人舌鳞癌CAL-27细胞荷瘤裸鼠体内诱导顺铂耐药性的实验研究

作     者：苏萌 

作者单位：右江民族医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：姚金光

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：舌鳞状细胞癌 顺铂 肿瘤耐药性 上皮-间质转化 

摘      要：目的:本研究通过体内间歇诱导法构建出稳定表达顺铂耐药特性的CAL-27/CDDP细胞株,为研究舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma,TSCC）的顺铂耐药机制提供理想的细胞模型。在此基础上,深入探讨其与上皮-间质转化（epithelialmesenchymal transition,EMT）表型之间的联系,为充分阐明TSCC顺铂耐药性与EMT表型之间的相互调控机制奠定理论基础。方法:（1）体外培养人舌鳞癌CAL-27细胞,接种于裸鼠右腋中部皮下,观察肿瘤的形态学及组织病理学情况。（2）当移植瘤体积约达到0.5cm时,诱导组用顺铂5mg/kg进行腹腔内间歇注射,对照组则给予等容积生理盐水,1次/周,共8周,绘制肿瘤生长曲线,评估耐药时间。（3）利用原代培养建立顺铂敏感CAL-27细胞及顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞株,并检测其耐药指数（resistance index,RI）。（4）利用形态学观察和划痕愈合实验分别检测顺铂敏感CAL-27细胞及顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞的形态和迁移能力变化。（5）利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RTq PCR）和免疫荧光实验分别检测顺铂敏感CAL-27细胞及顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞中上皮钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等EMT相关分子标记蛋白的表达。结果:（1）荷瘤裸鼠移植瘤的形态学及组织学均符合人舌鳞癌CAL-27细胞的特征。（2）在顺铂体内间歇诱导5周时,移植瘤组织初步对顺铂产生耐药性。（3）组织块原代培养法成功建立顺铂敏感CAL-27细胞及顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞株,其中顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞比顺铂敏感CAL-27细胞的耐药性提高12.45倍,两组差异具有统计学意义。（4）顺铂敏感CAL-27细胞呈上皮细胞形态,而顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞呈现间质细胞形态,且其迁移能力明显增强,两组差异具有统计学意义。（5）RT-q PCR和免疫荧光实验显示,与顺铂敏感CAL-27细胞相比,顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞中E-cadherin的表达显著下调,而Vimentin的表达显著上调,两组差异具有显著统计学意义。结论:（1）本研究成功在人舌鳞癌CAL-27细胞荷瘤裸鼠体内诱导出顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞株,为研究TSCC的顺铂耐药机制提供一个理想的研究平台。（2）本研究证明了顺铂耐药CAL-27/CDDP细胞具有显著的EMT表型,为阐明TSCC顺铂耐药性与EMT表型之间的相互调控机制奠定理论基础。