猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达
作者单位：云南农业大学 昆明理工大学 云南出入境检验检疫局
会议名称：《动物检疫学分会2010年学术年会》
会议日期：2010年
学科分类：090603[农学-临床兽医学] 090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学]
摘 要：根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(Genbank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-NP。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KDa。此研究结果为进一步研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体奠定物质基础。