PTEN调节缺陷导致系统性红斑狼疮患者B细胞的高反应性
作者单位：北京协和医院
会议名称：《第九届全国免疫学学术大会》
会议日期：2014年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学]
摘 要：背景及目的:PTEN(phosphatase and tensin homologue)蛋白是PI3K/Akt信号通路的负调因子,对维持B细胞的正常功能起着重要作用。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以B细胞过度活化增殖、自身免疫性B细胞清除障碍为主要表现的自身免疫性疾病,PI3K/Akt信号通路的过度活化与SLE的发病密切相关。本研究探讨了PTEN在SLE患者B细胞中的表达调控及其对B细胞活化的影响。方法:选取明确诊断的初治SLE患者及健康对照,采集外周静脉血,磁珠分选B细胞。SLE患者B细胞取出后立即对PTEN蛋白进行检测,并跟临床指标进行相关性分析。用流式细胞术比较在IL-21,CD40L+anti-IgM及CD40L+anti-IgM+IL-21刺激下PTEN蛋白/mRNA的表达,和Akt及STAT3的磷酸化水平。采用Target Scan软件预测调节PTEN的候选miRs,并采用双荧光素酶报告基因检测系统验证。通过转染miR-7的激动剂/抑制剂,或转染siPTEN,用流式细胞术进一步验证其对B细胞的钙内流信号,Akt及STAT3磷酸水平的影响。结果:我们发现,SLE患者外周血B细胞的各个亚群中,除记性B细胞外,PTEN的表达明显下降,且跟疾病活动度呈负相关。SLE患者IL-21对PTEN蛋白表达及抑制CD40L+anti-IgM介导的AKT磷酸化的调控存在障碍,但IL-21能正常上调PTEN的mRNA水平,且不影响IL-21诱导的STAT3磷酸化。通过对调控PTEN蛋白的几个候选miRs的检测发现SLE患者B细胞miR-7,21及22表达均升高,而这些miRs均能下调PTEN的表达,且IL-21可以诱导正常人及SLE患者B细胞中miR-7及22的表达。PTEN表达下调导致SLE患者B细胞中BCR诱导的钙离子内流信号升高,并促使IL-21介导的B细胞增殖和浆细胞分化增强,而体外转染miR-7抑制剂可以纠正这种异常。敲除正常人外周血B细胞的PTEN表达可以显著地升高其钙内流信号,且这种升高不能被miR-7的激动剂或抑制剂所改变。敲除PTEN后,正常人B细胞中IL-21对由BCR信号诱导的钙内流及Akt磷酸化的负向调节作用也无法显现。结论:SLE患者中miR-7对PTEN的缺陷调控是导致其B细胞过度活化的原因之一,提示其可能是治疗干预的一个新靶点。