稻瘟病菌分泌蛋白提取与质谱鉴定
作者单位：华中师范大学化学学院教育部农药与化学生物学重点实验室分子结构鉴定与精准生物医学分析质谱中心
会议名称：《中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会》
会议日期：2015年
学科分类：07[理学] 09[农学] 070302[理学-分析化学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 0703[理学-化学]
基 金：国家自然科学基金资助项目(批准号:21175054 31270876及31370815)
摘 要：稻瘟病菌是引发水稻病害的主要菌种,该致病菌属于半知菌亚门真菌,一般有灰梨孢或稻梨孢两种类型。它通过分泌黑色素、蛋白等物质感染水稻叶片、茎杆、穗部使水稻发生病变。稻瘟病菌的分泌蛋白经由稻瘟病菌核糖体合成,在菌体内膜系统加工修饰后分泌到体外,具有一定功能型作用。分泌蛋白在分泌到菌外前,在细胞内部进行了糖基化、羟基化、酰基化等一系列修饰,经过这些修饰分泌蛋白才能具有相应的生物功能。对稻瘟病菌分泌蛋白的研究可以帮助我们更好的了解稻瘟病菌的周期生活,有助于探索稻瘟病菌感染水稻的机制,从而遏制水稻病害的发生。分泌蛋白是低丰度蛋白,其提取沉淀物中干扰杂质过多,这给它的质谱鉴定带来了较大的困难。在本研究中,我们加大分泌蛋白提取量,实现了分泌蛋白的高通量测定,然后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对分泌蛋白进行纯化分离,从而降低了沉淀物中各种杂质的噪音干扰,得到的纯化蛋白使用基于基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱仪（MALDI-TOF-MS）进行质谱分析,最后采用从头测序（de no vo sequencing）来找寻目标蛋白的多肽序列,克服了分泌蛋白低丰度难检验的难题,为我们探索稻瘟病菌感染水稻的机制提供了重要的线索