21-羟化酶缺乏症CYP21A2基因突变分析
作者单位：浙江大学医学院细胞生物学与医学遗传学系
会议名称：《2014浙江省医学会医学遗传学学术年会》
会议日期：2014年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学]
关 键 词：先天性肾上腺皮质增生症 21-羟化酶缺乏症 特异性扩增 限制性内切酶位点特异性
摘 要：目的先天性肾上腺皮质增生症(CAH)最主要的形式是21—羟化酶缺乏症,其致病基因CYP21A2是人类最具多态性的基因之一,真假基因高度同源,突变类型复杂多样,分析21—羟化酶缺乏症患者CYP21A2基因点突变,缺失及与假基因的互作与CAH的相关性,为进一步阐明致病原因提供实验依据,建立临床上适用的快速准确的基因检测方法。方法研究对象为CAH患者10例及正常对照,采用QIAGEN Blood DNA kit提取外周血DNA,根据CYP21A2基因与其假基因CYP21A1P间的基因序列差异设计高特异性的PCR引物,用长片段酶(TAKARA)扩增CYP21A2基因1-3号外显子和3-10号外显子,再用普通引物扩增每个外显子进行多重PCR,并对扩增产物进行直接测序,分析检测CYP21A2基因突变;通过限制性内切酶位点特异性多态性分析真假基因的置换导致3号外显子8bp的缺失。结果 10例患者中,存在8个bp(c.329-336delGAGACTAC)缺失的发现3例,其中一例为CYP21A2/CYP21A1P型杂合子;突变为p.R92G,p.G179R,p.V237E,p.M239K,p.R356W p.G418V,c.293-13CA,c.293-13CG各一例。其中p.R92G,p.G179R,p.G418V为未曾报道的突变。结论特异性引物扩增测序和限制性内切酶位点特异性多态性分析技术结合其他技术能很好地对21—羟化酶缺乏症进行快速准确的检测。