金花茶抗急性肺损伤及其多酚类成分抗氧化作用研究

作     者：袁羽 

作者单位：天津中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：解军波

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：金花茶 多酚 抗炎 抗氧化 急性肺损伤:秀丽隐杆线虫 

摘      要：金花茶(Camellia nitidissima Chi)隶属于山茶科山茶属,因其特有的金黄色基因而著名,极具研究和观赏价值。金花茶富含茶多酚、茶多糖、皂苷、微量元素、氨基酸等成分;具有抗炎、抗氧化、降血糖、抑制肿瘤等多种生物学活性。本研究以金花茶为研究对象,首先验证金花茶花和叶水提物在预防小鼠急性肺损伤(Acute Lung injury,ALI)潜在的抗炎抗氧化作用。提取纯化金花茶花多酚类成分,基于金花茶潜在的抗氧化活性,通过热应激诱导秀丽隐杆线虫产生氧化应激损伤,进一步验证金花茶茶多酚降低线虫氧化应激损伤作用。金花茶可通过降低炎症反应和氧化应激损伤预防ALI,其多酚类物质为发挥抗氧化作用的主要活性成分。(1)C57BL/6小鼠40只,随机分为空白对照组、模型对照组、金花茶花和叶水提物低、中、高给药组,每组5只;空白对照组和模型对照组灌胃生理盐水,金花茶给药组分别灌胃金花茶花和叶水提物低、中、高(1.2g/kg、2.4g/kg、4.8g/kg)3周,末次给药之后禁食12h后造模,除空白对照组采用暴露式气管法滴注生理盐水,其余组均暴露式气管内滴注LPS溶液建立急性肺损伤模型,造模24h后,对小鼠进行呼吸参数吸气时间(Inspiration time,TI),呼气时间(Expiration time,TE),潮气量(Minute volume,MV),呼吸频率(Frequency,F)指标检测;观察并对肺组织病变程度评分,检测肺湿/干重及肺泡灌洗液蛋白浓度、试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)炎症因子、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutas,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)氧化应激指标。金花茶花和叶的水提物可以改善小鼠呼吸功能,降低的小鼠TI、TE值,增加F、MV值,缓解小鼠的呼吸衰竭现象,改善肺组织的病理性损伤,降低肺水肿以及肺泡灌洗液蛋白浓度,降低肺组织及肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-1β水平,减轻氧化应激产物MDA,提高SOD、GSH水平而达到预防急性肺损伤的作用。(2)以水为溶剂加热回流提取1.2kg金花茶花3次,减压浓缩得到总水提取物,采用AB-8大孔树脂30%、60%乙醇洗脱对总水提物进行分离,减压浓缩,冷冻干燥后得到总水提物、30%乙醇洗脱物、60%乙醇洗脱物冻干粉。通过分光光度法测定总多酚含量,30%乙醇洗脱物中多酚含量最高达到了51.85%;高效液相色谱法对多酚类成分进行定性、定量分析,共得到没食子酸(Gallic acid,GA)、原儿茶酸(Protocatechuic acid,PCA)、表儿茶素(Epicatechin,EC)、表儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)、芦丁(Rutin,Rutin)5个多酚化合物。(3)将秀丽隐杆线虫在35℃环境下培养6h,诱导线虫产生热应激反应,建立线虫氧化损伤模型,通过100、200和400μg/m L金花茶花总多酚给药来探究金花茶的抗氧化作用。研究结果表明,100、200和400μg/m L金花茶花总多酚均具有一定的抗氧化作用,能够改善因为热应激反应导致的线虫运动能力的降低;够降低氧化应激损伤产物的活性氧(Reactive oxygen specie,ROS)、MDA的水平;增加秀丽隐杆线虫体内抗氧化物GSH、T-SOD、Cu Zn-SOD的水平,降低秀丽隐杆线虫氧化应激损伤。(4)表儿茶素在金花茶总多酚中含量最丰富的多酚类成分,我们以表儿茶素为研究对象,探讨表儿茶素的抗氧化损伤作用。研究结果表明,50μM、100μM、200μM表儿茶素能够改善因为氧化损伤导致的线虫运动能力的降低;能够降低氧化损伤产物ROS、MDA的水平;提高抗氧化物活性,增加秀丽隐杆线虫体内抗氧化物GSH、TSOD、Cu Zn-SOD的水平。