天花粉蛋白衍生肽诱导同种异体皮肤移植免疫耐受的作用及机制研究
作者单位：上海交通大学医学院上海市免疫学研究所
会议名称：《第八届全国免疫学学术大会》
会议日期：2012年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学]
关 键 词：天花粉蛋白衍生肽PA MLR 移植耐受 负向免疫调节 CD4+Foxp3+T
摘 要：研究背景与目的:天花粉蛋白(Trichosanthin,Tk)是从括篓根块中提取的植物蛋白,我们前期的研究首次发现其具有免疫负调功能,可抑制Th1型主宰的细胞应答,是一种潜在的免疫抑制剂。然而Tk在临床使用时伴随一定的肌肉和神经毒性,因此明确Tk分子的构效关系显得尤为重要,为此,我们对Tk进行了分段克隆和表位分析,筛选获得低毒高效的衍生肽PA,并分析其诱导同种异体移植耐受的作用及机制,为其应用于临床奠定实验基础。方法:建立同种异体MLR体系,用3H-Td R掺入法观察PA的抑制作用;通过乳酸脱氢酶(LDH)及Annexin-V/PI检测法评估PA的细胞毒性;采用 Real-time PCR、ELISA方法分析PA对细胞因子分泌格局的影响,Western Blot检测NF-κB途径活化与否;体内通过构建小鼠同种异体皮肤移植模型,观察PA治疗后移植物的存活期、免疫组化分析局部炎症浸润情况。结果:PA对MLR具有显著抑制效果,抑制率达87%(P0.01),而细胞毒性作用显著低于Tk;Real-time PCR结果发现,PA显著升高IL-10、TGF-β、Foxp3 mRNA表达水平,降低IFN-γmRNA表达水平;ELISA分析发现IL-10、TGF-β、IFN-γ表达格局的变化与PCR结果一致。Western Blot结果提示PA增强I-κB磷酸化程度。经PA治疗,小鼠同种异体皮肤移植物的存活时间由7.9天延长至20.5天,病理切片染色提示,治疗组移植皮肤局部炎性浸润减轻,IL-4、IL-10表达上调,IFN-γ、IL-17A表达下调;流式分析显示外周血及脾脏中CD4+Foxp3+T细胞比例均增加;结论:筛选出的Tk衍生肽—PA对Th1型主宰的典型细胞应答具有明显免疫抑制作用,抑制效果优于全长蛋白而细胞毒性低于Tk;体内实验结果发现其能显著延长小鼠同种异体移植皮肤的存活时间,其中可能涉及的作用机制包括:激活I-κB信号途径,上调细胞因子IL-4、IL-10分泌及CD4+Foxp3+T调节细胞比例,同时下调IFN-γ、IL-17A的表达水平,实施了免疫负调作用,进一步的验证实验正在进行中。