五劳七损方对AS成纤维细胞增殖的影响及机制的研究

作     者：王振东 

作者单位：甘肃中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王海东

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：五劳七损方 强直性脊柱炎 成纤维细胞 成骨分化 Wnt/β-catenin信号通路 

摘      要：目的:观察五劳七损方含药血清对AS成纤维细胞增殖的影响,探讨其作用机制。揭示五劳七损方通过Wnt/β-catenin信号通路干预AS成纤维细胞增殖的作用机制,进一步阐释五劳七损方治疗AS的作用靶点及规律,为临床运用五劳七损方治疗AS提供理论和实验依据。 方法:将分离的AS患者髋关节滑膜成纤维细胞用显微镜观察细胞形态;用免疫荧光染色法鉴定;将分离的AS成纤维细胞作为五组(对照、低含药血清、中含药血清、高含药血清和阳性药物对照组),药物干预后,通过CCK-8检测观察AS成纤维细胞增殖情况,筛选最佳干预时间;碱性磷酸酶测定检测ALP活性;WB检测OCN、OPN和Runx2蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测Wnt5a、β-catenin和DKK-1 m RNA的表达情况。 结果: 1.通过显微镜观察可见,原代细胞经一周的培养后,已经有少量细胞爬出,在培养的第11天,显微镜下可观察到大量呈长梭形,体积相对较大的细胞,在培养的第15天可见培养瓶底密布的长梭形细胞;免疫荧光染色法显示波形蛋白染色阳性,鉴定分离出细胞为AS成纤维细胞; ***8结果显示,不同浓度五劳七损方含药血清对AS成纤维细胞分别干预24h、48h、72h后,与对照组相比,除五劳七损方低含药血清在24h和48h对AS成纤维细胞的抑制不具有统计学差异(P0.05),其余含药血清组对AS成纤维细胞的具有抑制作用(P0.05),五劳七损方中含药血清组可以抑制OCN的表达(P0.05),五劳七损方中、高含药血清组和阳性药物组可下调Wnt5a m RNA的表达(P0.05),五劳七损方高含药血清组和阳性药物组可显著上调DKK-1m RNA的表达(P0.01)。 结论:五劳七损方可能通过抑制AS成纤维细胞增殖,抑制ALP、OCN、OPN和Runx2等成骨因子和Wnt5a、β-catenin m RNA的表达,提高DKK-1的表达,调节Wnt/β-catenin信号通路发挥其对AS异位骨化的干预效应。