Vaccarin通过抑制NF-κB炎症信号通路改善急性肾损伤的研究

作     者：陈世庆 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：温家根

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：王不留行酮苷 脓毒症 顺铂 NF-κB FKBP5 

摘      要：急性肾损伤(actue kidney injury,AKI)是一种由多病因引起的临床反应综合征,也是临床常见的危重症之一。AKI的特点主要包括短时间内肾小球率过滤下降,肾功能急剧减退并伴有氮质产物如肌酐、尿素氮等升高,水、电解质和酸碱平衡紊乱。缺血缺氧、脓毒血症、肾毒性药物都是引起AKI的主要病因。AKI的病理特征主要包括小管细胞坏死、炎症反应增加和氧化应激等。目前,对于AKI尚无有效的治疗措施。长期以来,中医药(TCM)在中国,日本以及韩国的等周边国家被广泛用于治疗AKI及其并发症。一些基于中医的疗法在抑制炎症反应、程序性死亡和氧化应激等方面显示出高效的治疗效果。中药的治疗效果已在AKI的动物模型甚至患者中得到了验证。例如,血必净注射液可有效改善脓毒症引起的AKI患者的临床症状,汉黄芩素不仅可以保护顺铂诱导的AKI,还可以促进顺铂的抗肿瘤作用。王不留行(vaccarin)为石竹科植物麦蓝菜的干燥成熟种子,它是一味在中国已使用上千年的传统中草药,文献报道其具有抗炎活性、抗癌作用、抗氧化应激、抗凋亡,促进泌乳以及雌激素样等作用。王不留行黄酮苷是王不留行的主要活性成分,但其在AKI的防治方面鲜有报道。本课题经研究发现vaccarin在一定剂量范围内无显著细胞毒性;而且通过Real-time q PCR技术和Elisa试剂盒发现vaccarin可以抑制炎症因子的表达水平;通过免疫荧光分析也发现vaccarin可以抑制P65的磷酸化;Western blot的结果也进一步验证vaccarin可以抑制NF-κB炎症信号通路的表达,以上实验结果提示我们vaccarin可能通过抑制NF-κB发挥抗炎保护作用。构建脓毒症和顺铂诱导的急性肾损伤动物模型也发现vaccarin能够改善肾功能并提高模型存活率,HE染色结果也显示小鼠的病理学肾脏损伤显著减轻;通过Elisa试剂盒和Real-time PCR实验分析发现vaccarin能够抑制相关炎症指标的表达;通过Western blot和免疫荧光结果发现vaccarin能够抑制NF-κB相关信号通路的表达;通过免疫荧光分析也发现vaccarin减少了肾组织样本中巨噬细胞浸润。粘附实验也证明了vaccarin能够抑制人单核细胞(THP-1)在HUVECs表面的粘附。分子对接试验模拟计算出vaccarin与FKBP5亲和,又通过细胞热转移实验进一步证实了vaccarin与FKBP5靶向结合。以上实验结果提示vaccarin对脓毒症和顺铂诱导的急性肾损伤具有防治潜力,可作为潜在的有效治疗药物。