根皮素对帕金森病模型小鼠的神经保护作用研究

作     者：马宁宁 

作者单位：延安大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙志宏

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：根皮素 帕金森病 细胞凋亡 氧化应激 炎症反应 

摘      要：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)属于神经系统退行性疾病,其主要的病理特征是:黑质中多巴胺(dopamine,DA)能神经元的丢失、路易小体(Lewy bodies,LB)的形成。目前,造成这种病理改变的具体原因仍在探索,可能与遗传、环境等因素有关、也可能与氧化应激等因素有关。类黄酮物质根皮素(Phloretin,PHL)是天然的非类固醇雌激素,具有很强的抗氧化、抗凋亡、抗炎等作用,近年来PHL作为PD治疗药物的研发备受关注。因此,本研究选取健康、活力强的C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)建立PD小鼠模型。以美多芭(Madopar)作为阳性对照药物,检测PHL对PD小鼠行为学(旷场、弗莱毛刺激、热刺激和疲劳转棒等)以及脑组织氧化应激、炎症、细胞凋亡的影响;并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)技术深入研究PHL对PD的神经保护作用。本研究结果为抗PD药物的开发提供药理学基础与理论依据,也为今后深入探究PHL通过信号通路调控PD的机制提供了坚实的数据支持。本研究主要结果如下: ***可以改善PD模型小鼠的行为障碍并缓解小鼠疼痛 转棒实验结果显示,PD模型小鼠的在棒时间显著低于Control组,相较于PD组小鼠,PD+PHL组小鼠的在棒时间显著延长,PD+Madopar组小鼠的在棒时间虽有所延长,但未表现出显著差异。此外,PD+PHL组与PD+Madopar组以及Control组与PHL组小鼠的在棒时间均未出现显著差异。之后进行了旷场实验,结果显示PD模型小鼠在旷场中运动的总距离和总时间显著低于Control组。经PHL和Madopar治疗后,PD模型小鼠在旷场中运动的总距离与总时间均显著增加。PD+PHL组与PD+Madopar组以及Control组与PHL组小鼠在旷场中运动的总距离和总时间均未出现显著性差异。弗莱毛测痛实验与热刺激测痛实验结果显示,PD组小鼠疼痛阈值显著低于Control组。经PHL和Madopar治疗后,PD模型小鼠疼痛阈值均显著升高。PD+PHL组与PD+Madopar组以及Control组与PHL组小鼠疼痛阈值均未出现显著性差异。 ***可以抑制PD模型小鼠黑质与纹状体组织中活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量,并提高超氧化物歧化酶(SOD)活性 与Control组小鼠相比,PD组小鼠黑质、纹状体的MDA、ROS的表达量显著升高,SOD活性显著降低。经PHL和Madopar治疗后,PD小鼠黑质、纹状体的SOD活性显著升高,MDA和ROS的表达量显著降低。PD+PHL与PD+Madopar两个组的小鼠的黑质中SOD活性、ROS的表达量均未出现显著性差异,PD+PHL组小鼠黑质中MDA表达量显著高于PD+Madopar组。PD+PHL组与PD+Madopar组,小鼠纹状体中ROS与MDA的表达量均未出现显著性差异,PD+PHL组小鼠纹状体中SOD活性显著高于PD+Madopar组。 ***治疗后会减少PD小鼠黑质、纹状体中凋亡细胞的数量 TUNEL染色结果表明,与Control组小鼠相比,PD组小鼠黑质、纹状体中凋亡细胞的数量增加。PHL和Madopar治疗后黑质、纹状体中凋亡细胞的数量少于PD组小鼠,其中PD+Madopar组小鼠脑组织纹状体的治疗效果不明显。PD+PHL与PD+Madopar组、Control与PHL组的小鼠黑质、纹状体中凋亡细胞的数量均接近。 ***可以抑制PD小鼠黑质、纹状体中IL-6、IL-1β、Bax、Bad的表达,促进Bcl-2的表达 qRT-PCR结果显示,PD组小鼠黑质、纹状体的IL-6、IL-1β、Bax、Bad基因m RNA的表达水平均显著高于Control组,Bcl-2基因的m RNA表达水平显著低于Control组。与PD组小鼠相比,PD+PHL组与PD+Madopar组小鼠黑质中IL-6、IL-1β、Bad基因的m RNA的表达水平均显著降低,PD+PHL组小鼠黑质中Bax基因的m RNA的表达水平相较于PD组也有所降低但并未出现显著性差异、Bcl-2基因m RNA的表达水平升高但也未出现显著差异。对于纹状体,PD+PHL组与PD+Madopar组小鼠IL-6、IL-1β、Bax、Bad基因m RNA的表达水平均显著低于PD组小鼠,Bcl-2基因m RNA表达水平升高但未表现出显著差异。蛋白水平检测发现,与Control组小鼠相比,PD组小鼠黑质、纹状体的IL-6、IL-1β、Bax、Bad蛋白的表达量均显著升高,Bcl-