清热化湿法、活血化瘀法对胰腺癌原位移植瘤小鼠胆固醇代谢的影响

作     者：赵瑞丽 

作者单位：河南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张娟

授予年度：2023年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：胆固醇代谢 活血化瘀 清热化湿 胰腺癌 原位移植瘤 中医治法 

摘      要：研究目的:通过清热化湿法、活血化瘀法、清热化湿联合活血化瘀法三种不同中医治法干预胰腺原位移植瘤荷瘤小鼠与SW1990人胰腺癌细胞,检测胆固醇代谢水平及胆固醇代谢关键蛋白的表达情况,探讨胰腺癌中医治疗的最佳治法与相关机制。研究方法:实验一:1.使用裸小鼠建立胰腺原位移植瘤模型,比较活血化瘀法、清热化湿法、以及清热化湿联合活血化瘀法三种中医治法对荷瘤小鼠瘤重及体重的影响;2.采用COD-PAP单试剂微板法检测三种中医治法对荷瘤小鼠血清胆固醇及原位移植瘤组织胆固醇含量的影响;3.采用免疫组化、Western blot技术比较三种中医治法对裸小鼠胰腺原位移植瘤胆固醇代谢的相关蛋白标志物影响。实验二:1.培养SW1990人胰腺癌细胞,通过CCK-8实验观察活血化瘀法、清热化湿法、以及清热化湿联合活血化瘀法对SW1990人胰腺癌细胞存活率的影响;2.通过平板克隆实验以及软琼脂集落实验,观察三种中医治法对SW1990人胰腺癌细胞增殖能力的影响;3.通过细胞划痕实验观察三种中医治法对SW1990人胰腺癌细胞迁移能力的影响;4.通过transwell细胞侵袭实验观察三种中医治法对SW1990人胰腺癌细胞侵袭能力的影响。5.采用COD-PAP单试剂微板法检测三种中医治法对SW1990人胰腺癌细胞及细胞上清液中胆固醇含量的影响;6.采用Western blot技术比较三种中医治法对SW1990人胰腺癌细胞胆固醇代谢的相关蛋白标志物影响。研究结果:1.清热化湿法、活血化瘀法、清热化湿联合活血化瘀法三种中医治法对小鼠体重均无显著影响(P0.05),抑瘤率分别为43.66%,12.41%,9.73%,清热化湿组与对照组的瘤重差异具有统计学意义(P0.05)。3.免疫组化与Western blot共同显示清热化湿组胰腺癌原位移植瘤组织中调节胆固醇存储的关键蛋白ACAT-1表达降低(P0.05)。研究结论:1.清热化湿法对小鼠胰腺原位移植瘤的抑瘤率为43.66%,具有统计学意义,这表明清热化湿法优于活血化瘀法及清热化湿联合活血化瘀法,因此胰腺癌的主要证候可能是湿热蕴结证,胰腺癌的中医主要治法应当是清热化湿法。2.三种中医治法对荷瘤小鼠的血清与胰腺原位移植瘤组织中的总胆固醇含量无显著影响,三种中医治法对胆固醇代谢的调节可能发生于肿瘤组织内部的不同细胞之间。3.三种不同中医治法对小鼠胰腺原位移植瘤胆固醇代谢关键蛋白的表达水平影响不同,清热化湿法具有抑制胰腺癌胆固醇生成及酯化的作用,提示清热化湿法对胰腺癌的抑制作用可能与胆固醇的生成与酯化有关。