TYK2抑制剂在银屑病及炎症性肠病联合模型的治疗作用及机制研究

作     者：史琳丽 

作者单位：中国人民解放军海军军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：毕新岭

授予年度：2024年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：银屑病 炎症性肠病 联合模型 巨噬细胞 IL-23 TYK2抑制剂 

摘      要：研究背景及目的 银屑病是皮肤科常见的多基因遗传、免疫介导的慢性炎症性疾病,临床上以红斑,鳞屑为主要表现,全身均可发病,以头皮,四肢伸侧较为常见,随着对银屑病的研究不断深入,人们认识到除了皮肤症状外,银屑病与代谢综合征、心血管疾病(如动脉高压、冠状动脉疾病、心肌梗死和中风)及自身免疫性疾病(葡萄膜炎、炎症性肠病等)等其他人体疾病联系密切,通常称为银屑病共病。其中炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)主要由溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn disease,CD)组成,为一组发病原因不明的非特异性慢性肠道疾病,一般认为是人体遗传、环境及免疫等多种因素综合作用的结果。目前的研究表明银屑病和IBD具有相似的免疫特征,并且在遗传易感性、诱发因素、发病机制等方面有很多共同点。两者有共同发病通路包括细胞外的TNF、IL-17、IL-23信号通路,以及细胞内的JAK-STAT通路、ROR-αT/Th17轴、c AMP信号通路等。 近年来信号通路的靶向药物成为了当前的研究热点,生物制剂应用在银屑病和IBD的治疗方面取得了显著疗效。目前临床上用于治疗银屑病和IBD生物制剂的主要包括TNF-α抑制剂、IL-12/23抑制剂、IL-23抑制剂和JAK抑制剂等。JAK-STAT通路中的药物靶点JAK属于非受体蛋白酪氨酸激酶家族,由JAK1、JAK2、JAK3和选择性变构酪氨酸激酶2(TYK2)组成。TYK2在介导引起炎症的多种细胞因子的信号传导中起着关键作用,主要负责调控I型干扰素、白介素IL-12和IL-23等细胞因子驱动的促炎、促免疫信号传导和细胞应答。由于作用机制不同,TYK2抑制剂表现出比其他JAK抑制剂更高的安全性。因此,TYK2抑制剂目前是多种严重炎症和自身免疫性疾病的重点开发方向。 在本研究中,我们将探索银屑病和IBD联合模型的建立,观察表型变化,评估联合模型的稳定性。以及观察银屑病模型和IBD模型是否可以互相影响,并探索可能机制。最后使用TYK2抑制剂干预联合模型,评估干预效果及机制,为进一步银屑病及IBD共病用药提供新思路。 第一部分银屑病和炎症性肠病联合模型的探索和建立 目的:建立小鼠银屑病和IBD联合模型并评估造模方法。 方法: 1、使用6-8周龄Balb/c雄鼠,背部5%咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)62.5mg/天涂抹于背部2×3cm形成银屑病模型,联合低浓度(1.5%、2%)葡聚糖硫酸钠(Dextran sulphate sodium,DSS)自饮水的IBD模型连续7天,观察小鼠模型背部皮损的厚度(游标卡尺测量)、红斑、浸润、鳞屑程度及粪便、体重减轻等情况,在联合模型的第7天,取小鼠背部以及结肠组织,测量结肠长度。耳及结肠组织样本部分切片、包埋,行HE染色,综合评估造模方法。 2、使用6-8周龄Balb/c雄鼠,背部5%IMQ银屑病模型联合高浓度(3%、4%、5%)DSS自饮水的IBD模型连续7天,综合评估造模方法同1。 3、使用8-12周龄Balb/c雄鼠,耳部5%IMQ 25mg/天干预小鼠右耳形成银屑病模型联合高浓度(3%、4%、5%)DSS自饮水的IBD模型探索连续7天,综合评估造模方法同1。 结果: 1、背部银屑病模型较为理想,但DSS浓度较低,不符合IBD造模的要求,实验小鼠均顺利到达银屑病模型成熟期。 2、小鼠由于结肠炎症状过重于实验第4-5天予以人道主义处死,并且银屑病表型并未达到理想状态。该模型弃用。 3、耳部的银屑病模型及高浓度三个浓度梯度DSS处理的IBD模型均表型良好且稳定,通过小鼠模型耳部皮损的厚度、红斑、浸润、鳞屑程度及粪便、体重减轻等情况综合评估,联合模型建立成功。 第二部分银屑病及IBD之间的互相影响及相关机制探索 方法: 1、在联合模型的第7天,取小鼠右耳、结肠组织样本,部分切片、包埋,免疫荧光标记实验组及对照组CD3、FOXP3、CD11c、CD86、CD206,观察细胞表达、增殖及极化等差异。 2、新鲜组织采用q PCR检测实验组及对照组IL-6、IL-17A、IL-23、IL-27、INF-γ细胞因子的表达差异。 3、石蜡切片免疫组化染色观察SOCS1、p-STAT3表达差异,探索银屑病及IBD之间的互相影响可能机制。 结果: 1、银屑病和IBD在一定程度上可互相加重表型。 2、通过免疫荧光及定量分析,可发现耳部及肠道CD3、CD11c、CD86表达增强,其中CD3标记的T细胞、CD11c标记的树突状细胞、CD86标记的巨噬细胞表达增强且具有明显的统计学意义。 3、银屑病耳部皮损可见明显的IL-6、IL-23、INF-γ表达加强,IL-27表达下降但无明