甘草汁制灵芝炮制工艺、质量标准及体外抗氧化、抗炎作用研究

作     者：闫茂颖 

作者单位：长春中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王淑敏

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：灵芝 含量测定 提取工艺 炮制工艺 质量标准 抗氧化 抗炎 

摘      要：目的:优化灵芝三萜酸类成分的高效液相色谱检测及提取方法;优化甘草汁制灵芝炮制工艺;测定炮制前后的成分含量并制定质量标准;评价炮制前后体外抗氧化、抗炎活性的差异。 方法:以4种灵芝酸（灵芝酸A、B、D、F）的含量为指标建立灵芝三萜酸类的高效液相色谱检测方法,正交试验法优化4种灵芝酸单体的超声提取工艺。采用Box-Behnken响应面的方法以甘草汁与灵芝比例(g·m L-1)、甘草用量（%）、浸泡时间（min）为考察因素,以灵芝总多糖、总三萜及甾醇、4种灵芝酸成分以及水溶性浸出物为指标,结合AHP-熵权法,确定最佳炮制工艺。评价8批生品及炮制品饮片的性状、鉴别、水分、灰分、水溶性浸出物、总三萜及甾醇、总多糖、重金属、农残、4种灵芝酸单体、麦角甾酮、麦角甾醇以及指纹图谱等指标,建立甘草汁制灵芝炮制品的质量标准。分别考察炮制前后灵芝多糖、三萜及甾醇以及水提物组分对ABTS+、DPPH、羟自由基的清除能力;ELISA法测定炮制前后三萜及甾醇组分对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型中TNF-α、IL-6、IL-1β、NO水平的作用。 结果:优化后的色谱条件可实现4种灵芝酸成分的有效分离;最佳提取工艺为1∶30的甲醇超声提取两次,每次45 min。最佳炮制工艺为1∶13的甘草汁比例、4.4%的甘草用量以及33 min的浸泡时间,与生品相比,炮制后总三萜及甾醇、水溶性浸出物的含量显著升高（P0.9。炮制后的多糖组分对三种自由基的清除活性均显著增强（P0.01）;三萜及甾醇组分对炎症因子水平的抑制作用也优于生品,但差异无统计学意义。 结论:4种灵芝酸的检测及提取方法准确可靠,可用于含量测定。所得甘草汁制灵芝炮制工艺稳定、可行,品质较佳。各批次炮制品均符合药典灵芝生品标准,即水分≤17.0%、灰分≤3.2%、水溶性浸出物≥3.0%、总三萜及甾醇含量≥0.50%、总多糖含量≥0.90%,不做更改;重金属及农残远小于药典植物类中药材标准,因此不做要求;此外,建议灵芝酸A、B、D、F总含量≥1.4 mg/g;麦角甾酮≥3.38μg/g;麦角甾醇≥0.40 mg/g,并确立了指纹图谱检测方法。甘草汁制可促进灵芝成分溶出,协同其抗氧化、抗炎作用,炮制后抗炎活性的增强可能与麦角甾醇的溶出增加有关（P0.05）,为甘草汁制灵芝的质量及药理研究提供依据,为甘草汁制灵芝新型饮片的开发应用提供科学支撑。