腺病毒介导的RNA干扰对人阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5A3基因表达的抑制作用
作者单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 晶赛生物工程技术有限公司
会议名称：《中华医学会第八次全国男科学学术会议》
会议日期：2007年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学]
摘 要：目的：构建针对人阴茎海绵体平滑肌细胞 PDE5A3基因的 siRNA 重组腺病毒表达载体 rAd5-siRNA-PDE5A3并观察其对 PDE5A3基因表达的抑制作用。方法：通过搜索 Genbank 获得人 PDE5A3基因 mRNA 全序列,选取编码区以 AA 起始的19～ 21碱基序列,与 GenBank 比较去除与其它基因高度同源的序列,从中选取6条序列并设计合成相应的双链 DNA。制备6个针对人 PDE5A3基因的 siRNA 表达质粒,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞48h 后,以 RT-PCR 及 Western blot 检测 PDE5A3基因的表达。筛选出对人阴茎海绵体平滑肌细胞 PDESA3基因有抑制作用的3个 siRNA 表达框,将其与增强型绿色荧光蛋白(EG-