中药补肾调冲方对雷公藤致DOR大鼠卵巢功能和生殖功能的影响

作     者：石祺雯 

作者单位：承德医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：高慧;刘玉兰;扈有芹

授予年度：2024年

学科分类：1005[医学-中医学] 100509[医学-中医妇科学] 10[医学] 

主      题：卵巢储备功能减退 中药补肾调冲方 雷公藤 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B 

摘      要：目的: 通过观察中药补肾调冲方对雷公藤致卵巢储备功能减退（DOR）模型大鼠卵巢功能和生殖功能及细胞PI3K、AKT蛋白表达的影响,探讨该方药治疗卵巢储备功能减退（DOR）的作用机制,为临床治疗提供依据。 方法: 筛选有正常动情周期的SD雌性大鼠共84只,随机分为空白组、模型组、中药补肾调冲方高、中、低剂量组、坤泰胶囊组及结合雌激素片组各12只,每组再次随机均分为药效小组和生殖小组各6只。空白组正常喂养,其余各组大鼠采用雷公藤多苷片（中草药雷公藤经制药厂制造后的药品名称,本文简称:雷公藤）(50mg/kg*14d)灌胃建立DOR模型。造模结束后,模型组予超纯水（2ml/kg*36d）灌胃;中药高、中、低剂量组分别予补肾调冲方不同剂量（24g/kg*36d、12g/kg*36d、6g/kg*36d）灌胃;坤泰胶囊组与结合雌激素片组分别予坤泰胶囊（0.6g/kg*36d）、结合雌激素片（0.075mg/kg*36d）灌胃治疗。实验期间观察大鼠一般情况和动情周期。给药结束后,药效小组大鼠均取材,观察卵巢组织形态学变化,计数各级卵泡,ELISA法检测血清AMH、FSH、LH、E2、P等激素水平,免疫荧光和Western Blot法检测卵巢组织中PI3K、AKT蛋白表达情况。给药结束后,生殖小组大鼠进行雌雄合笼,观察妊娠、产仔情况。 结果: 1.大鼠一般情况:实验期间,空白组大鼠一般情况好,体重稳定增长。与空白组相比,其余各组大鼠在造模后多出现食水减少和毛发暗淡蓬乱、脱落的症状,少数大鼠表现明显的喜蜷卧,反应速度减慢,大便溏,体重均明显降低（P0.05）。 3.大鼠血清激素水平:与空白组比较,模型组大鼠血清AMH、E2水平明显降低,FSH和LH则明显升高,差异均有统计学意义（P0.05）。与模型组比较,中药高、中、低剂量组AMH、E2水平升高（P0.05）,FSH、LH降低（P0.05）。与坤泰胶囊组对比:高剂量组AMH水平明显升高（P0.05）,FSH水平降低（P0.05）;低剂量组AMH水平较低（P0.05）,FSH水平升高（P0.05）。与结合雌激素片组比较:中药高剂量组的AMH水平明显更高（P0.05）;中药中剂量组的AMH水平升高（P0.05）,LH水平降低（P0.05）;中药低剂量组的FSH水平升高,E2水平降低（P0.05）。 4.大鼠卵巢组织形态学:与空白组相比,模型组大鼠始基卵泡、窦前卵泡、窦卵泡和黄体数目明显减少（P0.05）,闭锁卵泡数则显著上升（P0.05）。与模型组对比:治疗后中药高、中剂量组大鼠卵巢中各级卵泡数均显著增多（P0.05）,闭锁卵泡数则减少（P0.05）;中药低剂量组的始基、窦前和窦卵泡数均增加,闭锁卵泡数减少,差异均有统计学意义（P0.05）。与坤泰胶囊组对比:中药中剂量组闭锁卵泡数目偏多（P0.05）;中药低剂量组始基和窦前卵泡数目较少,闭锁卵泡数较多,差异均有统计学意义（P0.05）。与结合雌激素片组相比,中药高剂量组窦卵泡和黄体数明显增多（P0.05）。 5.大鼠卵巢组织中PI3K、AKT蛋白表达:免疫荧光法检测结果示:与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织内PI3K、AKT蛋白表达显著下调（P0.05）。与模型组相比,中药高、中、低剂量组PI3K、AKT蛋白表达均明显上调（P0.05）。与坤泰胶囊组相比:中药高剂量组PI3K、AKT蛋白表达较多（P0.05）;中药低剂量组PI3K蛋白表达较少（P0.05）。与结合雌激素片组对比,中药高、中剂量组PI3K、AKT蛋白表达均明显上调（P0.05）。Western Blot法检测结果示:与空白组相比,模型组p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达显著下调（P0.05）。与模型组对比:中药高、中、低剂量组的各蛋白表达均上调,差异有统计学意义（P0.05）。与坤泰胶囊组相比:中药低剂量组p-PI