巨脑性白质脑病伴皮层下囊肿MLC1基因突变分析与突变功能研究
作者单位：北京大学第一医院儿科 Montreal Neurological InstituteMontrealQuebecCanada 山西医科大学第一医院神经科
会议名称：《第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)》
会议日期：2009年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学]
基 金：国家“十一五”重点项目(No.2006BM05A07) 北京市自然科学基金重点项目(No.08G1469) 国家科技部“973”项目(No.2007CB5119004) 国际合作遗传研究培训基金(NIH/FIC,No.D43 TW06176)
摘 要：巨脑性白质脑病伴皮层下囊肿(Megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cysts,MLC)是一种常染色体隐性遗传的单基因遗传病,典型表现为出生后头围大与缓慢进展性运动功能障碍如走路不稳、共济失调、肢体痉挛和瘫痪。头颅MRI特征性改变为弥漫性大脑白质信号异常及肿胀,伴有双侧颞叶、额叶前部和额顶交界区特征性的皮层下囊肿。其致病基因于2001年定位并命名为MLC1。MLC1基因包含12个外显子,编码377个氨基酸的MLC1蛋白,包含8个跨膜功能域,其功能尚未明确。到目前为止,人类基因突变数据库(Human Gene Mutation Database)中报道的与MLC相关的MLC1基因突变有68种,尚未见中国人MLC1基因突变的报道。目的对6例临床诊断MLC患儿进行MLC1基因分析及突变功能研究。方法收集并分析6例MLC患儿的临床资料;DNA直接测序进行MLC1基因突变检测;构建MLC1质粒突变体,应用Wester Blot及免疫细胞化学方法进行突变功能研究。结果六例患儿均于生后发现头大和典型的MRI表现,伴或不伴运动与智力异常,临床符合MLC诊断。6例患儿中检测到8种MLC1基因的改变:3种新的错义突变(p.R22Q,p.G73E,and p.A275T)、1种新的剪接突变IVS9-1GC、已知报道的无义突变(p.Y198X)与错义突变(p.S69L)各1种、2种单核苷酸多态性改变(p.C171P与c.*48ATin 3’UTR)。Western blot结果显示:与野生型MLC1质粒相比较,突变体G73EMLC1蛋白表达量明显减少,突变体Y198X MLC1蛋白表阿在目的条带36kDa明显降低,但在25kDa出现明显条带,说明此突变导致了蛋白截短,突变体A275T MLC1蛋白表达与野生型相似。应用激光共聚焦显微镜技术结果表明:与野生型MLC1质粒相比较,突变体G73E与Y198X聚集于内质网内,但突变体A275T与野生型MLC1质粒表现相似。结论本研究首次在国内从分子水平明确了6例MLC患儿诊断,发现了4种国际上尚未见报道的与MLC相关的MLC1基因新突变;G73E与Y198X突变可以导致MLC1蛋白表达与细胞中内质网潴留,最终影响MLC1蛋白的功能。这是中国MLC患儿进行MLC1基因突变分析与突变功能研究的首次报道。