对苯二酚、苯并(a)芘、邻苯二甲酸二辛酯、芘、姜黄素、间苯二酚和秋水仙素:苏州药明康德遗传毒理实验室按照OECD指导原则487验证CHO细胞体外微核实验
作者单位：苏州药明康德新药开发有限公司
会议名称：《2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全...》
会议日期：2013年
学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学]
关 键 词：遗传毒性
摘 要：目的 7个遗传毒理数据已经很充分的化合物证明本实验室已经根据OECD指导原则487的要求充分验证了体外微核实验。方法中国仓鼠卵巢(CHO)细胞从美国S Galloway博士处获得。细胞生长在含有10%胎牛血清的McCoy′s5A培养基中。供试品处理前大约24 h,将CHO细胞按照15×10/2 ml/孔接种在6孔板中,置于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养。使用多氯联苯诱导的大鼠肝S9匀浆,终浓度为1.5%。包含3个给药处理系列,即3H+S9、3H-S9和24H-S9,每一系列设立平行溶剂和阳性对照。其中3H+S9和3H-S9两个系列在给药3 h后,用HBSS洗两次除去供试品,然后加入2毫升培养基继续培养21 h。而24H-S9给药后一直培养到24 h收获。细胞给药后培养24 h,消化细胞,一部分用于测定细胞数,余下的细胞经固定、制片、吖啶橙染色,在荧光显微镜下检查每个剂量组至少2000个单核细胞中含有微核的细胞频率。采用相对细胞倍增数(relative population doubling,RPD)计算细胞毒性,具体方法在Susan K.Greenwood等人的文献中有描述。结果①有文献报道,对苯二酚在体外微核实验中结果为阳性。本实验中,在3H±S9中,在30～60μg·ml剂量组中实验结果为阳性,而在24 h处理些列中,在4～6μg·ml剂量组中观察到实验结果为阳性。最高剂量组的细胞毒性均接近50%。②苯并(a)芘:在OECD指导原则487中,它是推荐的只在加S9条件下阳性的参考化合物。本实验中,在3H+S9中,在0.5～50μg·ml剂量组中实验结果为阳性,50μg·ml为在培养基中可见最小沉淀的剂量,而在其他两个处理系列组中,直到50μg·ml的沉淀剂量,均未见阳性结果。③邻苯二甲酸二辛酯和芘:在OECD指导原则487中,它们是推荐的阴性参考化合物。本实验中这两个化合物的实验结果均为阴性。④姜黄素:有文献报道,它在体外微核实验中只有在可观察到明显凋亡细胞的剂量产生阳性结果。本实验3个处理系列中均有观察到阳性结果,且这些阳性剂量的细胞毒性均接近50%,在这些剂量组中也都可以观察到明显增多的凋亡细胞。⑤间苯二酚:有文献报道,它在体外染色体畸变和小鼠淋巴瘤实验中结果为阳性。本实验中,在24H-S9中,在20～180μg·ml剂量组中实验结果为阳性,最高剂量组的细胞毒性均接近50%。⑥秋水仙素:在OECD指导原则487中,它是推荐的致单倍体诱变剂。在本实验中,在3H处理系列中,在0.2～1.8μg·ml剂量组中实验结果为阳性,而在24 h处理些列中,在0.1～0.5μg·ml剂量组中观察到实验结果为阳性。最高剂量组的细胞毒性均接近50%。结论以上实验阴阳性结论与文献报道的体外哺乳动物细胞遗传学实验的结论具有良好的一致性,证明体外微核实验在苏州遗传毒理实验室得到了充分的验证。