长链非编码RNA TPT1-AS1调控结肠癌发生发展的机制研究

作     者：杨华湘 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：付蔚华

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：长链非编码RNA 微小RNA 结肠癌 临床病理特征 细胞功能实验 

摘      要：目的:本研究旨在探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)TPT1-AS1在结肠癌中的表达及其与结肠癌患者临床病理特征的关系,并进一步探讨lncRNA TPT1-AS1促进结肠癌发生发展的分子机制。方法:本研究采用实时定量PCR分析lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平差异,并分析其与结肠癌患者临床病理特征的关系。采用生物信息学分析工具Starbase筛选出lncRNA TPT1-AS1的竞争内源性RNA mi R-671-5p,采用小干扰RNA技术构建lncRNA TPT1-AS1低表达载体,利用mi RNA mimics构建mi R-671-5p过表达载体,双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA TPT1-AS1和mi R-671-5p互补结合序列。采用CCK-8实验评估lncRNA TPT1-AS1/mi R-671-5p对结肠癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术分析lncRNA TPT1-AS1/mi R-671-5p对结肠癌细胞周期阻滞的影响,Transwell实验评估lncRNA TPT1-AS1/mi R-671-5p对结肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:1.结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1的表达与癌旁正常组织相比显著增加(4.26±0.34 vs 1.00,P0.05)。分析lncRNA TPT1-AS1表达水平与结肠癌患者临床病理特征的相关性,发现lncRNA TPT1-AS1表达水平与患者临床分期显著相关,III/IV期结肠癌患者lncRNA TPT1-AS1高表达比例(18/24)显著高于I/II期患者(18/48)。且lncRNA TPT1-AS1表达与远处转移显著相关,发生远处转移的结肠癌患者lncRNA TPT1-AS1高表达比例(10/13)显著高于无远处转移的患者(26/59)。***-8细胞增殖实验显示,SW620和DLD-1细胞在敲低TPT1-AS1后48h、72h,其增殖能力受到显著抑制。流式细胞术细胞周期分析显示,敲低TPT1-AS1可显著增加SW620和DLD-1细胞G0/G1期细胞比例,而显著降低S期和G2/M期细胞比例。Transwell迁移侵袭实验表明,敲低TPT1-AS1可显著抑制SW620和DLD-1细胞的迁移侵袭能力。3.双荧光素酶报告基因实验证实,mi R-671-5p与lncRNA TPT1-AS1存在互补结合序列。CCK-8细胞增殖实验表明,SW620细胞增殖能力在转染mi R-671-5p mimics 48h、72h后受到显著抑制,共转染si TPT1-AS1+mi R-671-5p mimics可进一步增强对SW620细胞增殖的抑制效应。流式细胞术细胞周期分析显示,转染mi R-671-5p mimics可使SW620细胞G0/G1期细胞显著增多,而S期和G2/M期细胞显著减少。共转染mi R-671-5p mimics+si TPT1-AS1-1可进一步升高SW620细胞G0/G1期细胞比例,且进一步降低S期、G2/M期细胞比例。Transwell实验表明,转染mi R-671-5p mimics可显著抑制SW620细胞的迁移侵袭能力,共转染mi R-671-5p mimics+si TPT1-AS1-1可进一步抑制SW620细胞的迁移侵袭能力。结论:本研究证实lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织和细胞系中表达显著升高,且lncRNA TPT1-AS1表达水平与结肠癌TNM分期、远处转移等不良临床病理特征密切相关。体外细胞功能实验证实,lncRNA TPT1-AS1通过靶向结合mi R-671-5p进而调控结肠癌细胞增殖、迁移侵袭和细胞周期G1/S转换。