中性粒细胞胞外捕获网对pSS患者疾病活动度及临床症状严重程度的影响研究

作     者：鞠美娇 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：顾志峰

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：原发性干燥综合征 中性粒细胞胞外捕获网 疾病活动度 

摘      要：背景:中性粒细胞胞外捕获网(Neutrophil Extracellular Traps,NETs)作为机体的一把双刃剑,参与了多种疾病的发病过程。随着对NETs越来越深入的探索,目前NETs与自身免疫性疾病之间的关系也渐渐浮出水面。例如,在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)、类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)等多种自身免疫性疾病的疾病严重程度及发生机制方面,均发现了NETs的参与。这些疾病中产生的各种抗体及细胞因子通过不同的途径可以激活中性粒细胞,其包膜破裂后释放出的染色质与一些抗菌蛋白等物质相结合形成的网状结构即为NETs。这种网状结构不仅可以加重组织器官的损伤还能进一步促进抗体及细胞因子的产生。但原发性干燥综合征(Primary Sjogren Syndrome,p SS)作为自身免疫疾病(Autoimmune Diseases,ADs)中比较常见的疾病,它与NETs之间的关系目前并不十分明确,本课题旨在初步探索NETs与p SS患者严重程度及疾病活动度之间的关系。方法:1.首先,本研究收集了2020年9月-2022年2月风湿免疫门诊就诊及住院诊治的p SS患者46例及与其性别年龄相对应的健康对照组(Healthy controls,HC)42例的新鲜血液样本及就诊结果的临床数据,与此同时还收集了与其相对应的p SS患者的欧洲抗风湿病联盟SS疾病活动度指数(ESSDAI)评分、欧洲抗风湿病联盟SS患者报告指数(ESSPRI)评分、口干量表(SXI)评分、安德森吞咽困难量表(MDADI)评分、医院焦虑抑郁量表(HADS)评分、口腔健康影响程度量表(OHIP-14)评分、眼部疾病评分量表(OSDI)评分、疲乏概况量表(Pro F)评分、疲劳严重程度量表(FSS)评分用来评估p SS患者疾病活动度及严重程度的相关量表,并按照各个量表的评分标准进行统计评分。2.2.其次,通过免疫荧光共定位的方法,分别将形成NETs的3种主要成分即髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)、组蛋白H3(histone,H3)及脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)进行染色并在正置荧光显微镜下观察采集图像,确定了p SS患者的外周血中存在中性粒细胞产生的NETs。再通过流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)等实验方法,对比了p SS患者及HC外周血中NETs的含量,进一步探究了NETs含量在原发性干燥综合征患者与健康对照组之间的关系。3.最后,应用SPSS 25.0统计软件将NETs浓度分别与p SS患者疾病活动程度及严重程度相关的ESSDAI评分、ESSPRI评分、SXI评分、MDADI评分、HADS评分、OHIP-14评分、OSDI评分、Pro F评分、FSS评分的相关性进行分析。结果:1.实验结果表明:免疫荧光共定位证明了NETs在p SS患者及正常人的外周血中均存在。流式细胞术结果提示NETs在p SS患者中的表达高于在健康对照组中的表达(15.5±7.38 vs 29.4±8.14,t=-2.949,P=0.016)。外周血血浆ELISA结果显示,与健康对照组相比,p SS患者外周血浆中MPO(5263.84±1225.757 vs 4393.58±1073.841,t=-3.52,P=0.001)浓度明显增加。2.相关性分析结果表明:(1)患者的ESSDAI评分与NETs形成呈正相关(r=0.309;P0.05)。(2)患者外周血中的MPO浓度与患者SXI评分、MDADI评分均有统计学意义(r2=0.379;r2=0.361,P0.05)。结论:本文不仅阐述了p SS患者NETs的含量高于健康对照组,同时还证明了原发性干燥综合征患者NETs浓度与患者的疾病活动度、口干程度、吞咽程度、焦虑及抑郁程度之间存在的相关性,即p SS患者NETs含量越高,口干程度越重,吞咽越困难,焦虑抑郁情绪越明显。综上