温阳活血通脉方通过DDAH1/ADMA/eNOS/NO途径对冠心病大鼠的保护机制研究

作     者：李岩珂 

作者单位：长春中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张文风

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：温阳活血通脉方 CHD 血管内皮损伤 DDAH1/ADMA/eNOS/NO途径 

摘      要：目的:探讨温阳活血通脉方通过DDAH1/ADMA/eNOS/NO途径对CHD大鼠的保护机制,为温阳活血通脉方治疗CHD提供实验依据。 方法:选用70只SPF级雄性SD大鼠,其中15只作为空白组正常饲养,另外55只则通过高脂饲料喂养并联合腹腔注射维生素D3的方法建立CHD大鼠模型。经过8周的造模期后,随机选取空白组和模型组中的大鼠各5只处死,进行血脂检测、主动脉和心脏组织的HE染色观察,以确保大鼠CHD模型建立成功。随后,将10只正常饲养的大鼠作为空白组,50只造模成功的大鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙组以及温阳活血通脉方低、中、高剂量组。进行连续8周的灌胃治疗后取材,比较各组大鼠的一般状况和体重变化;HE染色观察大鼠心肌、主动脉组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、非对称性二甲基精氨酸（ADMA）,血管内皮因子内皮素1（ET-1）和一氧化氮（NO）等指标的变化;Western blotting法和免疫组化法检测大鼠主动脉组织中DDAH1和eNOS的蛋白表达水平,以观察不同治疗方法对CHD大鼠模型的影响。 结果: 一般情况:空白组大鼠精神状态佳,口唇红润,毛发光亮,反应敏捷;模型组大鼠精神稍差,口唇发绀,毛发暗淡无光泽,反应稍迟缓;经过治疗后温阳活血通脉方低、中、高剂量组和阿托伐他汀钙组大鼠在上述方面均有不同程度的改善。 心和主动脉HE染色:空白组大鼠心肌细胞染色均匀,形态完整、心肌纤维排列整齐,无异常表现。主动脉内膜呈现光滑且完整的状态,内皮细胞排列有序,未发现有炎性细胞的浸润,也未观察到粥样斑块等异常情况。模型组大鼠心肌细胞肿胀、排列紊乱,部分区域可见局灶性坏死,细胞核萎缩。主动脉血管内皮遭受了明显的损伤,内皮细胞的排列变得紊乱,甚至出现了脱落现象。此外,弹力纤维层也发生了断裂,并且可以观察到大量的泡沫细胞存在,有较为典型的粥样斑块。温阳活血通脉方低、中、高剂量组及阿托伐他汀钙组大鼠在心肌细胞形态结构、排列整齐及水肿方面和模型组比较均有改善,主动脉病理损伤程度也均有不同程度的改善,炎性细胞浸润程度减轻,平滑肌细胞轻度增殖,排列较为规则。内膜下泡沫细胞数量减少,尤以温阳活血通脉方高剂量组及阿托伐他汀钙组改善程度最好。 血脂水平:与空白组相比,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高,而HDL-C水平显著下降（P0.05）。 动脉硬化相关指数:与空白组相比,模型组大鼠TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C以及AI比值均显著升高（P0.05）。 血管内皮功能:与空白组相比,模型组大鼠的ET-1水平显著上升,NO水平显著下降,NO/ET-1值也显著降低（P0.05）。 Western blotting结果:与空白组相比,模型组大鼠主动脉组织中DDAH1、eNOS的蛋白表达水平显著降低（P0.05）。温阳活血通脉方低剂量组大鼠主动脉组织中DDAH1、eNOS的蛋白表达水平也有所升高,但同样未达到统计学上的显著差异（P0.05）。 免疫组化结果:与空白组相比,模型组大鼠主动脉组织中DDAH1、eNOS的蛋白表达水平下降显著（P0.01）;与模型组相比,阿托伐他汀钙组和温阳活血通脉方高剂量组大鼠主动脉组织中DDAH1、eNOS的蛋白表达水平上升显著（P0.01）。温阳活血通脉方中剂量组DDA