PBK通过DOK4调节急性单核细胞白血病THP-1细胞的增殖、凋亡和自噬

作     者：武锐锋 

作者单位：延安大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘宇宏

授予年度：2024年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：急性单核细胞白血病 PBK 细胞增殖 细胞凋亡 

摘      要：研究目的:本研究旨在探究PDZ结合激酶(PDZ Binding Kinase,PBK)对人急性单核白血病细胞系THP-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及PBK通过酪氨酸激酶下游4(downstream of tyrosine kinase/Docking protein,DOK4)调节急性单核细胞白血病的发生发展。 研究方法:1.采用PBK慢病毒转染建立PBK过表达(LV-PBK)和敲低(sh-PBK)稳转细胞株(THP-1),同时以空载体阴性对照(NC、sh-NC)和未处理组(Contrl)作为对照组。 2.通过CCK8检测PBK过表达和敲低后对THP-1细胞增殖的影响;3.通过流式细胞仪检测PBK过表达和敲低后对THP-1细胞凋亡的影响;4.通过RT-qPCR和Western Blot技术检测PBK过表达和敲低后,DOK4m RNA和蛋白的表达水平。 5.通过RT-qPCR检测PBK过表达和敲低后,自噬相关标志物p62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、Beclin1m RNA的表达水平,以及Western Blot检测PBK过表达和敲低后,自噬相关标志物p62、Beclin1蛋白的表达水平。 研究结果:1.成功构建PBK过表达和敲低稳转细胞株 2.细胞增殖检测结果显示PBK过表达组(LV-PBK)增殖能力高于过表达阴性对照组(NC)(P0.05),PBK敲低组增殖能力低于敲低阴性对照组(sh-NC)(P0.05)。 3.细胞凋亡检测结果显示PBK过表达组(LV-PBK)凋亡率低于过表达阴性对照组(NC)(P0.05),PBK敲低组(sh-PBK)凋亡率高于敲低阴性对照组(sh-NC)(P0.05)。 ***-qPCR和Western Blot实验发现,PBK过表达则上调DOK4m RNA和蛋白的表达水平,PBK敲低则下调DOK4 m RAN和蛋白的表达水平,PBK和DOK4存在正性调控。 ***-qPCR实验发现,PBK过表达则上调自噬相关基因p62、LC3、Beclin1m RNA表达水平;PBK敲低则下调p62、LC3、Beclin1 m RAN表达水平。同样,Western Blot实验发现,PBK过表达则自噬相关蛋白p62、Beclin1表达水平增高,PBK敲低则自噬相关蛋白p62、Beclin1表达水平降低。 研究结论:***促进AML-M5细胞的增殖,抑制AML-M5细胞的凋亡;***与DOK4之间存在正性调控;***参与AML-M5细胞的自噬,过表达PBK上调AML-M5细胞自噬水平,敲低PBK下调AML-M5细胞自噬水平。