抑制DSG2基因表达对HL-1细胞心脏相关基因表达的影响
作者单位：南京医科大学第一附属医院心内科
会议名称：《中华医学会心电生理和起搏分会第十次全国学术年会》
会议日期：2012年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学]
摘 要：目的通过RNAi抑制HL-1细胞的DSG2基因表达,观察其转录水平表达的改变。方法设计并合成针对DSG2基因编码区的干扰序列和对照组序列,构建真核细胞表达质粒并转染HL-1细胞。RT-PCR和Western blot检测DSG2在mRNA和蛋白水平表达变化,筛选出沉默效率最佳的细胞株。流式细胞术检测细胞凋亡,电镜观察细胞超微结构改变,NimbleGen mRNA真核生物表达谱芯片寻找差异表达基因。结果成功构建4组ShDSG2真核表达质粒并转染HL-1细胞,G418筛选获得稳转相应的细胞系。与对照组相比,ShDSG2-273组的DSG2基因RNA表达(71.67%)和蛋白表达(51.72%)最为显著。电镜结果显示ShDSG2-273组HL-1细胞空泡样变性、线粒体肿胀和嵴消失,流式细胞仪检查提示细胞凋亡显著增加,有2224个基因出现表达出现异常(820个基因RNA表达上调,1404个基因RNA表达下调),其中包括心肌发育、心肌纤维组装、收缩蛋白和心脏离子通道蛋白等均出现显著下调。结论 DSG2基因表达下调导致HL-1细胞出现多种心肌相关基因表达改变,细胞凋亡增加,缝隙连接蛋白43、离子通道蛋白和心肌发育相关蛋白表达改变可能参与了ARVC的发病。