浒苔多酚抗黑色素瘤活性及肠道菌群介导的功效研究

作     者：邱立 

作者单位：宁波大学 

学位级别：硕士

导师姓名：徐大伦;邹祖全

授予年度：2022年

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 1002[医学-临床医学] 08[工学] 100214[医学-肿瘤学] 083201[工学-食品科学] 10[医学] 

主      题：浒苔多酚 黑色素瘤 分子机制 肠道菌群 长短链脂肪酸 

摘      要：黑色素瘤是全球较为常见的恶性肿瘤之一,具有高度侵袭性和转移性,一直是科研界研究的热点。植物多酚已被报道对乳腺癌、结肠癌、肝癌和黑色素瘤等多种癌症有预防作用,且对正常细胞无毒副作用,而浒苔多酚作为一种天然来源、具有高活性的生物分子,其对黑色素瘤的预防效果尤其是如何发挥抗肿瘤作用的具体机制还仍然未知。因此,本文以浒苔多酚为受试对象,初步探讨其在体内外抗黑色素瘤作用及其可能的分子和肠道菌群介导机制,为浒苔多酚作为海洋资源的开发与利用提供理论依据与数据支撑。主要结果如下:(1)浒苔多酚体内外抗肿瘤作用研究。体外以人源黑色素瘤A375细胞和鼠源黑色素瘤B16F10细胞为研究对象;体内以C57BL/6小鼠为研究对象,通过皮下注射肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,并将其分为模型对照组(Control组)、低剂量浒苔多酚组(LEPP组)和高剂量浒苔多酚组(H-EPP组),综合评价浒苔多酚的抗肿瘤效果。体外实验结果表明,与模型对照组相比,浒苔多酚以剂量依赖方式抑制肿瘤细胞的增殖,改变肿瘤细胞形态并诱导其发生脂质过氧化;体内实验结果表明,与对照组相比,浒苔多酚能显著减轻移植瘤的重量以及缩小移植瘤的体积;降低AST、ALT、LDH以及AKP含量,保护肝组织;改善结肠组织炎性浸润症状,同时减缓荷瘤小鼠肝脏、脾脏和胸腺的肿大。(2)浒苔多酚体内抗肿瘤分子机制研究。采用免疫印迹技术,分别对移植瘤中的氧化应激、凋亡以及自噬相关表达蛋白进行检测。结果显示,与模型对照组相比,浒苔多酚上调了与氧化应激相关蛋白GPX4、Nrf2、Keap-1和HO-1的表达;上调了与凋亡相关蛋白FAS、FADD、PARP、Caspase-3、Cyto-c和BAX的表达,同时下调Bcl-2蛋白的表达;上调了与自噬相关蛋白p62的表达,下调LC3BⅡ及Beclin-1蛋白表达,并激活了PI3K/AKT/m TOR信号通路。结果表明浒苔多酚通过诱导肿瘤细胞产生氧化应激和致死性凋亡,同时抑制其发生保护性自噬从而达到抗黑色素瘤活性的目的。(3)浒苔多酚对荷瘤小鼠肠道菌群的影响。采用16Sr DNA测序技术研究浒苔多酚对荷瘤小鼠肠道菌群的影响。结果显示,经浒苔多酚处理后,荷瘤小鼠肠道菌群的丰富度和多样性明显升高且结构发生显著改变,使之更趋向于空白对照组(CK组);在门水平上,浒苔多酚有效逆转了荷瘤之后小鼠肠道菌门B/F比值的降低;在属水平上,增加了产短链脂肪酸菌属别样棒菌属(Allobaculum)和栖海面菌属(Aequorivita)的相对丰度,减少了致病菌普雷沃菌(Prevotella)、真杆菌属(Eubacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)和凝聚杆菌属(Aggregatibacter)的相对丰度,优化了菌群结构,维持了肠道内部稳态。(4)浒苔多酚对荷瘤小鼠肠道代谢物的影响。采用气相色谱技术检测荷瘤小鼠肠道内长短链脂肪酸的含量。结果显示,浒苔多酚增加了荷瘤小鼠粪便中短链脂肪酸以及多不饱和脂肪酸的含量,减少了饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的含量,而长短链脂肪酸这些代谢物的变化与肠道菌群的调节具有高度相关性。