基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨丹莪妇康煎膏对子宫腺肌症小鼠的治疗机制

作     者：凡艺月 

作者单位：成都中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：梁鑫

授予年度：2023年

学科分类：1005[医学-中医学] 100509[医学-中医妇科学] 10[医学] 

主      题：子宫腺肌症 丹莪妇康煎膏 PI3K/AKT/mTOR 凋亡 

摘      要：目的:本课题通过子宫腺肌症(Adenomyosis,AM)小鼠模型,验证丹莪妇康煎膏(Dan’e Fukang Decoction,DFD)对AM小鼠的治疗作用,并通过PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨DFD对AM小鼠的作用机制。方法:从7周龄BALB/C雌性小鼠中随机选取10只作为正常组,其余60只小鼠作为模型组进行宫内异体垂体移植手术造模。常规饲养3个月后,从正常组和模型组小鼠中随机选取7只进行组织病理学检查确认模型是否建立成功。其余模型组小鼠随机分为6组(每组7只),即对照组、DFD低、中、高剂量组、LY294002(PI3K抑制剂)组、Rapamycin(mTOR抑制剂)组。DFD低、中、高剂量组小鼠每天分别给予3.5 g/kg、7g/kg、14g/kg DFD灌胃,对照组小鼠每天给予同等体积无菌水灌胃,LY294002组小鼠每周2次给予50mg/kg LY294002腹腔注射,Rapamycin组小鼠隔日一次给予2mg/kg Rapamycin腹腔注射,每组连续3个月。颈椎脱位法处死小鼠,分离出子宫,肉眼观察子宫形态并测量其湿重。采用定量RT-PCR和Western blot检测PI3Ks通路关键因子(PI3K、mTOR)的mRNA和蛋白表达。Western blot检测细胞凋亡蛋白p53和抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达。TUNEL染色检测AM细胞的凋亡。结果:1.正常组小鼠子宫质中,表面光滑;模型组小鼠子宫质地较硬,子宫壁表面出现明显的结节,充血和红肿明显。正常组小鼠子宫内膜和肌层无明显异常;模型组小鼠子宫内膜和间质明显向肌层浸润。2.与对照组相比,DFD治疗组和通路抑制剂组小鼠U/B值和HE评分均显著降低(P0.05);小鼠子宫轮廓明显改善,充血和红肿明显减轻。3.与对照组相比,DFD治疗组和通路抑制剂组中PI3K、mTOR的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),凋亡蛋白p53的表达水平明显增加(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2、survivin的表达水平明显降低(P0.05)。4.对照组、DFD低、中、高剂量组、LY294002组、Rapamycin组的AM病灶细胞凋亡指数分别为1.5±0.8%、8.3±2.3%、11.9±1.9%、15.6±5.3%、28.9±4.4%、27.1±5.2%。与对照组比较,DFD低、中、高剂量组、LY294002组、Rapamycin组病灶细胞凋亡指数显著升高(P0.05)。结论:1.同种异体宫内垂体移植术可成功建立稳定可重复的AM小鼠模型。***可明显改善AM模型小鼠的子宫轮廓,减少子宫充血和红肿,降低子宫内膜腺体及间质对肌层的浸润程度。***3K/AKT/mTOR通路抑制剂(PI3K抑制剂和mTOR抑制剂)可抑制小鼠AM病灶PI3K/AKT/mTOR信号通路,调节凋亡相关蛋白(p53、Bcl-2、survivin)的表达,诱导AM病灶细胞凋亡。***可抑制AM模型小鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路,调节凋亡相关蛋白(p53、Bcl-2、survivin)的表达,诱导AM病灶细胞凋亡。