,使用RT-PCR方法扩增GSK3β片段,将目的片段与pMD18T载体连接,经转化、扩增、抽取后,阳性克隆送测序。利用双酶切将GSK3β基因定向插入同携带EGFP基因的逆转录病毒表达质粒,进行双酶切及测序鉴定。将鉴定成功的逆转录病毒质粒和另外两种辅助质粒用磷酸钙法共转染293T细胞,收集、浓缩逆转录病毒及利用荧光计数法检测滴度。从成年SD大鼠