成年期条件性敲除小胶质细胞Rapsyn诱导小鼠焦虑样行为

作     者：王莹星 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王顺启

授予年度：2024年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071006[理学-神经生物学] 

主      题：小胶质细胞 Rapsyn 焦虑样行为 神经元 

摘      要：目的:小胶质细胞是单核巨噬细胞,约占所有神经胶质细胞的5%-10%,其主要任务是在中枢神经系统中发挥免疫监视作用及对感染或其他病理状态(如神经系统疾病或损伤)的反应,在神经精神障碍中起关键作用,包括消极情感、社交缺陷和其他与抑郁症、焦虑症等的相关症状。尚未有研究表明Rapsyn在中枢神经系统中的功能。本论文通过条件性敲除小胶质细胞内Rapsyn,研究在小胶质细胞中的Rapsyn在中枢系统中发挥着怎样的功能与作用。 方法: (1)为了获得成年期条件性敲除小胶质细胞内的Rapsyn小鼠,我们运用基因工程技术 Cre-loxp 系统,成功构建了 Cx3cr1-CreER;Rapsyn flox/flox 小鼠。 (2)为了使小鼠在成年期敲除效率最高,我们给小鼠注射了不同浓度的Tamoxifen检测小鼠的敲除效率,运用蛋白质免疫印迹实验进行检测。并对注射后的小鼠进行脑重和体重的监测。 (3)通过蛋白质免疫印迹,检验,Rapsyn、NeuN、MBP、GFAP的表达程度,检测在成年期小胶质细胞内敲除Rapsyn小鼠对Rapsyn及神经中枢中神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的影响。 (4)通过免疫组化技术,对小鼠不同脑区IBA1和NeuN的密度进行了检测。 (5)以成年雄性敲除小鼠为实验组,注射同剂量Tamoxifen的Rapsyn flox/flox小鼠为对照组,开展了旷场、十字高架迷宫、三箱社交、Y迷宫、T迷宫、新旧物体定位、新旧物体识别和水迷宫等行为学实验,检验成年期小胶质细胞内敲除Rapsyn小鼠是否影响其焦虑、社交、学习记忆与认知功能。 结果: (1)通过注射一定量的Tamoxifen,可以使Cx3cr1ER-Rapsyn小鼠在成年期被特异性的敲除。 (2)成年期特异性敲除Rapsyn小鼠影响了小鼠大脑Rapsyn、NeuN的表达,不影响MBP、GFAP的表达程度。 (3)成年期敲除Rapsyn小鼠PrL区、S1区、CA3区、DG区小胶质细胞密度降低,PrL区、S1区神经元的密度降低。 (4)成年期小胶质细胞特异性敲除Rapsyn小鼠的旷场、十字高架迷宫实验结果比对照组均明显降低,表明敲除小鼠可能存在焦虑样行为。敲除Rapsyn小鼠在三箱社交中更偏向于和接触过的小鼠社交,影响了小鼠的焦虑样行为及社交回避现象。 (5)成年期敲除Rapsyn小鼠在Y迷宫、T迷宫、新旧物体定位、新旧物体识别和水迷宫中与对照组小鼠无差异,既不影响小鼠的自发运动量,也不影响小鼠的学习记忆及认知功能。 结论:成年期条件性敲除小胶质细胞Rapsyn的小鼠对小鼠焦虑样行为产生重要影响。